正常范围内CD4+ T细胞水平对2型糖尿病患者胰岛素抵抗的影响

［摘要］　目的　探讨正常范围内CD4⁺ T细胞水平对2型糖尿病（T2DM）患者胰岛素抵抗的影响。方法　招募2021年9月至2022年6月徐州医科大学附属医院收治的T2DM患者269例,依据正常范围内的CD4⁺ T细胞水平将其分为4组：A组58例,414～670个/μl;B组78例,671～927个/μl;C组74例,928～1 183个/μl;D组59例,1 184～1 440个/μl。对研究对象的干扰素-γ（INF-γ）、白细胞介素-17(IL-17)、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、C反应蛋白（CRP）等指标进行检测。行口服葡萄糖耐量试验（OGTT）及胰岛素释放试验,计算稳态模型胰岛β细胞分泌指数（HOMA-β）,胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）和Matsuda指数评估胰岛素敏感性IS（ISI_M）,分析各指标间的关联性。结果　四组CRP、INF-γ、IL-17、糖化血红蛋白（HbA_1c）、空腹血糖（FPG）、HOMA-IR、ISI_M比较差异有统计学意义（P<0.05),且CRP、INF-γ、IL-17、HbA_1c、FPG、HOMA-IR与CD4⁺ T细胞水平呈正关联,ISI_M与CD4⁺ T细胞水平呈负关联。Spearman秩相关性分析结果显示,HOMA-IR与CD4⁺ T细胞、CRP、HbA_1c、FBG、IL-17、INF-γ呈显著正相关（P<0.05）,与ISI_M呈显著负相关（P<0.05）。多元线性回归分析结果显示,CD4⁺ T细胞、FBG、IL-17、INF-γ水平与HOMA-IR水平呈正关联（P<0.05）。控制FPG及其他混杂因素（CRP、HbA_1c、IL-17、INF-γ）后,偏相关分析结果显示,HOMA-IR与CD4⁺ T细胞呈正相关（r=0.343,P<0.05）。结论　在CD4⁺ T细胞正常水平范围内,T2DM患者的CD4⁺ T细胞水平越高,其胰岛素抵抗越重,外周组织对胰岛素的敏感性也更低。     

pcDNA3-HBV瞬时转染对巨噬细胞活性的影响

目的利用HBV全基因真核细胞表达载体pcDNA3-HBV研究HBV感染后对巨噬细胞活性的影响,探讨慢性乙型肝炎患者免疫耐受发生的机制。方法常规制备小鼠腹腔巨噬细胞,分别将pcDNA3-HBV、pcDNA3质粒DNA与绿色荧光蛋白(GFP)的质粒DNApEGFPN1以9∶1混合,利用脂质体转染试剂盒,共转染小鼠腹腔巨噬细胞。转染后72h,半定量逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测HBV前S1、TNFα、白介素(IL)-1βmRNA的表达,流式细胞术测GFP的表达强度、检测核因子κB(NF-κB)蛋白的表达,利用Griess反应检测转染前后培养上清液中NO的水平。结果流式细胞术结果表明,pcDNA3-HBV与pcDNA3转染的巨噬细胞中GFP的表达率无明显差异,pcDNA3-HBV转染的巨噬细胞中检测到前S1mRNA的表达。通过与βactin相比,pcDNA3-HBV转染的巨噬细胞中TNF-α、IL-1βmRNA的表达量显著低于空载体对照组(P<0.01);pcDNA3HBV转染的巨噬细胞表达NFκ-BRelA蛋白的百分数与空载体对照组相当,但平均荧光强度显著低于空载体对照组(pcDNA3HBV转染组为125.05;pcDNA3转染组为203.88);pcDNA3-HBV转染组巨噬细胞产生NO的水平显著低于pcDNA3转染组(分别为15.0±0.6,45.0±1.3,P<0.01)。结论pcDNA3HBV转染后使巨噬细胞NFκB活性显著降低,TNF-α、IL-1βmRNA的表达及NO的产生水平明显下降。     

原花青素B2对LPS诱导的心肌细胞损伤的保护作用及机制

目的 探讨原花青素B₂(PCB₂)对LPS诱导的心肌细胞损伤的保护作用及机制。方法 正常培养心肌细胞H9c2,用LPS诱导H9c2细胞建立细胞损伤模型,分别用6.25、12.5、25.0 μmol/L的PCB₂处理模型细胞,25.0 μmol/L的PCB₂处理模型细胞后加入核因子κB(NF-κB)信号通路抑制剂PDTC处理。采用MTT法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)的水平;丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)试剂盒分别检测MDA含量和SOD、GSH-Px活性;Westem blot检测细胞中NF-κB、IκB-α蛋白表达。结果 LPS组细胞存活率较对照组显著降低(P＜0.05),而PCB₂显著升高细胞存活率(P＜0.05)。LPS组细胞凋亡率较对照组显著升高(P＜0.05),而PCB₂显著降低LPS处理的细胞凋亡率(P＜0.05)。LPS组细胞TNF-α、IL-1β、IL-6水平较对照组显著升高(P＜0.05),而PCB₂显著降低LPS处理细胞TNF-α、IL-1β、IL-6水平(P＜0.05)。与对照组比较,LPS组细胞MDA含量显著升高,SOD、GSH-Px活性显著降低(P＜0.05);PCB₂显著降低LPS处理的细胞MDA含量,显著升高SOD、GSH-Px活性(P＜0.05)。与对照组比较,LPS组细胞NF-κB蛋白表达显著升高,IκB-α蛋白表达显著降低(P＜0.05);与LPS组比较,PCB₂显著降低细胞NF-κB蛋白表达,显著升高IκB-α蛋白表达(P＜0.05)。与LPS+PCB₂组相比,LPS+PCB₂₊PDTC能显著降低细胞凋亡率和TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA含量,显著升高SOD、GSH-Px活性。结论 PCB₂降低LPS诱导的心肌细胞凋亡率、炎症水平和氧化应激,提高细胞存活率,这可能与抑制NF-κB信号通路的活化有关。     

lncRNA-BC200调控Aβ25-35诱导的神经细胞PC12炎症因子表达和细胞凋亡

目的 探讨lncRNA-BC200对Aβ₂₅-35诱导的神经细胞炎症和细胞凋亡的影响及可能机制。方法 将神经细胞PC12分为正常对照组(细胞常规培养)和10、20、40 μmol/L Aβ₂₅-35组(分别用10、20、40 μmol/L Aβ₂₅-35干预细胞24 h),流式细胞术检测细胞凋亡,qRT-PCR法检测细胞中lncRNA-BC200表达。将PC12细胞分为正常对照组、Aβ₂₅-35组(用20 μmol/L Aβ₂₅-35干预PC12细胞24 h)、si-NC+Aβ₂₅-35组(用20 μmol/L Aβ₂₅-35干预转染si-NC的PC12细胞24 h)、si-lncRNA-BC200+Aβ₂₅-35组(用20 μmol/L Aβ₂₅-35干预转染si-lncRNA-BC200的PC12细胞24 h)和TNF-α+si-lncRNA-BC200+Aβ₂₅-35组[用20 μmol/L Aβ₂₅-35和20 μg/L肿瘤坏死因子α(TNF-α)共同干预转染si-lncRNA-BC200的PC12细胞24 h],流式细胞术检测细胞凋亡,酶联免疫吸附法检测细胞培养上清液中TNF-α、白细胞介素6(IL-6)和γ干扰素(IFN-γ)表达,Western blot检测细胞中cleaved-Caspase-3、p-p65和p-IκBα蛋白表达。结果 10、20、40 μmol/L Aβ₂₅-35组PC12细胞凋亡率和lncRNA-BC200表达均高于正常对照组。Aβ₂₅-35组细胞中cleaved-Caspase-3、p-p65和p-IκBα蛋白表达,以及TNF-α、IL-6和IFN-γ水平均高于正常对照组。si-lncRNA-BC200+Aβ₂₅-35组PC12细胞凋亡率和细胞中cleaved-Caspase-3、p-p65和p-IκBα蛋白表达及TNF-α、IL-6和IFN-γ水平均低于Aβ₂₅-35组。TNF-α+si-lncRNA-BC200+Aβ₂₅-35组PC12细胞凋亡率和细胞中cleaved-Caspase-3、p-p65和p-IκBα蛋白表达及TNF-α、IL-6和IFN-γ水平均高于si-lncRNA-BC200+Aβ₂₅-35组。结论 敲减lncRNA-BC200可能通过抑制NF-κB信号通路的激活减少Aβ₂₅-35诱导的神经细胞PC12分泌炎症因子及细胞凋亡。     

肿瘤坏死因子α对人脂联素3T3-L1细胞PPARγ2 mRNA表达的影响

目的探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）对稳定表达人脂联素3T3-L1细胞过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）γ2 mRNA表达的影响，为进一步研究脂联素功能提供了实验基础。方法重组脂联素真核表达质粒（pcDNA3．1^＋-hADPN）脂质体法稳定转染3T3-L1细胞。用TNF-α（100ng／m1）处理未转染、转染空载载体、转染pcDNA3．1^＋-hADPN的3T3-L1细胞，RT-PCR检测PPARγ2 mRNA的表达量。结果（1）稳定转染了pcDNA3．1^＋-hADPN的未分化和已分化3T3-L1细胞中，PPARγ2表达量较未转染组明显增加（P〈0.01）。（2）TNF-α可明显抑制PPARγ2 mRNA的表达（P〈0.05）。（3）稳定转染pcDNA3．1^＋-hADPN可改善TNF-α抑制作用（P〈0.05）。结论稳定转染pcDNA3．1^＋-hADPN可明显增加未分化和已分化的3T3-L1细胞PPARγ2 mRNA表达。TNF-α抑制PPAR-γ2 mRNA表达，而转染pcDNA3．1^＋-hADPN可改善TNF-α抑制作用。     

三氧化二砷联合动脉化疗栓塞治疗原发性肝癌肺转移的临床疗效观察

  目的 探讨三氧化二砷(As₂O₃)联合动脉化疗栓塞对原发性肝癌肺转移患者的治疗效果。方法 60例原发性肝癌肺转移患者随机分为A、B两组。A组为治疗组,共30例患者,对肝脏原发病灶行周期性肝动脉化疗栓塞术（TACE）,TACE后3 d开始给予As₂O₃持续静脉滴注5 h（10 mg/d,14 d为1个疗程）,间隔2周,连续进行3~4个周期; B组为对照组,共30例患者,对肝脏原发病灶行周期性TACE。观察两组患者的客观有效率、获益率、生活质量等指标及转移瘤大小、灶数与疗效的相关性。结果 A组患者中客观有效率为26.7%（8/30）,获益率60.0%（18/30）,B组客观有效率为0,获益率16.7%（5/30）,两组客观有效率及获益率的差异均具有统计学意义（χ²=7.067,P=0.008;χ²=11.915,P=0.001）。A组患者中生活质量改善4例,稳定18例,B组患者中改善0例,稳定13例,两组差异有统计学意义（χ²=9.669,P=0.008）。肿瘤负荷与疗效呈显著负相关,且相关关系密切（Kendall相关系数为－0.765,P<0.001;Spearman相关系数为－0.821,P<0.001）。结论 As₂O₃联合动脉化疗栓塞是一种治疗原发性肝癌肺转移的有效治疗方法。     

气管内滴入核仁素shRNA表达载体对脂多糖肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞活化的影响

目的建立气管内滴人核仁素shRNA表达载体的实验模型,观察其对脂多糖（LPS）诱导急性肺损伤（ALI）大鼠肺泡巨噬细胞（AM）活化的影响,探讨AM膜核仁素在LPS致大鼠ALI中的作用及机制。方法选择健康雄性SD大鼠40只,随机分为A组（空白对照组）,B组（ALI组）,C组（转染重组质粒pBS-U6-C23shRNA并ALI组）,D组（转染对照质粒pBS-U6-ControlshRNA并ALI组）。大鼠经尾静脉注射LPS以建立Au模型,气管内滴人法转染重组质粒pBS-U6-C23shRNA表达载体,免疫印迹（Westernblot）检测AM膜核仁素蛋白表达;核酸电泳迁移率实验（EMSA）检测AM中核因子（NF-κB）活性;酶联免疫吸附法（ELISA）检测肺泡灌洗液（BALF）中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白介素-6（IL-6）表达。结果转染pBS-U6-C23shRNA表达载体后可以显著下调AM膜核仁素蛋白表达;减轻肺病理损伤;降低NF-κB的活性以及肺泡灌洗液中TNF-α和IL-6的含量。与A组相比,B组及D组的大鼠AM膜核仁素蛋白表达显著增加,组间有统计学差异（P〈0．01）;C组大鼠AM膜核仁素蛋白表达明显下调,与B组相比,组间差异有统计学意义（P〈0．01）;而D组与B组中的大鼠AM膜核仁素蛋白表达组间没有统计学差异（P〉0．05）。经LPS处理后,各组大鼠AM中NF-κB活性显著增加,与A组相比,组间差异非常明显（P〈0．01）。c组大鼠AM中NF-κB活性明显降低,与B组比较,差异显著（P〈0．05）;而D组与B组比较,组间无明显差异（P〉0．05）。经LPS诱导肺损伤后,显著增加了大鼠BALF中促炎因子TNF-α和IL-6的表达,各组和A组相比差异显著（P〈0．01）;C组大鼠BALF中TNF-α和IL-6的含量显著降低,与B组相比差异显著（P〈0．01）;而D组与B组相比,组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论气管内滴入法可以安全有效转染核仁素shRNA表达载体,抑制AM活化,减轻肺损伤,AM膜核仁素参与了LPs致大鼠ALI的发病过程。     

不同剂量阿托伐他汀对老年早期糖尿病肾病患者外周血NF-κB活性和尿白蛋白排泄率的影响

［摘要］　目的　观察不同剂量阿托伐他汀对老年早期糖尿病肾病（DN）患者外周血单个核细胞中核因子-κB（NF-κB）P65(ser536)的磷酸化水平、血清炎症因子水平（hs-CRP、TNF-α、IL-6、IL-1β）及尿白蛋白排泄率（UAER）的影响。方法　将72例2型糖尿病早期DN老年患者,半随机分为两组,分别给予阿托伐他汀钙片10 mg/d（DN1组,37例）和20 mg/d（DN2组,35例）,疗程16周。测定两组患者治疗前和治疗16周后外周血NF-κB P65的磷酸化水平、血清炎症因子水平、UAEA、血脂（TC、TG、DHL-C、LDL-C）。结果　两组患者治疗后外周血NF-κB P65水平、血清炎症因子水平、TC及LDL-C均较治疗前降低(P<0.01或P<0.05),以DN2组降低更显著。DN2组治疗后UAER较治疗前显著降低（P<0.01）,DN1组无显著下降（P>0.05）。结论　阿托伐他汀在降低血脂的同时可降低外周血NF-κB P65的活性、血清炎症因子hs-CRP、TNF-α、IL-6、IL-1β水平,改善患者炎症状态,减少尿蛋白,且呈剂量依赖性。     

慢性阻塞性肺疾病大鼠模型肿瘤坏死因子α及受体的表达及意义

目的探讨肿瘤坏死因子α（TNF—α）与肿瘤坏死因子受体1（TNFR1）在慢性阻塞性肺疾病（COPD）发生发展中的意义。方法建立吸烟大鼠COPD模型,测定大鼠的肺功能及其血清和BALF的细胞数,观察肺组织病理形态变化和肺平均内衬间隔（MLI）和平均肺泡数（MAN）评估肺气肿的程度。用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测大鼠血清和支气管肺泡灌洗液（BALF）中TNF—α及TNFRI的表达。结果COPD组BALF中白细胞、中性粒细胞及巨噬细胞数增高。COPD组肺功能指标FEV0．3、FEV0．3／FVC％和PEF分别为（1．86±0．22）ml、（65．064-8．40）％、（18．84±1．56）ml/s,比正常组（4．20±0．25）ml、（85．56±5．85）％、（47．24±7．28）ml／s下降。COPD组MLI、MAN分别为（77．32±28．73）um／个、（232．00±97．18）个／mm。而正常组为（43．96±7．16）um／个、（392．84±24．41）个／mm^2,COPD组MLI增加而MAN减少;COPD组血清和BALF的TNF—α、TN—FRl表达增高,分别为TNF—α（117．98±33．82）pg／ml、（155．10±27．60）pg／ml而TNFR1为（85．00±16．34）pg／ml、（98．13±11．97）pg／ml而正常组为TNF-α（73．98±16．41）ps／ml、（79．20±27．70）ps／ml,TNFR1为（58．82±24．57）pg／ml、（61．89±26．25）pg／ml。COPD组BALF的TNFR1表达与MLI呈正相关（r=0．79,P=0．004）与MAN呈负相关（r=-0．626,P=0．039）。两组间不比较均有统计学差异（P〈0．05）。结论TNF—α、TNFR1作为炎症介质在COPD的发生、发展中起重要促进作用。     

激活蛋白1和肿瘤坏死因子α在早期被动吸烟小鼠肺部表达增加

目的观察早期被动吸烟小鼠肺功能及肺组织的病理变化,核转录因子κB（NF-κB）和激活蛋白-1（AP-1）的活性变化以及炎症因子IL-8、IL-6和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的表达变化,探讨转录因子与炎症介质的关系,为慢性阻塞性肺疾病发病机制的研究提供参考。方法将C57/BL6雄性小鼠随机分为被动吸烟组（10只）和健康对照组（10只）,被动吸烟2h,2次/d（间隔时间至少6h）,连续30d。用小动物呼吸机连接PowerLab压力传导器测定各组肺功能,HE染色法比较各组肺组织的病理变化,凝胶迁移检测（electrophoretic mobility shift assay,EMSA）观察肺组织中NF-κB和AP-1的活性,用酶链免疫吸附试验（ELISA）测定支气管肺泡灌洗液（BALF）中IL-8、IL-6和TNF-α的浓度。结果健康组小鼠肺功能和吸烟组相比未见显著性差异,[吸气峰流速度（PIF）分别为（1.8244±0.4907）ml/s和（1.8675±0.4187）ml/s（P=0.6244）,呼气峰流速度（PEF）分别为（6.1369±0.5753）ml/s和（6.1689±0.7669）ml/s（P=0.3598）],肺组织病理观察可见终末细支气管和血管周围有大量淋巴细胞浸润,肺泡中有大量巨噬细胞聚集。肺组织EMSA结果显示NF-κB活性变化不明显,吸烟组AP-1活性明显增强。ELISA结果表明BALF中吸烟组较健康组TNF-α显著性增高[分别为（241.44±239.47）pg/mg和（106.58±64.229）pg/mg,P=0.0243],IL-8和IL-6无明显改变[IL-8分别为（20.404±24.204）pg/mg和（13.018±11.289）pg/mg,P=0.4392;IL-6分别为（75.612±89.278）pg/mg和（43.863±35.899）pg/mg,P=0.1206]。结论小鼠早期被动吸烟可以引起终末细支气管和血管旁淋巴细胞浸润,巨噬细胞肺泡腔内聚集。气道内TNF-α表达增加。肺组织AP-1活性增加,可能参与了吸烟引起的早期炎症变化。     

慢性重型乙型肝炎患者血清可溶性肿瘤坏死因子受体的变化

应用酶联免疫吸附试验法测定了32例慢性重型乙型肝炎患者血清可溶性肿瘤坏死因子受体(sTNFR)水平。结果 慢性重型肝炎患者sTNFR水平显著升高,升高程度与总胆红素呈正相关,与凝血酶原活动度呈负相关。伴有感染或肝肾综合征时,sTNFR水平显著高于无感染或无肝肾综合征患者,最终死亡者其水平也显著高于存活者。提示测定慢性重型肝炎患者血清sTNFR水平对判断病情及预测转归有一定的价值。     

酒精性肝硬化患者血清肿瘤坏死因子受体的检测及其临床意义

同特异性免疫测定ELISA法检测了32例酒精性肝硬化患者和10名健康人血清中肿瘤坏死因子受体的水平。酒精性肝硬化患者两种可溶性肿瘤坏死因子受体(P55、P75)均明显高于健康组(P<0.01),肝硬化代偿期与失代偿期患者比较有显著差异(P值分别<0.005,<0.01)。这些结果提示循环中可溶性肿瘤坏死因子受体(STNFR)的水平与肝硬化和疾病的进展程度呈正相关。     

肿瘤坏死因子受体2基因多态性与冠心病分型的相关性分析

目的研究肿瘤坏死因子受体2基因6号外显子rs1061622(+676)位点的基因型及血浆可溶性肿瘤坏死因子受体2与冠心病临床分型及其危险因素的关系,分析两者与冠心病分型的相关性。方法选取经冠状动脉造影证实为冠心病的患者250例,其中稳定型心绞痛54例、不稳定型心绞痛110例、急性心肌梗死86例;同时选取我院正常体检者98例作为对照组。记录所有研究对象的病史、体格检查、辅助检查、冠状动脉造影结果等临床资料。采用聚合酶链反应-连接酶检测反应的方法检测各组肿瘤坏死因子受体2(+676)位点的等位基因及基因型频率;应用酶联免疫吸附法测定各组血浆可溶性肿瘤坏死因子受体2水平。同时结合其基因型综合分析冠心病各临床分型与血浆可溶性肿瘤坏死因子受体2水平、基因型的关系及肿瘤坏死因子受体2基因型与血浆可溶性肿瘤坏死因子受体2间的关联度。结果 (1)肿瘤坏死因子受体2(+676)位点上有3种基因型,即TT、TG和GG型;(2)在冠心病组,肿瘤坏死因子受体2(+676)位点GG基因型频率(6.8%)高于对照组(4.1%),差异有统计学意义(P=0.008);冠心病组G等位基因频率高于对照组(χ2=3.993,P=0.046);(3)稳定型心绞痛组T/G等位基因频率与不稳定型心绞痛组、急性心肌梗死组相比差异有统计学意义(P<0.05),不稳定型心绞痛组与急性心肌梗死组相比差异无统计学意义;(4)在冠心病组中,血浆可溶性肿瘤坏死因子受体2水平显著高于对照组,差异有统计学意义,冠心病组3种基因型血浆可溶性肿瘤坏死因子受体2水平与对照组比较有统计学差异,但对照组和冠心病组中血浆可溶性肿瘤坏死因子受体2水平与各自的基因型和等位基因无明显关联;(5)TG+GG基因型的患者空腹血糖、总胆固醇、收缩压水平与TT基因型患者相比差异无统计学意义,且患冠心病的风险是TT型的1.648倍。结论肿瘤坏死因子受体2(+676)位点G等位基因可能是山西汉族人群冠心病发病的危险因素;可溶性肿瘤坏死因子受体2血浆水平可间接反映机体的炎症状态,用于冠心病的病情监测;可溶性肿瘤坏死因子受体2血浆水平与肿瘤坏死因子受体2基因型之间无明显的关联。     

Toll样受体4在CCl_4诱导的大鼠慢性肝损伤过程中的表达

背景:Toll样受体4(TLR4)在内毒素的信号转导过程中具有重要作用。目的:动态观察在CCl4诱导的大鼠慢性肝损伤过程中,肝组织和Kupffer细胞TLR4基因表达的变化,探讨TLR4在肝损伤中的作用。方法:以CCl4诱导慢性肝损伤纤维化大鼠模型,分离肝Kupffer细胞,以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝组织和Kupffer细胞TLR4 mRNA的表达;将Kupffer细胞分别与不同浓度的脂多糖(LPS)孵育,以酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞培养上清的肿瘤坏死因子(TNF)-α水平。以基质显色法测定大鼠血浆内毒素水平。结果:正常大鼠肝组织TLR4 mRNA表达水平较低,Kupffer细胞未检测到TLR4 mRNA表达;CCl4处理2-6周大鼠的肝组织和Kupffer细胞TLR4 mRNA表达水平显著增高(P<0．05)。CCl4处理4周和6周大鼠Kupffer细胞的TNF-α基础分泌水平显著高于正常大鼠(P<0．05); 在LPS的刺激下,TNF-α的分泌水平较基础值进一步增高(P<0．05),呈浓度依赖性。大鼠血浆内毒素水平在肝损伤过程中逐渐增高．相关分析显示在慢性肝损伤的早、中期,肝组织和Kupffer细胞TLR4 mRNA的表达与血浆内毒素水平呈正相关。结论:在CCl4诱导的慢性肝损伤过程中,大鼠肝脏TLR4基因表达上调,与Kupffer细胞活化和肝脏的炎症损伤有关。     

Toll样受体4在CCI4诱导的大鼠慢性肝损伤过程中的表达

背景：Toll样受体4（TLR4）在内毒素的信号转导过程中具有重要作用。目的：动态观察在CCl4诱导的大鼠慢性肝损伤过程中。肝组织和Kupffer细胞TLR4基因表达的变化，探讨TLR4在肝损伤中的作用。方法：以CCl4诱导慢性肝损伤纤维化大鼠模型，分离肝Kupffer细胞。以逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测肝组织和Kupffer细胞TLR4 mRNA的表达；将Kupffer细胞分别与不同浓度的脂多糖（LPS）孵育，以酶联免疫吸附测定（ELISA）检测细胞培养上清的肿瘤坏死因子（TNF）-α水平。以基质显色法测定大鼠血浆内毒素水平。结果：正常大鼠肝组织TLR4 mRNA表达水平较低，Kupffer细胞未检测到TLR4 mRNA表达；CCl4处理2～6周大鼠的肝组织和Kupffer细胞TLR4 mRNA表达水平显著增高（P〈0．05）。CCl4处理4周和6周大鼠Kupffer细胞的TNF-α基础分泌水平显著高于正常大鼠（P〈0．05）；在LPS的刺激下，TNF-α的分泌水平较基础值进一步增高（P〈0．05），呈浓度依赖性。大鼠血浆内毒素水平在肝损伤过程中逐渐增高，相关分析显示在慢性肝损伤的早、中期。肝组织和Kupffer细胞TLR4 mRNA的表达与血浆内毒素水平呈正相关。结论：在CCl4诱导的慢性肝损伤过程中，大鼠肝脏TLR4基因表达上调，与Kupffer细胞活化和肝脏的炎症损伤有关。     

Inhibition of Apoptosis in Human Neutrophils by Helicobacter pylori Water-Soluble Surface Proteins

Background: Helicobacter pylori infection in humans causes persistent neutrophil infiltration into the gastric mucosa. It is believed that a prolongation of neutrophil life-span could contribute to the pathogenesis of H. pylori infection. We therefore examined whether the water-soluble surface proteins of H. pylori can influence the apoptosis of neutrophils. Methods: After neutrophils were incubated with H. pylori water extract (HPWE), neutrophil apoptosis was evaluated by TUNEL assay, Hoechst 33342 staining, electron microscopy and ELISA for cytosolic oligonucleosome-bound DNA for up to 48 h. To investigate the regulatory mechanisms of neutrophil apoptosis associated with HPWE, mRNA expression and protein production of Fas, Fas ligand (FasL) and tumor necrosis factor receptor 1 (TNF-R1) were analyzed by RT-PCR, ribonuclease protection assay, Northern blot and Western blotting. Cell surface expression of these death factors was also measured by flow cytometry. Results: HPWE inhibited neutrophil apoptosis and cytotoxicity for up to 48 h. The mRNA and protein expression of FasL and the cell surface expression of Fas, FasL and TNF-R1 in HPWE-treated neutrophils were suppressed compared with the controls. Conclusion: The water-soluble surface proteins of H. pylori could suppress neutrophil apoptosis. This may be caused by the suppression of FasL expression in neutrophils and Fas, FasL and TNF-R1 expression on the surface of neutrophils.     

Suppression of Tumor Necrosis Factor Production by Alcohol in Lipopolysaccharide-Stimulated Culture

Many studies have shown that alcohol consumption is associated with alteration in immune responses and increased incidence of infection in the host. Tumor necrosis factor (TNF) is a potent soluble mediator of immunoregulation and inflammation, and plays a very important role in host's defenses against infection and tumor. We propose that one of the mechanisms of alcohol-mediated immunosuppression may be due to a defect in the synthesis and release of the TNF. To determine this, we studied the direct effect of alcohol on lipopolysaccharide (LPS)-induced TNF production by whole blood and total mononuclear cell from normal subjects. Aliquots of blood samples (1 ml) or ficollhypaque separated total mononuclear cells (1 × 10⁶/ml) were cultured with different concentrations of either ethanol or acetaldehyde in the presence or absence of LPS for 4 hr at 37°C. Plasma samples and culture supernatants were assayed for TNF levels in a bioassay using a TNF-sensitive WEHl 164 sub-clone 13 cell line. LPS at 10 μg/ml produced a maximal level of TNF compared with lower (1 μg/ml) or higher concentration (50 μg/ml) of LPS. Kinetics studies showed that an incubation time of 4 hr with LPS produced a maximum level of TNF production by blood. Alcohol, as low as 0.1% concentration, produced significant suppression of LPS-inducted TNF production by whole blood, whereas alcohol at 0.2 and 0.3% concentrations were required to produce a significant suppression of TNF production by separated mononuclear cells. Anti-TNF-α antibodies significantly neutralized the LPS-induced TNF that suggests that blood monocytes may be the primary source of TNF production. Further, significant correlation between TNF production and monocyte numbers was observed. Acetaldehyde one of the primary metabolites of alcohol, did not suppress the LPS-induced TNF production by whole blood. These studies suggest that alcohol-induced inhibition of TNF may be one of the mechanisms for immunosuppression in alcoholic patients.     

Serum TNF-α, IL-10 and IL-2 in Schizophrenic Patients Before and After Treatment with Risperidone and Clozapine

Background: Schizophrenia is a disorder of the executive function of both sensory and central nervous system. Recent studies suggest that immune mechanisms play a role in the pathophysiology of this disease. The variations in cytokine concentrations have been associated with psychopathology and treatment of schizophrenia. Objective: To investigate the changes in serum concentrations of TNF- α, IL-10, and IL-2 in schizophrenic patients before and 40 days after treatment. Methods: In a case-control study, 26 schizophrenic patients and 26 healthy individuals were enrolled as the control group. PANSS scale questionnaire was used for diagnosis and assessing the severity of the disease. All patients were then treated with risperidone or clozapine for 40 days. Serum concentrations of TNF- α, IL-10 and IL-2 were measured by ELISA before and after treatment in both groups. Paired t-test and Independent t-test were used for comparison of data. Results: Comparison of TNF-α and IL-10 concentrations in patients before and after treatment revealed a significance decrease of TNF- α and increase of IL-10 concentrations (p=0.002, and p=0.008, respectively). Serum concentrations of IL-2 were lower than the detection limit of assay and were not detectable. In comparison with healthy controls, serum concentrations of TNF- α in schizophrenic patients were higher, while IL-10 concentrations were lower before treatment although the differences were not significant (p=0.291 and p=0.375, respectively). There was no correlation between cytokine concentrations and the positive and negative scale (PANSS). Also no significant difference in the admission, relapses, and duration of illness before and after treatment was observed. Conclusions: Increase of TNF- α and decrease of IL-10 may have an important role inpsychopathology of schizophrenia.     

瑞舒伐他汀剂量对心绞痛患者经皮冠状动脉介入围手术期炎性因子的影响

目的探讨瑞舒伐他汀剂量对心绞痛患者经皮冠状动脉介入(PCI)围手术期炎性因子的影响。方法从2013年2月至2014年10月收治的拟行PCI的心绞痛患者中选择150例,分别进行术前不同剂量瑞舒伐他汀治疗,即5 mg/d组、10 mg/d组、15 mg/d组、20 mg/d组和25 mg/d组,各组患者数均为30例。所有患者在术后均继续按照5 mg/d剂量服用瑞舒伐他汀。对患者PCI手术前以及手术后24 h分别检测血清炎性因子白细胞介素6(IL-6)、干扰素γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平和抗炎性因子白细胞介素10(IL-10)的水平。结果瑞舒伐他汀5 mg/d组患者术后血清促炎性细胞因子IL-6、IFN-γ和TNF-α水平均显著提高(P0.05);10 mg/d组患者术后血清IL-6和IFN-γ水平均显著提高(P0.05);较高剂量(15 mg/d、20 mg/d和25 mg/d)组患者术后血清IL-6、IFN-γ和TNF-α水平与术前差异无统计学意义(P0.05),而术后血清IL-10水平则明显高于5 mg/d组(P0.05)。15 mg/d的较高剂量即可有效降低患者血清促炎性细胞因子、提高抗炎性细胞因子水平,进一步提高瑞舒伐他汀剂量并不能明显影响各炎性细胞因子水平。结论术前15 mg/d剂量瑞舒伐他汀可有效减轻PCI手术对患者血清促炎性细胞因子的刺激,提高血清抗炎性细胞因子水平。