高活性漆酶产生菌的发酵条件优化

对云芝菌产漆酶的发酵条件进行优化,考察C源、N源和诱导剂等因素对产酶的影响.结果表明:杂色云芝菌摇瓶产漆酶的最佳条件为葡萄糖1.25 g/L,羧甲基纤维素钠15 g/L,酵母膏15 g/L,KH2PO41 g/L,CaCl20.05 g/L,MgSO40.25 g/L,30℃、150 r/m条件下振荡培养,在72 h加入2 mmol/L 2,5-二甲基苯胺作为诱导剂,在96 h加入2 mmol/L Cu2+,经过7 d培养,菌的漆酶比活达到3 319.2 U/mL.     

云芝、脉射菌产木质素降解酶的比较研究

对两种白腐菌——云芝(Coriolus versicolor)和脉射菌(Phlebia radiata)在静置液体培养条件下最适产漆酶和赖锰过氧化物酶(MnP)的培养液组成进行了比较研究,同时,还对此二菌在产酶过程中还原糖的消耗与蛋白质积累变化进行了检测分析。     

菌种L3深层发酵产漆酶及其对废水脱色的研究

对菌种Trametes versicolor SYBC-L3发酵产漆酶的碳氮源进行了优化,研究了菌株L3漆酶的性质及其在毛纺废水脱色中的作用。结果表明,其最佳发酵碳氮源为:麦芽糖12g/L、豆粕4g/L,优化后的漆酶的酶活在第8天可高达48400U/L;酶最适反应温度为50℃,在70℃以下保温1h,仍然有70%的剩余活力,其最适pH为3.5,在pH4～8下保温24h,仍然有70%以上的活力。用L3漆酶处理毛纺废水,20min脱色率达到70%,有较好的脱色效果。     

灰树花漆酶的酶学性质及其脱色作用研究

通过对液体发酵灰树花漆酶的酶活、Km常数、温度和p H值的测定,探讨了Cu2+、Fe3+、Ca2+对漆酶酶活的影响,观察了漆酶对5种染料的脱色作用效果。结果表明:灰树花发酵液中漆酶氧化ABTS的Km为1.35×10-5mol·L-1,在p H值2~6的范围内均表现酶活,最适p H值为3.0,在25~70℃温度时范围内均有酶活,在50~55℃时酶活性最高。Cu2+、Fe3+、Ca2+对漆酶的活性均有抑制作用,Ca2+离子的抑制作用较弱。灰树花漆酶对甲基橙、甲基红、溴甲酚绿、甲基蓝和亚甲基蓝染料的脱色率分别为85.77%,81.10%,72.68%,22.02%和4.22%。介体ABTS对漆酶处理甲基蓝的脱色有促进效果,而对亚甲基蓝、溴甲酚绿和甲基红的脱色促进效果较弱,对甲基橙的脱色无促进作用。结论:本研究中灰树花漆酶最适p H值为3.0,在50~55℃时酶活性最高;灰树花漆酶对甲基橙、甲基红、溴甲酚绿染料的脱色效果理想。     

白构菌液体发酵合成漆酶的培养条件研究

提高底物碳源的聚合度和采用有机氮源有利于诱导白构菌 (Flammulinavelutipes)合成漆酶 ,实验结果表明选择淀粉和黄豆粉作为白构菌液体发酵制取漆酶的碳源和氮源有良好的效果。采用振荡培养能够强化白构菌液体发酵体系内的传质作用 ,更适于菌体的生长及漆酶的合成。以1 80r/min速率振荡培养白构菌 1 6d ,漆酶活力可达到 3 0 8IU/mL ,比静置培养提高 83 .3 %。经活化后的白构菌接种并在振荡条件下培养可显著提高漆酶活力 ,1 80r/min振荡培养 6d后漆酶活力可达到 1 749IU/mL。     

一株用于印染废水脱色菌产漆酶条件的优化

脱色菌—白腐真菌主要用于纤维素、木质素的降解,在稻草降解、产酶量等方面报导较多,但对于用脱色菌-白腐真菌用于印染废水脱色菌种培养基优化报导较少。文章从白腐真菌产漆酶条件入手,试求对其产漆酶条件进行优化。     

云芝漆酶的培养和分离纯化的研究

研究了云芝009菌株漆酶的培养及分高纯化,其适宜的产酶培养基为Dodson低碳培养基,起始pH值为3.5.同时添加黎芦醇对漆产酶具有强烈的诱导作用．高浓度的Cu2+对产本酶也有促进作用,经过超滤,DEAE－Cellulose和SephadexG－100分离纯化,发现云芝009菌株漆酶由组分A和B组成,其中,B组分占总酶活的85％以上。     

白毒鹅膏菌漆酶的诱导及其对直接黑G的脱色作用

白毒鹅膏菌是一种重要的产生胞外漆酶的菌株.探讨了漆酶在各种营养条件下的分泌情况以及对直接黑染料的降解情况.结果表明,以麸皮作为碳源,酵母膏作为氮源,在120 r/min的转速下培养,漆酶的产量最高.另外染料在较低质量浓度(10 mg/L)时,漆酶对染料的降解迅速而彻底,在pH=4.5、50℃条件下,偶氮染料直接黑G能被粗酶液(10 U/L)有效地降解,在120 r/min时降解率达到84.4%.     

白构菌液体发酵合成漆酶的培养条件研究

提高底物碳源的聚合度和采用有机氮源有利于诱导白构菌(Flammlina velutipes)合成漆酶，实验结果表明选择淀粉和黄豆粉作为白构菌液体发酵制取漆酶的碳源和氮源有良好的效果。采用振荡培养能够强化白构菌液体发酵体系内的传质作用，更适于菌体的生长及漆酶的合成。以180r／rain速率振荡培养白构菌16d，漆酶活力可达到308IU／mL，比静置培养提高83．3％。经活化后的白构菌接种并在振荡条件下培养可显著提高漆酶活力，180r／min振荡培养6d后漆酶活力可达到1749IU／mL。     

白腐菌Coriolus versicolor的培养及产漆酶条件的研究

从液体和固体两种培养体系出发,探索不同培养条件对白腐菌分泌漆酶的影响。液体培养体系中,白腐菌的最佳生长和漆酶分泌条件是缓冲体系起始pH值为5.8、摇瓶转速为180r/min、装液量为100mL/500mL;在所有测试的碳源中,葡萄糖为最佳碳源,在二糖中以蔗糖为碳源,漆酶酶活相对较高,而多糖(如淀粉)不利于漆酶的生成。在所有测试的氮源中,硝酸铵和酒石酸铵组合为最佳氮源,氯化铵和尿素的效果次之,蛋白胨的效果最差。当碳源与氮源质量比(C/N)大于10∶1,即高碳低氮的培养条件有利于漆酶的生成。芳香化合物诱导剂ABTS浓度为0.5～1mmol/L时,对产漆酶的影响最明显,与限氮培养基中产酶相比可提高酶活5倍,约为230IU/mL;0.5mmol/L愈创木酚、1mmol/L阿魏酸和0.05mmol/L二甲基苯胺的添加可提高酶活约2～2.5倍;0.01mmol/L黎芦醇的添加可提高漆酶酶活约1.6倍。由于酪氨酸具有酚类化合物的特点,也可作为一种无毒的天然漆酶诱导剂。菌株漆酶活力在固体培养体系明显低于在液体培养体系。     

杂色云芝漆酶的分离、纯化和酶学特性研究

杂色云芝发酵液,经超滤、DEAE-Sephadex A250柱层析两步分离、纯化出两型漆酶。以愈创木酚与酶带在适当条件下反应呈棕红色谱带鉴定出漆酶谱带。两型漆酶分别命名为LacA和LacB。经测定两漆酶亚基的分子量分别为66.0kDa和30.7kDa;等电点pI分别为4.79和5.18;LacA的最适作用温度是40℃,LacB为50℃;保温2h, LacA的半失活温度为60℃,LacB为90℃;LacA和LacB催化愈创木酚的酶活最适pH值均为4.0; 二者的稳定pH值也都在2.5~5.5之间。LacA催化氧化愈创木酚的Km和Vmax分别为286.5molL-1和292.4nmol mL-1 min-1;LacB催化氧化愈创木酚的Km和Vmax分别为813.0mol L-1和127.4nmol mL-1 min-1。     

杂色云芝产木质纤维素酶及对稻草秸秆的降解

在外加碳源和氮源的固态稻草秸秆基质上,对杂色云芝生长过程中产酶活性、主要化学成分及结构进行了分析. 结果表明,不同的碳源、氮源浓度对所产酶活性有较大影响,除产半纤维素酶的最佳条件是低碳低氮外(0.15%的葡萄糖和0.03%氯化铵),其他如纤维素酶、木质素过氧化物酶、锰依赖过氧化物酶和漆酶产生的最佳条件都是高碳低氮(2%的葡萄糖和0.03%氯化铵). 各种酶在稻草秸秆的降解中起着关键作用,酶活性直接影响主要化学成分的降解率. 纤维素和半纤维素的降解对木质素的降解有明显的促进作用. 经过32 d的培养,稻草秸秆中纤维素、半纤维素和木质素的降解率分别为65.39%, 45.11%和39.16%. 经过降解,秸秆结构发生了明显的变化.     

云芝木聚糖酶的培养和Tween80对其产酶的促进作用

本文研究了不同碳源和吐温80（Tween80）对云芝木聚糖酶产醇的影响，当以1％滤纸为碳源时，木聚精酶活最高可达11U／mL，用微晶纤维素为碳源时也能产生很高的木聚精酶．而以1％木聚糖为碳源时，只能产生很低的木聚精酶活．Tween80对木聚糖酶的产生具有明显的促进作用，分别可达3倍（微晶纤维素为碳原）和30％以上（滤纸为碳源），这主要由于Tween80能促进木糖耷醉的分泌，提高胞外木糖苷酶的活性。     

不同培养条件对云芝(Coriolus versicolor)木质素降解酶产酶影响的研究

本文研究了不同培养条件对云芝（Coriolusversicolor）三种木质素降解前产酶的影响，发现三种木质素降解酶即水质素过氧化物酶（Lip）、赖锰标木质素过氧化物酶，（Mnp）和漆酶的产生和培养条件关系很大，添加黎芦醇（VOH）能显著地提高三种酶的产量，当VOH浓度为1mmol／L时，可使木质素过氧化物酶产量提高10倍，添加Mn2＋对赖锰木质素过氧化物酶有促进作用，但对木质素过氧化物酶有抑制作用。提高其它微量元素（Cu2+，Fe2+,Zn2+，Ca2+）等同样能显著促进三种酶的产生。采用30信浓度时，赖锰木质素过氧化物酶的量要比1培浓度时提高6倍。三种酶的最适产酶pH相差很大，木质素过氧化物酶在pH4．5～5．5左右，赖锰木质素过氧化物酶在PH5．5～6.5左右，而漆酶则抵达pH3．5～4．0．Tween80在低浓度时（0.01％-0.02％）有一定的促进作用，而在高浓度则有抑制作用。C／N比则是影响产酶的另一因素，低碳培养基比低氮培养基更适宜三种木质素降解酶的产生。同时，在低氮培养基和低碳培养基下，上述因素对三种酶产生的影响也存在显著差异。这有可能是云芝的木质素降解酶在不同的C／N下其产生机理存在差异。     

A High Redox Potential Laccase from Pycnoporus sanguineus RP15: Potential Application for Dye Decolorization

Laccase production by Pycnoporus sanguineus RP15 grown in wheat bran and corncob under solid-state fermentation was optimized by response surface methodology using a Central Composite Rotational Design. A laccase (Lacps1) was purified and characterized and the potential of the pure Lacps1 and the crude culture extract for synthetic dye decolorization was evaluated. At optimal conditions (eight days, 26 °C, 18% (w/w) milled corncob, 0.8% (w/w) NH₄Cl and 50 mmol·L⁻¹ CuSO₄, initial moisture 4.1 mL·g⁻¹), the laccase activity reached 138.6 ± 13.2 U·g⁻¹. Lacps1 was a monomeric glycoprotein (67 kDa, 24% carbohydrate). Optimum pH and temperature for the oxidation of 2,2’-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonate) (ABTS) were 4.4 and 74.4 °C, respectively. Lacps1 was stable at pH 3.0–8.0, and after two hours at 55–60 °C, presenting high redox potential (0.747 V vs. NHE). ABTS was oxidized with an apparent affinity constant of 147.0 ± 6.4 μmol·L⁻¹, maximum velocity of 413.4 ± 21.2 U·mg⁻¹ and catalytic efficiency of 3140.1 ± 149.6 L·mmol⁻¹·s⁻¹. The maximum decolorization percentages of bromophenol blue (BPB), remazol brilliant blue R and reactive blue 4 (RB4), at 25 or 40 °C without redox mediators, reached 90%, 80% and 60%, respectively, using either pure Lacps1 or the crude extract. This is the first study of the decolorization of BPB and RB4 by a P. sanguineus laccase. The data suggested good potential for treatment of industrial dye-containing effluents.     

白腐菌液体培养产生漆酶的研究

研究了碳源、氮源和综合因素对白腐菌P.conchatus液体培养产漆酶和生长情况的影响。碳源为葡萄糖,氮源为酒石酸铵时,菌株的产漆酶能力较强;麦麸为碳源,酵母膏为氮源,对菌株的生长最为有利。通过正交实验确定了最佳培养基组成为葡萄糖10 g/L,酒石酸铵5 g/L,大量元素为基础培养基的3倍,微量元素为20 mL。葡萄糖是影响菌株生长的主要因素。