获能液和DMSO对猪精子获能效率的影响

为了探讨获能液和二甲基亚砜(DMSO)对猪精子获能效率的影响,试验采用SPSS 14.0软件进行分析,各处理平均值采用邓肯氏多重比较。结果表明:CM获能液获能3小时时超激活运动率为57.9%;mTBM获能液获能4小时时超激活运动率为55.7%;0.1%DMSO获能液获能30分钟时精子活率为70.20%,顶体反应率为70.44%,与其他组相比差异显著(P<0.05)。     

获能液及精子密度对牛性控精子体外受精成功率的影响

本实验探讨了不同的精子获能添加物、精子密度、精子获能液对牛性别分离精子体外受精（IVF）的影响。结果表明：受精液中同时添加10μg/mL的肝素与5mmol／L的咖啡因,能促进牛性控精子体外获能与受精。精子密度在1．0×10^6个/mL时其囊胚发育率最高。用BO液和mTyrode’s液对牛性控精子进行获能和受精处理．其受精效果差异不显著（P〉0．05）,但BO液作用时间短对早期胚胎的发育影响较小,比较适合牛性控精子IVF。     

不同获能条件对猪精子体外获能和体外受精的影响

探讨猪精子在mTBM和TALP中分别获能2、3、4、5h和6h对体外获能的影响,并研究最适获能时间的精子体外受精的效果。结果表明:随着获能时间的延长,猪精子顶体反应率逐渐升高、质膜完整性逐渐下降,获能6h时的顶体反应率显著高于其他时间组,分别为52.5%和50.8%(P<0.05);质膜完整性显著低于其他时间组,分别为30.5%和31.4%(P<0.05);可获能4h的超激活运动率显著高于其他时间组,分别为56.6%和54.5%。将鲜精与冻融的精子获能4h后与成熟的猪卵母细胞进行体外受精,mTBM处理组的卵裂率显著高于TALP,分别为42.7%与40.2%和35.9%与33.4%,但鲜精与冷冻精液组间差异不显著。     

猪精液处理对精子获能时间的影响

青年母猪的排卵时间,用口服 altreno-gest(17-allye-hydroxyestra-4,9,11-trien-3-one),接着注射促性腺激素的方法来控制。在注射绒毛膜促性腺激素之后的42—44小时,给母猪剖腹。精液按下述方法之一处理后用手术法把精子输入已暴露出的输卵管内。冷冻精液融解在贝兹维尔解冻液内(F—BTS)或精清内(F—SP);未冷冻精液直接稀释在贝兹维尔解冻液内(U—BTS)或精清内(U—SP)。在输精后5和24小时收集卵子,并确定其发育程度。在5小时,F-BTS 和 U—BTS 精子使卵受精的比率(分别为45%和69%)显著高于 F-SP 和 U—SP精子(分别为5%和34%)。在两次集卵时均发现,用 F—BTS 和 U—BTS 精子受精的卵子比用 F-SP 和 U-SP 精子受精的卵发育程度更高。在输卵管输精后5小时,未冷冻精子(U-BTS 或 U-SP)的受精卵子数超过 F—BTS或 F-SP精子(P<0.005);在24小时,各种处理方法的受精卵百分率相似。结果表明,精液处理将公猪精子的获能时间减少到与精子通过子宫长度的时间相似的程度。经冷冻—融解精子的获能时间同未冷冻精子相似。     

不同抗氧化剂对牛精子体外获能效果的影响

为探讨褪黑素、亚牛磺酸、左旋肉毒碱三种抗氧化剂对牛精子体外获能效果的影响,将荷斯坦牛细管冻精解冻后,各取200μL精液分别添加在含10~(-4) M褪黑素(MLT)、20μM亚牛磺酸(HT)、10 mM左旋肉毒碱(LC)的获能液中,经上游处理45 min,采用目测法、金霉素(CTC)染色法评估三种抗氧化剂对牛精子活力、精子获能状态的影响。结果表明:添加10~(-4) M MLT、20μM HT、10 mM LC经上游法获能处理后的牛精子活力(83.67%、80.65%、75.00%vs 66.67%)均显著高于对照组(P0.05),而顶体反应率(9.87%、10.09%、14.30%vs 18.73%)均显著低于对照组(P0.05)。另外,添加10 mM LC、10~(-4) M MLT组获能处理后B型精子所占比率(37.26%、29.84%vs 16.26%)均显著高于对照组(P0.05),且10 mM LC组精子获能率最高;而20μM HT组与对照组无明显差异(22.80%vs 16.26%,P0.05)。因此,添加10 mM LC、10~(-4) M MLT可改善精子体外获能效果,有助于提高体外受精的受精率及早期胚胎的质量。     

谷胱甘肽对兔精液获能作用及获能相关基因表达的影响

笔者通过试验研究不同浓度还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)对精子获能的影响,以及与获能有关的关键基因在获能后相对表达量的差异。笔者在获能液中加入不同浓度GSH(0 mg/m L、5 mg/m L、10 mg/m L、15 mg/m L、20 mg/m L),并将其分别与精子悬液一同培养,以孕酮诱导顶体反应,通过涂片染色镜检得到顶体发生率;另外,试验中采用实时荧光定量PCR来得到获能相关基因蛋白激酶A催化亚单位β(PRKACB)和ACP6(acid phosphatase 6,lysophosphatidic)在获能后的表达。结果表明,获能液中添加GSH对兔精子获能有一定的影响。     

精子获能鉴定方法研究进展

精子获能是哺乳动物受精过程和体外受精技术中的关键环节。本文主要对获能精子的超激活运动、顶体反应、去能因子及呼吸能变化等鉴定方法进行了综述。     

获能处理对山羊精子结合外源DNA能力的影响

鲜精离心洗涤除去精浆,然后用0.4 μmol/L钙离子载体(IA组)作用10 min或用10 mg/L肝素(HE组)作用90 min获能后,与DNA孵育,再用地高锌(DIG)末端标记的线形外源DNA进行转染,用免疫组化的方法分别检测它们的转染效率;用透射电镜观察精子获能前后的超微结构变化,并用碘化丙锭和羟化荧光素双探针检测获能对精子质膜完整性的影响,探讨精子获能影响精子结合及内化外源DNA变化的原因.结果显示,获能处理降低了精子结合和内化外源DNA能力,IA组和HE组结合率分别为(17.41±4.69)%和(15.00±4.36)%,都极显著低于未经获能处理的精子(32.97±4.58)%(P<0.01).IA组、HE组和对照组(未获能)内化率分别为(12.09±2.50)%、(8.93±1.79)%和(25.52±2.57)%,IA组、HE组均极差异小于对照组(P<0.01).超微结构观察和双荧光探针检测都发现精子获能后质膜完整性降低.用IA或HE获能后的精子质膜完整率是分别是(33.16±6.46)%和(33.90±4.14)%,与对照组差异极显著(P<0.01).结果表明,精子结合及内化外源DNA不是纯粹的分子渗透现象,而是受严格的分子调控的.     

CTC法结合体外受精比较不同方法对绵羊精子体外获能的影响

为比较不同获能方法对绵羊精子的获能效果，新鲜绵羊精液分别经肝素上游法(swim-up)、钙离子载体(IA，A23187)诱导法、Percoll离心法和Percoll离心后肝素孵育法进行精子获能的诱导后与体外成熟的绵羊卵母细胞进行体外受精，并利用金霉素荧光染色（chlortetracycline，CTC）法结合各自相应的体外受精结果对其获能效果进行检验。结果显示上游法处理后精子的获能比例和受精后的卵裂率均高于其它组, 说明肝素上游法可以较好的诱导绵羊精子获能。     

葡萄糖对牛精子体外获能及体外受精的影响

哺乳动物精子在离开生殖道时,还不具备受精能力,必须在雌性生殖道中经过一段时间的成熟,才获得受精能力,即精子获能,该过程也可在体外适宜的环境中完成,称之为体外获能。在这个过程中,葡萄糖是重要的能源物质,并且获能过程中的葡萄糖对随后的胚胎发育也有很大影响。Francoise U     

肝素对山羊精子体外获能的影响

哺乳动物的精子在刚射入雌性生殖道时,或从附睾取时,并不具备受精能力,必需在雌 性生殖道内经过一段时间,发生生理及形态学的变化才能获得受精能力,这一现象是被美籍 华人科学家张明觉和澳大利亚科学家Austin发现的,后来被Austin称为精子获能(Sperm Cap acitation) .获能是哺乳动物精子的成熟过程和受精的必要前提,影响获能的因素有很多 ,如肝素、钙离子载体、温度、pH等.而肝素在多种动物身上被证实对精子的体外获能有很 好的诱导作用.肝素中高度硫酸化的氨基多糖GAG可促使精子对钙离子的吸收,从而诱发顶体反应.     

钙离子浓度对绵羊精子获能的影响

为探讨钙离子浓度对绵羊精子获能的影响,将绵羊精子在不同钙离子浓度的绵羊输卵管合成液（SOF液）中培养,并用钙离子载体A23187进行诱导。结果发现,不同钙离子浓度对绵羊精子的影响差别不明显,经A23187诱导后,1.7 mmol/L组和2 mmol/L组的顶体反应率（AR）与其他组有显著差异（P<0.05）,1.7 mmol/L浓度中,绵羊精子存活时间为16 h,2 mmol/L浓度中的存活时间为10 h,因此认为绵羊精子获能的适宜钙离子浓度为1.7 mmol/L,且获能过程中钙离子的存在是必要的。     

获能处理对猪精子质量及泛素对顶体酶抑制剂水平调控的影响

【目的】探究猪精子体外获能前后顶体酶抑制剂(AI)表达量以及AI的泛素化水平的变化,了解AI与泛素-蛋白酶体系统(UPS)间的联系,为深入研究泛素-蛋白酶体途径(UPP)在猪精子获能过程中的作用提供参考。【方法】选择18～24月龄的成年健康长白公猪,使用手握法采集公猪精液,将一部分精子进行获能处理,一部分作为对照(鲜精),使用计算机辅助精子分析系统(CASA)、低渗肿胀法(HOST)、考马斯亮蓝染色、Western blotting和锌离子(Zn²⁺)标记检测获能前后精子的动力学参数、质量参数、酪氨酸磷酸化水平和Zn²⁺含量;Western blotting检测获能前后精子中AI和泛素(Ub)的表达量;免疫荧光法检测AI和Ub在精子中的定位;免疫共沉淀分析AI和Ub的结合情况。【结果】与新鲜精子相比,获能精子动力学参数VSL和BCF极显著升高(P<0.01),获能精子的活力、质膜完整性、顶体膜完整性、活率均极显著降低(P<0.01);获能精子蛋白酪氨酸磷酸化水平极显著升高(P<0.01),Zn²⁺极显著...     

钙离子载体及咖啡因对绵羊精子获能的影响

通过添加不同浓度(0.05、0.1、0.2、0.5、1、5、10μmol/L)的钙离子载体(A23187,IA)及2 mmol/L咖啡因,探讨不同作用时间其对绵羊精子体外获能的影响。结果发现,IA浓度越高,精子的体外获能率越高,顶体反应率越低,活力越低,死精子就越多;而延长作用时间对获能、顶体反应的影响不明显。IA和咖啡因共同作用后,咖啡因能够促进IA诱导顶体反应的发生。建议用IA诱导绵羊精子获能时,其浓度以0.05~0.2μmol/L为宜,作用时间1 min。     

培养液中不同浓度肝素对蓝狐精子体外获能的影响

采用上游法分离优化精子,以mTyrod's液作为基础培养液检测培养液中不同质量浓度肝素对蓝狐精子体外获能的影响,试验设4个肝素质量浓度:0,10,20,50 μg/mL,38.5℃、5%C02培养箱进行孵育,获能培养时间为6h.利用考马斯亮蓝染色法检测精子顶体反应率,伊红-苯胺黑染色法检测活精子比率,观测法检测精子活力...