辛伐他汀对脐静脉内皮细胞金属基质蛋白酶9表达的影响

目的观察辛伐他汀对脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）金属基质蛋白酶9（matrix metalloproteinase-9,MMP-9）表达的影响。方法采用逆转录聚合酶链反应及蛋白质免疫印迹分析检测MMP-9mRNA转录和蛋白水平表达,观察辛伐他汀不同浓度及不同孵育时间HUVECMMP-9表达的影响。结果辛伐他汀呈浓度和时间依赖性减低HU-VEC的MMP-9mRNA转录和蛋白水平的表达。结论辛伐他汀可抑制HUVE CMMP-9表达,防治动脉粥样硬化。     

高糖对原代人脐静脉内皮细胞的损伤作用及机制研究

目的 观察高浓度葡萄糖对原代人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVECs)的损伤作用,并探讨其损伤机制.方法 分别用低浓度葡萄糖(LG组,5.5 mmol/L)和高浓度葡萄糖(HG组,35 mmol/L)培养基培养HUVECs 24、72、120 h,胆囊收缩素八肽(CCK-8)检测高糖对HUVECs存活率影响,荧光探针检测细胞活性氧(ROS)、一氧化氮(NO)水平,蛋白免疫印迹检测Bax、Bcl-2、沉默信息调节因子1(silent mating type informationregulation 2 homolog 1,SIRT1)和一氧化氮合酶(eNOS)的表达.结果 HG组处理72、120 h细胞存活率、Bcl-2均低于LG组,ROS水平、Bax和Bax/Bcl-2高于LG组,差异有统计学意义(P＜0.05).HG组处理HUVECs 24、72、120 hSIRT1和NO相对含量低于LG组,处理72、120 h eNOS低于LG组(P＜0.05).结论 高糖可使HUVECs存活率下降,增强细胞内氧化应激反应,提高Bax/Bcl-2比值,可能与抑制SIRT1-eNOS通路使NO生成减少有关.     

高糖对人脐静脉内皮细胞TLR4表达的影响

目的观察高糖对人脐静脉内皮细胞TLR4表达的影响,比较加用脂多糖后不同浓度的高糖培养下对人脐静脉内皮细胞TLR4表达水平变化。方法将体外培养人脐静脉内皮细胞株分对照组（5mmol/LGS）、高糖组（10mmol/LGS、20mmol/LGS、40mmol/LGS）、高糖＋LPS组（10mmol/LGS、20mmol/LGS、40mmol/LGS/＋100ng/LLPS）,培养24h后,用ELISA法检测各组上清IL-6水平,实时定量PCR检测各组细胞TLR4及MyD88基因表达水平。结果 （1）高糖培养能促使人脐静脉内皮细胞产生IL-6水平增加,具有统计学意义（P〈0.05）,在LPS诱导下高糖能进一步促进该细胞产生IL-6,具有统计学意义（P〈0.05）。（2）随着葡萄糖浓度增高,从5mmol/L到20mmol/L,人脐静脉内皮细胞产生的IL-6逐渐增多,具有统计学意义（P〈0.05）,但再增高糖浓度（到40mmol/L）,该细胞产生IL-6水平不再继续增加（P〉0.05）。（3）在LPS存在的前提下,高糖能诱导人脐静脉内皮细胞TLR4和MyD88基因表达增加,具有统计学意义（P〈0.05）,但仅高糖培养对该细胞TLR4和MyD88基因表达无影响（P〉0.05）。结论高糖能刺激人脐静脉内皮细胞炎症反应,使炎症因子IL-6产生增多,但对TLR4和MyD88表达无明显增高;而高糖联合LPS培养能诱导人脐静脉内皮细胞TLR4和MyD88表达上调,说明高糖在LPS存在前提下可能激发TLR4信号通路。     

芍药内酯苷对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的 研究芍药内酯苷对高糖损伤的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的保护作用及机制.方法 采用33mmol·L-1的高糖培养基建立HUVECs损伤模型,并在造模前给予不同浓度的芍药内酯苷进行预保护,采用MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,采用试剂盒检测细胞中内源性一氧化氮合酶（eNOS）和半胱天冬酶-3（Caspase-3）活性以及培养液中一氧化氮（NO）和乳酸脱氢酶（LDH）含量.结果 芍药内酯苷能够剂量依赖性增强细胞活力,降低Caspase-3活性和细胞凋亡率（P＜0.05）,并能增强eNOS的活性和NO的释放量（P＜0.05）.结论 芍药内酯苷对高糖诱导的HUVEs损伤具有保护作用,其机制可能与促进eNOS活性提高、NO释放量增加和抑制Caspase-3活性有关.     

虫草素对高糖诱导脐静脉内皮细胞凋亡的保护作用研究

目的探讨虫草素对高糖环境下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用及其机制。方法原代培养HUVECs,实验分为空白对照组、模型组、对照组、抑制剂A组、抑制剂B组、干预A组、干预B组和低、中、高浓度虫草素组。空白对照组给予正常糖浓度(5.5 mmol·L^-1);模型组给予40 mmol·L^-1高糖孵育48 h;对照组给予10μmol·L^-1白藜芦醇+高糖;低、中、高浓度虫草素组分别给予1,10,20μmol·L^-1虫草素+高糖;抑制剂A组给予1μmol·L^-1 CLI-095+高糖;抑制剂B组给予100 nmol·L^-1西罗莫司+高糖;干预A组给予1μmol·L^-1 CLI-095+20μmol·L^-1虫草素+高糖;干预B组给予100 nmol·L^-1西罗莫司+20μmol·L^-1虫草素+高糖。用5-溴脱氧尿嘧啶核苷-酶联免疫吸附法检测光密度值观察细胞增殖能力,用Annexin V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶流式细胞术检测细胞凋亡率,用实时荧光定量聚合酶链反应检测沉默信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)mRNA的表达水平,用Western Blot检测SIRT1蛋白的表达水平。结果模型组、对照组和低、中、高浓度虫草素组以及干预A组、干预B组的增殖能力(光密度值)分别为(1.38±0.11),(1.86±0.06),(1.44±0.03),(1.60±0.05),(1.70±0.08),(1.85±0.04)和(1.85±0.06),细胞凋亡率分别为(6.72±1.00)%,(0.56±0.37)%,(3.86±0.16)%,(2.64±0.23)%,(2.16±0.15)%,(1.57±0.28)%和(0.86±0.20)%,SIRT1 mRNA表达相对倍数分别为(0.24±0.05),(2.97±0.41),(0.62±0.07),(1.37±0.18),(2.14±0.35),(3.45±0.76)和(3.02±0.79)。模型组、对照组、高浓度虫草素组、抑制剂B组和干预B组的SIRT1蛋白表达分别为(0.82±0.11),(1.14±0.29),(0.98±0.13),(0.74±0.19)和(1.30±0.20)。对照组和高浓度虫草素组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。干预A组和干预B组的细胞增殖力及SIRT1 mRNA表达水平与高浓度虫草素组比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。干预B组细胞凋亡率与高浓度虫草素组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。干预B组SIRT1蛋白表达与抑制剂B组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论虫草素可能通过促进SIRT1表达,从而起到保护高糖损伤的内皮细胞作用。     

感染Ad-HGF对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的影响

目的 探讨高糖条件下感染携带肝细胞生长因子的重组腺病毒(Ad-HGF)对人脐静脉内皮细胞(humanumbilical vein endothelial cells,HUVECs)凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达的影响.方法 将HUVECs分为低糖组(LG组,5.5 mmol/L)、高糖组(HG组,35 mmol/L)、腺病毒对照组(HG+ Ad-GFP组)和实验组(HG+ Ad-HGF组).检测4组HUVECs增殖情况、细胞内活性氧(ROS)水平及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达.结果 HG组、HG+ Ad-GFP组HUVECs存活率低于LG组,HG+ Ad-HGF组高于HG组(P＜0.05,P＜0.01).HG组、HG+ Ad-HGF组HUVECs内ROS水平高于LG组,但HG+ Ad-HGF组低于HG组(P＜0.05).HG组、HG+ Ad-GFP组Bax、Bax/Bcl-2高于LG组,Bcl-2低于LG组,但HG+ Ad-HGF组Bax、Bax/Bcl-2低于HG组,Bcl-2高于HG组(P＜0.05).结论 感染Ad-HGF可通过降低细胞内ROS水平和Bax/Bcl-2减少细胞凋亡,进而对高糖诱导的HUVECs起到保护作用.     

皮质醇对人脐静脉内皮细胞迁移功能的影响及机制研究

目的 探讨皮质醇抑制血管新生的机制.方法 将体外培养G0/G1期的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分为皮质醇组(无血清RPMI1640培养液中加入皮质醇)和对照组(仅用无血清RPMI1640培养液),细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞存活率,细胞迁移实验观察皮质醇对细胞迁移的影响,酶联免疫吸附法测定细胞中人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和基质细胞衍生因子1(SDF1)含量,蛋白质印迹法测定细胞缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达.结果 皮质醇组细胞活力与对照组相比无明显差异;细胞迁移数目明显少于对照组,差异有统计学意义[ (618 ±117)个比(1200 ±57)个,P=0.00011];bFGF、SDF1与NO水平明均明显低于对照组[bFGF为(69.7 ±5.7) ng/L比(99.3±11.0) ng/L,P＜0.01;SDF1为(10.2 ±2.1)ng/L比(12.4 ±2.5)ng/L,P＜0.05;NO为(58.5±10.3)μmol/L比(97.3±6.2)μmol/L,P=0.03407].结论 皮质醇对HUVEC细胞活力无明显抑制作用,但可以明显抑制其迁移功能,并降低细胞中NO、bFGF、SDF1的含量,这可能是皮质醇抑制HUVEC迁移的作用机制.     

高糖对人脐静脉内皮细胞凋亡及bcl-x、bax和 eNOS表达的影响

目的:探讨高糖对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响,及其与bcl-x、bax和eNOS表达的相关性。方法:将培养成功的HUVEC以不同浓度的葡萄糖孵育72h,提取细胞总RNA。采用半定量逆转录聚合酶链反应(SQ-RT-PCR)法检测内皮细胞bcl-x、bax以及eNOS表达。用吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)荧光染色法进行内皮细胞凋亡定性。结果:高浓度葡萄糖(33.3mmol)可诱导HUVEC凋亡增加(P<0.01),eNOS及bcl-x表达减弱。HUVEC凋亡与eNOS表达呈负相关。结论:糖尿病状态下高血糖诱导内皮细胞凋亡,可能与bcl-x及eNOS表达减弱有关。     

吡格列酮对波动性高糖处理的人脐静脉内皮细胞脂联素受体表达的影响

目的探讨吡格列酮对波动性高糖处理的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)脂联素受体(AdipoR1和AdipoR2)表达的影响。方法将HUVEC在波动性高糖培养液(5.5、20mmol.L-1每隔8h轮换1次)中培养5d后,随机分为阴性对照组、吡格列酮处理组(10、1与0.1μmol.L-1)和阳性对照组。应用实时定量PCR方法检测脂联素受体mRNA表达的改变。结果与波动性高糖组比较,吡格列酮处理后HU-VECAdipoR1表达增高。当吡格列酮浓度增至1μmol.L-1以上时,AdipoR1mRNA表达增加呈现差异。各组细胞Adi-poR2表达量间差别无显著性。结论AdipoR1很可能是胰岛素增敏剂吡格列酮改善内皮胰岛素敏感性的作用机制之     

重组腺病毒对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞一氧化氮生成的影响及机制

目的 观察感染携带肝细胞生长因子的重组腺病毒(Ad-HGF)对高糖诱导的原代人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial ceils,HUVECs)一氧化氮(NO)生成的影响,并探究其机制.方法 将HUVECs分为低糖组(LG组)、高糖组(HG组)、腺病毒对照组(HG+ Ad-GFP组)和实验组(HG+Ad-HGF组),感染48 h后,采用NO荧光探针检测细胞内NO水平,蛋白免疫印迹法(Westren Blot)分别检测各组细胞鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase1,SPHK1)、沉默信息调节因子2相关酶类1(silent mating type information regulation 2 homolog 1,SIRT1)和内皮型一氧化氮合酶(endothelial ntric oxide synthase,eNOS)蛋白表达.结果 HG组HUVECs细胞内NO水平及SIRT1和eNOS蛋白表达水平低于LG组,HG+ Ad-HGF组高于HG组(P＜0.05),但4组间SPHK1表达水平比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Ad-HGF可通过激活SIRT1-eNOS-NO通路保护HUVECs免受高糖损伤.     

高糖对人肾小球系膜细胞MPO、GSH-ST活性和ICAM-1表达影响及茶多酚的干预作用

目的 探讨高糖对人肾小球系膜细胞髓过氧化物酶(MPO)、谷胱甘肽-硫转移酶(GSH-ST)活性和细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的影响及茶多酚对其的干预作用.方法 应用分光光度比色法检测高糖作用后系膜细胞上清液中MPO、GSH-ST活性及茶多酚对其活性的改变;免疫细胞化学法和Western印迹检测高糖作用后系膜细胞内ICAM-1蛋白的表达及茶多酚对其表达的影响.结果 高糖使系膜细胞上清液中MPO活性增加,GSH-ST活性降低,使系膜细胞内ICAM-1表达增加;茶多酚可显著改善高糖对系膜细胞的影响.结论 高糖导致人肾小球系膜细胞氧化失衡,增强ICAM-1的表达;茶多酚可有效干预高糖的作用.     

高糖对HUVEC功能的影响及机制研究

目的观察葡萄糖对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)活性功能的影响及机制研究。方法内皮细胞培养液体外培养HUVEC,用不同浓度(10、20、30、40、50mmol/L)的葡萄糖作用于HUVEC,用NO含量、eNOS活性检测、细胞凋亡测定和细胞内ROS检测方法,观察不同浓度葡萄糖作用后的HUVEC功能活性的影响。结果高糖对HUVEC的增殖活性具有剂量依赖性抑制作用。高糖剂量依赖性抑制HUVEC细胞eNOs活性、NO的产生,增强细胞凋亡和细胞内ROS的生成。结论葡萄糖对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)活性功能具有抑制作用,其机制与增强细胞凋亡和增加细胞内ROS有关。     

蛹虫草提取物对高糖诱导内皮细胞衰老的影响

目的：探讨蛹虫草乙酸乙酯提取物（CME）对高糖诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）衰老的影响。方法：用高糖（40mmol／L）诱导建立HUVECs衰老体外模型,以冬虫夏草提取物（CSE）（50μg／mL）为阳性对照,观察CME（12．5～100μg／mL）对内皮细胞衰老的干预作用。四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖;SA—β-半乳糖酐酶（SA—β—gal）染色法检测细胞衰老特异性的SA—β—gal活性;流式细胞术检测细胞周期分布和细胞内活性氧（ROS）含量。结果：经高糖干预24、48、72h后,HUVECs增殖活性OD值明显低于对照组;而且在高糖孵育96h后,SA—β-gal染色阳性细胞率明显增加;孵育48h后,处于G0／G1期细胞的百分率和ROS相对水平明显增加（P〈0．01）。与高糖组相比,CME（25～50μg／mL）孵育48和72h后细胞OD值显著提高（P〈0．05）;CME（12．5～100μg／mL）孵育96h后SA-β-gal染色阳性细胞率显著降低（P〈0．01）;孵育48h后Go／G1期的细胞百分率（P〈0．01）、细胞内ROS水平显著降低（P〈0．05）;CME25、50／μg／mL效果优于CME12．5、100〉g／mL（P〈0．05）,且与CSE50ptg／mL作用相近（P〉0．05）。结论：蛹虫草乙酸乙酯提取物可促进内皮细胞生长增殖,可能与其降低细胞内ROS水平,减轻细胞氧化应激损伤有关,从而减轻内皮细胞衰老。     

溶血卵磷脂对血管内皮细胞增殖及凋亡的影响

目的观测溶血卵磷脂(LPC)对血管内皮细胞增殖及凋亡的影响,从而探讨动脉硬化发生的机制。方法取体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs),在含不同浓度LPC(5、10、20mg/L)的培养基中分别培养6、12、24、48h,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、流式细胞仪、荧光显微镜观测血管内皮细胞增殖及凋亡的变化。结果与正常对照组比较,LPC抑制内皮细胞增殖,促进细胞凋亡,且其作用呈时间-效应、浓度-效应依赖关系,但随着LPC浓度增加,细胞凋亡增加的同时细胞死亡比例也增加。结论LPC抑制血管内皮细胞增殖,促进细胞凋亡,可能是其致动脉粥样硬化机制之一。     

波动性高糖对人脐静脉内皮细胞炎症因子表达的影响

目的研究体外波动性和持续性高糖对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）炎症因子表达的影响。方法分别在正常葡萄糖（5.5 mmol/L,NG）、持续性高糖（25 mmol/L,PHG）、波动性高糖（5.5 mmol/L和25 mmol/L葡萄糖每24 h交替,OHG）和波动性高渗环境（不加入葡萄糖,加入不同量甘露醇控制渗透压与波动性高糖组一致,OC）中连续培养HUVEC 7d。采用ELISA法和实时定量PCR法分别检测HUVEC在不同血糖环境中白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和细胞间黏附因子-1（ICAM-1）中蛋白和mRNA的表达。结果与NG组和OC组比较,发现持续性高糖可以显著升高HUVEC的IL-6、TNF-α和ICAM-1蛋白表达（P〈0.05）,而波动性高糖可以进一步放大这种差异（P〈0.05）。在mRNA水平,PHG组较NG组和OC组显著增加IL-6、TNF-α和ICAM-1表达（P〈0.05）,而这一趋势在波动性高糖组最为明显（P〈0.05）。结论持续性高糖可以显著增强HUVEC炎症反应,而波动性高糖进一步放大这一效应。     

乌司他丁对脂多糖诱发的单层人脐静脉内皮细胞高通透性的影响及其机制

目的 探讨乌司他丁对脂多糖(LPS)诱发的单层人脐静脉内皮细胞(HUVECs)高通透性的影响及其可能机制.方法 体外培养的单层 HUVECs被分为对照组、LPS组(LPS 1μg/ml刺激4 h)、乌司他丁复合LPS组(乌司他丁3000 U/ml孵育1 h+LPS 1μg/ml刺激4 h)和血管内皮钙黏蛋白单克隆抗体(VE-cadherin mAb)组(VE-cadherin mAb 50μg/ml孵育6 h+乌司他丁3000 U/ml孵育1 h+LPS 1μg/ml刺激4 h).采用双腔系统Transwell法检测单层 HUVECs的通透性 , Western blot法检测HUVECs中VE-cadherin的表达水平.结果 与对照组相比,LPS组单层HUVECs渗透性增高 ,VE-cadherin表达降低(P＜0 .01).与LPS组相比 ,乌司他丁复合LPS组单层HUVECs渗透性降低 ,VE-cadherin表达增高(P＜0 .01).与乌司他丁复合LPS组相比 ,VE-cadherin mAb组单层HUVECs渗透性增高 ,VE-cadherin表达降低(P＜0 .01).结论 乌司他丁预处理可改善LPS引起的单层HUVECs高通透性状况 ;其可能机制与VE-cadherin表达增多有关.     

Apoptosis of human umbilical vein endothelial cells induced by artesunate

Artesunate (ART), a semi-synthetic derivative of artemisinin isolated from the traditional Chinese herb Artemisia annua, is an effective novel antimalarial drug. The present study investigated the apoptotic activity of artesunate in cultured human umbilical vein endothelial cell (HUVEC) by means of nuclear staining, DNA agarose gel electrophoresis, and flow cytometry. The observations also indicated that artesunate induced apoptosis of HUVEC in a concentration-dependent and time-dependent manner. A Western immunoblot analysis showed down-regulation of the bcl-2 protein and up-regulation of the bax protein in the artesunate-treated HUVEC. Ca2+ in cells was evaluated by fluorescent spectrophotometer using Fura 2-AM as probe. These results suggest that artesunate may be a potential apoptosis-inducing agent for endothelial cells.