17β-雌二醇对体外培养破骨细胞钙离子浓度的影响

目的 :研究 1 7β -雌二醇对体外培养破骨细胞细胞内钙离子浓度 ( [Ca2 + ] i)的影响 ,探讨雌激素对破骨细胞骨吸收功能的调节机制。方法 :体外培养Wistar大鼠破骨细胞 ,用Fluo 3AM钙离子荧光探针进行细胞内钙离子荧光标记 ,激光扫描共聚焦显微镜测定不同浓度 1 7β -雌二醇 ( 1 7βE2 )对破骨细胞钙离子浓度的影响及观察破骨细胞的形态变化与伸展面积。结果 :1 7βE2 可诱发破骨细胞钙离子浓度的升高 ,伴随细胞变小 ,伪足回缩 ,破骨细胞伸展面积从 ( 1 386± 4 3) μm2 /细胞核下降至 ( 40 6± 31 ) μm2 /细胞核。结论 :1 7βE2 可诱发破骨细胞 [Ca2 + ] i的升高 ,细胞变小 ,伪足回缩。 1 7βE2 可能是通过 [Ca2 + ] i途径抑制破骨细胞的骨吸收功能     

糖皮质激素对大鼠肾上腺嗜铬细胞内游离钙离子浓度的影响

目的　研究糖皮质激素 (GC)对大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞 (AMCC)分泌儿茶酚胺(CA)的作用机制。方法　用 5 μmol/L钙荧光染料fura 2AM负载体外培养的大鼠AMCC ,在激光扫描共聚焦显微镜 (LSCM )下实时测定地塞米松 (Dex)作用前后 ,KCl和尼古丁 (NIC)诱发细胞内[Ca2 + ] i 的变化。结果　 5 0 μmol/LDex对 60mmol/LKCl诱发大鼠AMCC内 [Ca2 + ] i的变化影响不大 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 )。 5 0 μmol/LDex对 5 0 μmol/LNIC诱发细胞内 [Ca2 + ] i的变化有明显抑制作用 ,在灌洗 5和 10min时峰值抑制率分别为 (3 2 .9± 5 .2 ) %和 (3 5 .4± 6.0 ) %。结论　GC急性作用于大鼠AMCC ,对KCl所诱发的 [Ca2 + ] i升高无明显影响 ,但能明显抑制NIC所诱发细胞内 [Ca2 + ] i的升高 ,提示GC对大鼠AMCC分泌CA的急性效应可能与NIC受体有关     

肾上腺素β3受体与梗阻后逼尿肌不稳定关系的实验研究

目的　探讨肾上腺素β3 受体 (β3 AR)在膀胱出口梗阻 (BOO)型逼尿肌不稳定 (DI)中的作用。　方法　Wister大鼠 15只 ,建立BOO后DI模型 ,6周后行充盈性膀胱测压 ,根据是否有DI将下尿路梗阻大鼠分为DI组和逼尿肌稳定 (DS)组 ,正常大鼠 8只作为对照组。用离体逼尿肌条拉力实验观察BRL37344A(β3 AR激动剂 )对逼尿肌自律性和舒张功能的影响 ,RT PCR检测膀胱 β3 ARmRNA含量。　结果　BOO后DI发生率为 6 7% (10 / 15 )。BRL37344A能明显抑制正常及不稳定膀胱逼尿肌自发性收缩频率及收缩强度 ,作用呈浓度依赖性 ,对DI组的作用强度明显低于正常对照组及梗阻后DS组 (P <0 .0 5 ) ;梗阻后DI组、对照组及梗阻组 β3 ARmRNA相对含量分别为 10 .2 7± 1.17、19.84± 2 .6 2和 18.38± 3.4 5 ,DI组明显降低 (P <0 .0 5 )。　结论　β3 AR激动剂能降低正常及梗阻后逼尿肌条自律性及收缩力 ,β3 AR密度变化可能参与大鼠BOO后逼尿肌不稳定的发生。     

川芎嗪对家兔阴茎海绵体平滑肌细胞游离钙浓度的影响

目的 :研究中药川芎嗪 (TMP)对体外培养家兔阴茎海绵体平滑肌细胞 (PCSMC)胞质内游离钙浓度([Ca2 + ] i)的影响。　方法 :用新型Ca2 + 荧光染色剂Fluo 3/AM负载家兔PCSMC ,细胞分为氯化钾 (KCl)作用组和去甲肾上腺素 (NE)作用组 ,应用激光扫描共聚焦显微镜 (LSCM)实时测定胞质内 [Ca2 + ] i的变化 ,分别观察不同浓度的TMP对高钾和NE诱导胞质内 [Ca2 + ] i升高的影响 ,并与经典钙拮抗剂维拉帕米 (Ver)的作用相对比。　结果 :静息状态下 ,TMP对家兔PCSMC胞质内 [Ca2 + ] i无明显影响。 1、1 0、1 0 0 μmol/LTMP能显著抑制高钾诱发的细胞内 [Ca2 + ] i升高 ,抑制率分别为 (38.6± 3 .0 ) %、(44.1± 2 .4) %和 (53 .7± 4 .1 ) % ;也能抑制 1 μmol/LNE诱发钙库释放所致的细胞内 [Ca2 + ] i升高 ,抑制率分别为 (1 3 .9± 2 .7) %、(2 1 .2± 1 .9) %和 (2 9.5± 3 .6) %。　结论 :TMP通过对家兔PCSMC电压依赖性钙通道和细胞内钙库释放的双重抑制作用 ,降低PCSMC胞质内 [Ca2 + ] i水平 ,其作用效果与Ver相似 ,这是TMP治疗阴茎勃起功能障碍的重要机制。     

钙离子在逼尿肌收缩机制中的作用

钙离子是调节逼尿肌舒缩功能的重要第二信使。逼尿肌收缩强度与细胞内游离钙离子浓度有密切关系 ,逼尿肌舒张常伴随 [Ca2 + ]i下降至静息水平 ;由于Ca2 + 可激活逼尿肌的收缩蛋白 ,其收缩力还与收缩蛋白对Ca2 + 的敏感性高低有关系。     

丹参注射液对正常大鼠血小板胞浆内游离钙浓度的影响

目的:研究丹参注射液对正常大鼠血小板胞浆游离钙浓度[Ca2 ]i的影响.方法:以Fura-2/AM荧光分光光度法测定大鼠血小板内[Ca2 ]i的变化.结果:丹参注射液对正常大鼠血小板内[Ca2 ]i呈剂量依赖性抑制.结论:推测丹参注射液的活血化瘀作用可能与其降低血小板内[Ca2 ]i相关.     

川芎嗪对大鼠肠缺血再灌注肝损伤的保护作用

缺血再灌注 (I/R)损伤产生的机制主要与氧自由基大量生成导致组织器官脂质过氧化有关[1] 。本研究旨在探讨川芎嗪对大鼠肠缺血再灌注肝损伤的保护作用。一、材料与方法1.药品及试剂 :川芎嗪注射液 40mg/2ml。超氧化物歧酶 (SOD)、合胱甘肽过氧化物 (GSH) PX、丙二醛 (MDA )、Ca2 Mg2 ATPase试剂盒。2 .实验动物 :选用健康雄性Wistar大鼠 2 4只 ,体重 2 5 0 g。3 .模型制备及动物分组 :10 %水合氯醛 (0 .3 5ml/10 0 g体重 )腹腔注射麻醉后 ,仰卧固定 ,取腹部正中切口 ,暴露肠系膜上动脉 (SMA)用无损伤动脉夹夹闭其根部导致缺…     

Genistein对增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1表达及细胞内游离钙的影响

目的 观察5,7,4'-三羟基异黄酮(Genistein)对增生性瘢痕成纤维细胞TCF-β1的表达及细胞内钙离子浓度的影响,探讨Genistein抗纤维化作用的机制.方法 体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞,以不同浓度Genistein(25、50、100μmol/L)处理,RT-PCR法检测药物作用48h后细胞TGF-β1mRNA的表达,Western Blot法检测细胞TGF-β1蛋白表达量的变化;激光共聚焦显微镜动态观测Genistein处理后成纤维细胞内Ca2+浓度以及Genistein预处理后再加bFGF刺激的细胞Ca2+浓度的动态变化.结果 Genistein作用后增生性瘢痕成纤维细胞表达TGF-β1的mRNA与蛋白量均显著下调,并具有剂量依赖性;bFGF可使培养的成纤维细胞内游离Ca2+浓度升高,经Genistein预处理的细胞内Ca2+的浓度明显下降.结论 Genistein能抑制增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1,的表达,拮抗生长因子促细胞内游离Ca2+浓度增加的效应,可能是其抗纤维化作用的机制之一.     

异丙酚对兔离体气管平滑肌细胞内游离钙离子浓度的影响

目的 评价异丙酚对兔离体气管平滑肌细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响.方法 采用急性酶分离方法分离兔气管平滑肌细胞,采用随机数字表法,将细胞随机分为3组(n=5):异丙酚组(Ⅰ组,终浓度300 μmol/L)、异丙酚(终浓度300 μmol/L)+2-氨乙基硼酸二苯酯(终浓度40μmol/L)(Ⅱ组)和异丙酚(300 μmol/L)+斯里兰卡肉桂碱(终浓度10 μmol/L)(Ⅲ组).Ⅰ组加入终浓度300 μmol/L的异丙酚,孵育15 min后,用无钙的Hank平衡盐溶液冲洗3次,加入1μmol/L乙酰胆碱,记录[Ca2+]i.Ⅱ组加入终浓度40μmol/L的2-氨乙基硼酸二苯酯孵育15 min后,再加入终浓度为300μmol/L的异丙酚,与2-氨乙基硼酸二苯酯共同孵育15 min后,用无钙的Hank平衡盐溶液冲洗3次,加入1 μmol/L的乙酰胆碱.Ⅲ组加入终浓度10 μmol/L的斯里兰卡肉桂碱孵育15 min后,再加入终浓度为300μmol/L的异丙酚,与斯里兰卡肉桂碱共同孵育15 min后,用无钙的Hank平衡盐溶液冲洗3次,再加入1 μmol/L的乙酰胆碱.通过负荷钙离子荧光指示剂Fluo-3/AM测定气管平滑肌细胞内[Ca2+]i.结果 与Ⅰ组比较,Ⅱ组气管平滑肌细胞内[Ca2+]i差异无统计学意义(P＞0.05),Ⅲ组[Ca2+]i明显降低(P＜0.05).结论 异丙酚可降低兔离体气管平滑肌细胞内[Ca2+]i,其机制可能与抑制内质网1,4,5-三磷酸肌醇通路有关,而与内质网兰诺定通路无关.     

转化生长因子—β1对前列腺基质细胞基因表达的调节作用

目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)对前列腺基质细胞基因表达的调节作用.方法原代培养人前列腺基质细胞,并传代至4～6代.分别将浓度为0.01、0.10、1.00、10.00μg/L的TGF-β1加入细胞培养液中.孵育48h后收集细胞.用内参照半定量RT-PCR方法检测前列腺基质细胞雄激素受体(AR)、TGF-β1、bFGF和平滑肌特异性标记蛋白smoothelin基因的转录水平.结果与对照组相比,低浓度(0.01μg/L)的TGF-β1可增强体外培养的前列腺基质细胞内AR表达(P<0.01),差别有显著性意义.随TGF-β1浓度增加,促AR表达作用减弱.随TGF-β1浓度增加基质细胞TGF-β1、bFGF和smoothelin基因的转录增加(P<0.01),并且随着应用浓度增加促各基因转录的作用增强.结论TGF-β1对前列腺基质细胞基因表达具有广泛的调节作用,在前列腺增生发病中具有重要作用.     

糖尿病大鼠逼尿肌细胞内游离钙离子浓度的变化

目的观察2型糖尿病(T2DM)大鼠的逼尿肌细胞内游离钙离子浓度变化,为阐明糖尿病膀胱病变的发病机制提供依据。方法制备T2DM大鼠模型,在成模后4周和20周,以正常大鼠为对照,分离单个逼尿肌细胞并应用Fura-2／AM荧光探针负载,进行细胞内钙离子浓度的测定。结果发病初期,T2DM大鼠逼尿肌细胞内静息钙离子荧光比值(289．24±33．80)与正常对照组(276．85±57．90)比较,差异无统计学意义。在发病20周时,T2DM组大鼠逼尿肌细胞内钙离子荧光比值(545．94±79．28)比正常对照组(275．66±108．94)明显增高。结论细胞内钙超载参与了逼尿肌功能的损害的病理过程,但是发生相对较晚,可能在糖尿病膀胱发病的进展期起重要作用。     

β3肾上腺素能受体与逼尿肌关系研究进展

β3 肾上腺素能受体 ( β3 AR)属于β AR亚型之一 ,其分布和生物学特性与β1、β2 AR有所不同。β3 AR是人和某些动物介导逼尿肌舒张的重要因素 ,β3 AR激动剂可用于治疗不稳定膀胱。该受体基因的一个错义突变可能与逼尿肌不稳定的发生有关     

三氧化二砷对肝癌细胞株SMMC-7721[Ca2＋]i的影响

目的观察不同浓度三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖及细胞内Ca2 的影响,探讨其在肝癌化疗中的可能机制。方法MTT法测定不同浓度As2O3对SMMC-7721细胞的抑制作用;Fura2-AM标记细胞内Ca2 ,荧光分析仪测定不同浓度As2O3对SMMC-7721细胞内Ca2 浓度的影响。结果As2O3在0.5～2.0μg/ml的浓度范围内对肝癌SMMC-7721细胞的生长具有抑制趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);As2O3在0.5,1.0μg/ml浓度时,对SMMC-7721细胞内Ca2 浓度的影响,与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);当As2O3浓度为2.0μg/ml,作用时间为48h,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),而作用时间至72h,细胞内Ca2 又恢复至正常水平(P>0.05)。结论As2O3对SMMC-7721细胞内Ca2 的影响不仅与浓度有关而且与作用时间有关。     

氯胺酮对荷包牡丹碱诱导PC12细胞内Ca2+浓度波动方式的影响

目的 研究氯胺酮对荷包牡丹碱诱导PC12细胞内Ca2 浓度波动方式的影响.方法 使用含25 ng/L NGF的DMED培养基在多聚赖氨酸包被的培养皿中培养PC12细胞;与终浓度10μmol/L的Ca2 指示剂Fluo-3 AM ester共孵育30 min洗涤后,加入终浓度50 μmol/L荷包牡丹碱;在激光共聚焦显微镜选定多个细胞分别测定荧光强度的变化;随后加入氯胺酮,记录细胞荧光强度的改变.在试验结束前依次加入Triton X-100和EGTA分别记录单个细胞最大荧光强度(Fmax)和最小荧光强度(Fmin),以计算细胞内Ca2 的相对强度.结果 氯胺酮不改变荷包牡丹碱诱导PC12细胞内Ca2 浓度波动的基线,但抑制细胞内Ca2 浓度升高的幅度(P＜0.05),缩短相邻波峰间的时间间隙(P＜0.05).结论 氯胺酮不仅改变荷包牡丹碱诱导PC12细胞内Ca2 浓度升高的幅度,而且改变Ca2 浓度波动的周期.     

背根神经节P2X3受体在大鼠切口痛形成中的作用

目的 评价背根神经节P2X3受体在大鼠切口痛形成中的作用.方法 健康雄性SD大鼠24只,体重200～220 g,随机分为3组(n=8):对照组(C组)、切口痛组(IP组)和P2X3受体拮抗剂组(A组).IP组和A组制备大鼠左后趾部切口痛模型.模型建立后30 min,A组左后爪底皮下注射P2X3受体特异性拮抗剂TNP-ATP 200 nmol,C组和IP组注射等容量生理盐水.采用累积疼痛评分法,评定注药后1 h内大鼠疼痛行为学变化.注药后2 h时处死大鼠,取背根神经节,测定P2 X3受体表达和细胞内Ca2+浓度.结果 与C组比较,IP组和A组累积疼痛评分和Ca2+浓度升高,P2X3受体表达上调(P＜0.05);与IP组比较,A组累积疼痛评分和Ca2+浓度降低,P2X3受体表达下调(P＜0.05).结论 背根神经节P2X3受体参与了大鼠切口痛的形成,其机制可能与升高细胞内Ca2+浓度有关.     

大鼠体外循环模型的建立

体外循环中的心肺脑损伤主要由体外循环中血液与非生理性管道接触引发的全身炎症反应及缺血再灌注损伤造成[1] 。减轻缺血再灌注损伤和炎症反应是术中实施心肌保护、肺保护以及脑保护的主要手段之一[2 ] ,为此 ,我们以离体大鼠肺作为体外循环氧合器 ,建立了 3 2例大鼠体外循环模型 ,效果良好。一、材料与方法1.实验动物 :SD大鼠 ,体重 3 0 0～3 5 0g。2 .实验仪器 :stockertdoubleheadrollerpump ,江湾Ⅰ型人工微型呼吸器 2台 ,HX 10 5 5 5恒温循环器 ,测压装置。3 .实验方法 :取实验鼠 ,腹腔注射3 %戊巴比妥 (2 5mg/kg体重 )麻醉 ,股静脉…     

家兔阴茎海绵体平滑肌细胞内游离钙检测方法的对比研究

目的　通过对家兔阴茎海绵体平滑肌细胞 (PCSMC)内游离Ca2 检测方法的对比 ,以选择更适宜的方法来研究阴茎海绵体平滑肌的舒张机制。方法　采用新型Ca2 荧光探针Fluo 3/AM标记家兔PCSMC胞浆内游离Ca2 ,应用显微分光光度计 (MSP)、流式细胞仪 (FCM)和激光扫描共聚焦显微镜 (LSCM)分别观察硝苯吡啶 (NIF)对高K 诱发家兔PCSMC内 [Ca2 ]i 变化的影响。结果　MSP和FCM检测发现 ,10 μmol/LNIF能明显减弱高K (4 0mmol/L)诱发细胞内荧光强度的升高 ,抑制率为 (6 5 .5± 4 .4 ) %和 (6 9.3± 5 .2 ) %。LSCM可见细胞胞浆内游离Ca2 分布 ,不同细胞胞浆内的基础荧光强度有差别 ,NIF能明显抑制高K 诱发的细胞内 [Ca2 ]i 升高 ,抑制率为 (71.5±6 .8) %。结论　LSCM能直观地看到单细胞内Ca2 的分布 ,并能动态观察胞浆内 [Ca2 ]i 的变化 ,为研究不同药物对PCSMC的影响提供了良好的实验方法。     

异丙酚对中性粒细胞活性氧生成及细胞内游离Ca~(2 )浓度的影响

目的 :测定异丙酚对中性粒细胞 (PMN)激活后活性氧生成以及细胞内游离Ca2 浓度 ([Ca2 ]i)的影响 ,探讨异丙酚影响PMN呼吸爆发的内在机制。方法 :利用电子自旋共振 (ESR)技术和自旋捕捉法 ,观察异丙酚对PMN呼吸爆发产生氧自由基 (ROS)的抑制作用 ;同时采用钙荧光指示剂 (Fura 2 /AM)负载离体PMN并行双波长模式测定不同浓度异丙酚对静息和激活状态下PMN细胞内 [Ca2 ]i 的影响。结果 :高浓度 (75 μM)异丙酚可使静息状态下PMN细胞内 [Ca2 ]i升高 ;在有钙基质中 ,异丙酚对趋化三肽 (fMLP)诱发的PMN胞内 [Ca2 ]i 的升高有明显的降调作用 ,而在无钙基质中则不明显。在无钙基质中 ,高浓度 (≥ 5 0 μM )的异丙酚对fMLP诱发PMN呼吸爆发产生ROS有明显的抑制作用 ;而存在胞外钙浓度时 ,2 5 μM异丙酚的抑制程度更为明显。结论 :异丙酚可通过作用于胞外钙内流和胞内储存钙释放影响静息及激活状态下PMN胞内 [Ca2 ]i;异丙酚在有钙基质中对PMN呼吸爆发产生ROS的抑制作用更为明显 ,提示异丙酚影响PMN胞内 [Ca2 ]i,特别是对胞外钙内流的抑制作用 ,可能是其抑制PMN呼吸爆发的内在机制之一。     

去肝脏胆碱能神经大鼠模型的建立与评价

目前去肝脏胆碱能神经动物模型尚没有明确标准 ,只能通过仔细操作确保肝脏与食道及贲门之间没有组织残留[1] 。我们建立了去肝脏胆碱能神经(IHCD)大鼠模型的手术规范 ,从形态学、免疫组织化学以及超微结构等角度对这一模型进行了全面的评价。一、材料和方法1.实验动物与分组 :健康Wistar大鼠 2 8只 ,体重 170～ 2 0 0 g(购自军事医学科学院第四研究所 ) ,随机分为模型组和对照组 ,每组 14只。2 .模型制备方法 :参照Tordoff等[2 ]的方法 ,加以改进 ,使肝脏完全游离。大鼠禁食不禁水 12h ,10 %水合氯醛腹腔注射麻醉 (3 0 0mg/kg体重 ) ,腹…     

异丙酚对上腹部手术病人血小板聚集及凝血功能的影响

目的评价异丙酚麻醉对病人血小板聚集及凝血功能的影响。方法41例择期行上 腹部手术病人,ASA I或Ⅱ级,年龄24-56岁,体重46—75 kg。静脉注射异丙酚、芬太尼、维库溴铵行 麻醉诱导,气管插管后行异丙酚靶控输注(TCI)麻醉,设定效应室靶浓度4μg／ml。分别于麻醉诱导前 (T0)、术前异丙酚TCI 30 min(T1)、术前异丙酚TCI 60 min(T2)、术前异丙酚TCI 120 min(T3)采集静脉 血,比浊法测量血小板最大聚集率,双波长荧光比值法测定血小板内游离Ca2 浓度([Ca2 ]i),以及测 定血栓弹性描记图参数和凝血四项指标:血浆部分凝血活酶时间、血浆凝血活酶时间、凝血酶原时间、 血浆纤维蛋白原浓度。结果与T0相比,T1-3时血小板最大聚集率及激活后[Ca2 ]i峰值均下降(P <0．01),静息状态[Ca2 ]i差异无统计学意义,凝血功能参数差异无统计学意义(P>0．05)。结论 异丙酚通过抑制Ca2 内流对血小板聚集产生抑制作用,而对凝血功能无明显影响。