褪黑素对H22肝癌细胞凋亡作用的影响

目的　探讨褪黑素 (MLT)在体外对H2 2肝癌细胞凋亡作用的影响及其机制。方法　应用免疫细胞化学染色方法及原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法 (TUNEL)对bcl 2、bax及凋亡细胞进行检测。结果　经MLT孵育相同的时间后 ,凋亡指数 (AI)随MLT浓度的增加而增加 ,中等剂量组与低剂量组及对照组间差异均有显著性 (P <0 .0 5) ,大剂量组、5 Fu组与低剂量组、对照组间差异均有显著性 (P <0 .0 1)。同一药物浓度下 ,中等剂量组、大剂量组及 5 Fu组在孵育 2 4,3 6h后 ,其AI差异有显著性 (P <0 .0 5)。随MLT浓度增加 ,bcl 2的表达呈降低趋势 ,低剂量组与对照组差异有显著性 (P <0 .0 1)。在孵育 2 4,3 6h后 ,bcl 2的下降差异有显著性 (P <0 .0 5)。随MLT浓度增加 ,bax表达在 2 4h内呈上升趋势 ,随时间延长变化不大。结论　MLT在体外有促进肿瘤细胞凋亡的作用 ,且随时间和浓度的增加 ,其促凋亡作用增强 ,bcl 2和bax参与了其中的调节作用     

TIM2基因修饰对H22细胞的抑制作用及苦参碱的增强作用

目的 观察苦参碱对TIM2基因修饰小鼠H22肝癌细胞瘤苗的体内作用.方法 以携带小鼠TIM2基因的真核表达载体脂质体法转染H22细胞,经体外稳定筛选获得TIM2转基因H22细胞瘤苗.建立小鼠肝癌移植瘤模型,接种TIM2转基因H22细胞瘤苗(H22-TIM2组),观察成瘤情况,并设空载体转染的H22细胞稳定表达株和H22细胞作为对照(H22-EGFP组和H22组);同时,分别加用药物苦参碱治疗,观察苦参碱对不同处理组小鼠肿瘤生长情况的影响.结果成功得到TIM2转基因修饰H22细胞,鉴定有TIM2基因mRNA及EGFP的稳定表达.免疫接种小鼠后,在小鼠体内的成瘤率为41.6%,明显低于H22组和H22-EGFP组(后两者成瘤率在91.6%以上)(P＜0.01),小鼠肿瘤的生长速率也较其他各组明显缓慢,实验结束时H22-TIM2组小鼠肿瘤平均体积为(31.34±9.21)mm3,明显小于H22.EGFP组和H22组[(98.25±25.23)mm3和(114.08±36.45)mm3;P＜0.01].接种H22-TIM2细胞对小鼠肿瘤的抑制率为69.2%,加用苦参碱后,抑瘤率达90.6%,明显高于单用苦参碱组(67.5%)及H22-EGFP和苦参碱联用组(70.8%).结论 TIM2基因修饰H22细胞可显著降低H22肝癌细胞在小鼠体内的致瘤性,抑制小鼠体内H22移植瘤的发生和发展,而苦参碱可明显改善其体内抗癌活性.     

海藻色素糖蛋白对小鼠H22肝癌细胞增殖与凋亡的影响

目的：研究麒麟菜海藻色素糖蛋白（seaweed pigment glycoprotein,SPG）对小鼠H22肝癌细胞增殖与凋亡的影响。方法：将不同浓度SPG与小鼠H22肝癌细胞共同培养,用MTT法测定癌细胞增殖活性。建立H22移植瘤小鼠肝癌模型,随机分为SPG高、中、低剂量组,对照组及环磷酰胺组。实验组小鼠每天分别给予不同剂量（100、50、10mg/kg）的SPG灌胃,连续10d,对照组同法给予等量生理盐水,环磷酰胺组小鼠腹腔注射20mg/kg环磷酰胺,隔日一次。各组小鼠均于末次给受试物后24h处死,取肿瘤组织用免疫组化法检测各组Bcl-2和Bax蛋白表达。结果：SPG高剂量组瘤细胞增殖活性（0.545±0.002）明显高于对照组（0.404±0.008）（P〈0.05）;SPG高剂量组Bcl-2和Bax蛋白阳性表达率分别为16.78%和38.1%,对照组分别为65.16%和4.68%,两组间的差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论：SPG具有抑制小鼠H22肝癌细胞增殖、促进其凋亡的作用。     

小鼠肝癌H22细胞LDL受体活性的研究

目的：观察小鼠肝癌Ｈ２２细胞ＬＤＬＲ活性。方法：对大鼠肝癌Ｈ２２细胞和正常肝细胞进行受体结合的Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析和单点分析。结果：①Ｈ２２细胞对ＬＤＬ的亲和性和正常肝细胞相同，但Ｈ２２细胞Ｂｍａｘ明显增多；②Ｈ２２细胞对ＬＤＬ的非特异性结合、内移和降解能力与正常肝细胞相同。结论：小鼠肝癌Ｈ２２细胞ＬＤＬＲ活性增高，其对ＬＤＬ的内移和降解功能未变，     

洛铂对人肝癌细胞HepG2增殖及凋亡作用的实验研究

目的 探讨洛铂（LBP）对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响及其可能机制。方法取对数生长期HepG2细胞,分别采用不同浓度LBP（0、2.5、5、10、20 μmol／L）处理48 h。普通光镜观察细胞形态学改变;MTS法检测细胞增殖,并计算半数抑制浓度（IC50）;Annexin Ⅴ-FITC／PI双染法及Hoechst 33258染色检测细胞凋亡;Western blotting检测Bax、Bak、Bcl-2、Bid、Bcl-XL、Survivin及PARP-1蛋白表达。结果 随着LBP浓度的升高HepG2细胞密度减少,离巢死亡细胞数目增多;光镜下可见典型核固缩、碎裂的凋亡细胞。LBP能显著抑制HepG2细胞增殖,且呈浓度和时间依赖性（P＜0.05）;2.5、5、10、20 μmol／L的LBP作用HepG2细胞48 h后的增殖率分别为（92.11±1.79）％、（65.87±1.78）％、（51.57±0.81）％及（33.11±1.47）％; LBP作用HepG2细胞48 h的IC50为13.28 μmol／L。2.5、5、10、20 μmol／L LBP作用48 h HepG2细胞的凋亡率分别为（11.64±0.85）％、（20.99±2.21）％、（33.02±2.30）％和（40.77±1.58）％,与LBP 0 μmol／L 的（3.29±0.43）％比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。2.5、5、10、20 μmol／L LBP能够下调HepG2细胞中的Bcl-2、Mcl-1蛋白表达,上调Bax、Bid、PARP-1蛋白表达, 对Bcl-XL、Bak及Survivin蛋白表达无影响。结论 LBP能够诱导HepG2细胞凋亡、抑制细胞增殖,其可能机制与上调Bax、Bid和PARP-1蛋白以及下调Bcl-2、Mcl-1蛋白表达有关。     

五倍子酸对H22肝癌细胞荷瘤小鼠的抑瘤作用

目的 观察五倍子酸(trihydroxybenzoic acid,TBA)对小鼠移植性肝癌H22肿瘤生长的抑制作用。方法 建立移植性H22肝癌细胞荷瘤小鼠模型,每组10只,TBA高、中、低剂量组TBA溶液0.50g/kg、0.25g/kg、0.13g/kg灌胃给药;对照组0.5%羧甲基纤维素钠溶液0.2mL/10g灌胃给药;阳性对照组CTX 20mg/kg腹腔注射,每天固定时间给药一次,连续给药10d。观察各组小鼠实体瘤重,计算抑瘤率,HE染色检测肿瘤组织细胞形态变化。结果 TBA 0.50g/kg、0.25g/kg和0.13g/kg组小鼠平均瘤重不同程度下降,其中TBA 0.25g/kg组平均瘤重与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),TBA三组抑瘤率分别为24.83%、45.52%和15.86%。结论 TBA灌胃给药可以不同程度抑制H22肿瘤的生长。     

苦参碱诱导HL-60细胞株凋亡作用的实验研究

 目的　研究苦参碱（MAT）诱导HL-60细胞株凋亡的作用及其机制。方法　采用 CCK-8法检测不同浓度MAT对HL-60细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡以及线粒体跨膜电位的变化;分光光度法检测Caspase-9活性。结果　0.25～2.0 mg／ml MAT对HL-60细胞有生长抑制作用,与对照组相比差异有统计学意义（F＝67.83,P＜0.05）;MAT处理48 h后,细胞凋亡率明显增高,并呈剂量依赖性（t值分别为4.685、6.300、9.641、6.786,均P＜0.05）;1.0 mg／ml MAT处理后48 h内,细胞线粒体跨膜电位逐渐降低（F＝54.83,P＜0.05）,Caspase-9活性逐渐升高,呈时间依赖性（F＝72.31,P＜0.05）。结论　MAT可能通过降低细胞线粒体跨膜电位、激活Caspase-9而诱导HL-60细胞凋亡。     

生长抑素受体亚型介导人肝癌细胞凋亡的实验研究

目的研究生长抑素类似物奥曲肽诱导人肝癌细胞株细胞凋亡的作用,观察不同的人肝癌细胞株生长抑素受体(SSTR)亚型的表达情况.探讨SSTR亚型与肝癌细胞凋亡之间的关系.方法分别培养人肝癌细胞株(SMMC-7721,HHC-98,HepG2),荧光染色、透射电镜和流式细胞仪检测细胞凋亡;RT-PCR检测细胞SSTR亚型mRNA的表达.结果0.25～4.0μg/mL的奥曲肽作用48 h后,三种肝癌细胞部分呈现典型的凋亡形态学改变,细胞凋亡率呈浓度依赖性升高.3种肝癌细胞株均表达SSTR2、3、4,SSTR5则在两种肝癌细胞株SMMC-7721和HHC-98中表达,所有细胞株均未检测到SSTR1的表达.结论奥曲肽可以诱导肝癌细胞凋亡,其作用与肝癌细胞中广泛表达的SSTR亚型相关.     

苦参碱诱导人肝癌细胞分化、凋亡时对 G1细胞周期调节因子的调控

目的：观察苦参碱诱导人肝癌细胞分化、凋亡时,G1细胞周期调节因子的变化,探讨苦参碱对肿瘤细胞增殖的调控。方法：0、0．3、0．8、1．5g/L苦参碱作用HepG2细胞3天,免疫组化检测p53,Rb,p21,p27,p16,cyclinD1蛋白表达：原位杂交检测p53,cyclin D1mRNA的表达。真彩色图像分析对基因表达强弱进行定量。结果用Microsoft-Excel软件统计处理。结果：用药后细胞周期负调控因子p53,Rb,p21,p27,p16表达增强;正调控因子cyclinD1表达减弱。结论：苦参碱诱导人肝癌细胞HepG2分化、凋亡的机制可能与苦参碱上调了G1细胞周期负调节因子的表达,下调了G1期正调节因子cyclinD1表达有关。     

小鼠肝癌H22细胞LDL受体活性的研究

目的 :观察小鼠肝癌H2 2 细胞LDLR活性。方法 :对小鼠肝癌H2 2 细胞和正常肝细胞进行受体结合的Scatchard分析和单点分析。结果 :①H2 2 细胞对LDL的亲和性与正常肝细胞相同 ,但H2 2 细胞Bmax明显增多 ;②H2 2 细胞对LDL的非特异性结合、内移和降解能力与正常肝细胞相同。结论 :小鼠肝癌H2 2 细胞LDLR活性增高 ,其对LDL的内移和降解功能未变。     

TNP-470对小鼠肝癌H22腹水瘤的治疗研究

 目的 探讨TNP-470治疗小鼠肝癌H22腹水瘤的疗效及机制。方法 体外采用细胞增生法和迁移法探讨TNF-470的治疗机制；体内建立H22腹水瘤小鼠模型评价TNP-470的疗效。结果TNP-470对瘤细胞H22的增生、血管内皮细胞HMEC的增生和迁移都有抑制作用；能明显提高小鼠生活质量、降低腹水的产生和瘤细胞的存活率及小鼠失明率，延长生存期。结论 TNP-470对荷H22腹水瘤小鼠有明显疗效。     

珠子参体外诱导人肝癌细胞凋亡效应及机制研究

目的观察珠子参体外诱导人肝癌细胞凋亡效应并初探其分子机制。方法体外细胞培养采用人肝癌细胞株SMMC-7721,分为对照(BL)组、珠子参(PJ)组、二甲基亚砜(DMSO)组及5-FU组,采用电镜观察作用后肝癌细胞超微结构改变;流式细胞仪检测肝癌细胞周期和凋亡率;RT-PCR法检测癌基因c-myc、c-fos和抑癌基因p53、p21表达的变化。结果与对照组比较,电镜下珠子参组SMMC-7721细胞染色质浓缩,分解成大小不一有膜包绕团块,内含有新月形DNA物质及细胞器,形成凋亡小体;周期分析可见G0/G1期细胞阻滞,阻止了细胞向S期的转换,并引起细胞凋亡,凋亡率达38.34%;RT-PCR半定量分析珠子参能降低癌基因c-myc表达(P<0.05),增高抑癌基因p53和p21表达(P<0.05)。结论珠子参能诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡,部分作用机制可能与阻滞细胞停留在G0/G1,降低癌基因c-myc和c-fos表达,增高抑癌基因p53和p21表达有关。     

褪黑素对小鼠肝癌H22细胞抗增殖和促凋亡的p53依赖性机制研究

背景与目的：本室已经证明了褪黑素(melatonin,MLT)对小鼠肝癌H22细胞的生长具有抑制作用,本研究旨在探讨其机理。方法：(1)建立荷瘤小鼠模型并给予褪黑素处理,取肿瘤组织进行p53、cyclin E水平的免疫组化分析;(2)不同浓度褪黑素体外培养小鼠肝癌H22细胞,采用流式细胞技术(flow cytometry,FCM)检测细胞周期分布和凋亡率;免疫组化法分析培养细胞的p53和cyclin E的蛋白水平;采用RT-PCR方法检测Fas mRNA的水平。结果：(1)FCM显示褪黑素可引起H22细胞G0／G1期比例升高,从75．24％上升至85．46%,同时细胞凋亡增多,从5．07％升至12．77％;(2)褪黑素作用后p53水平较对照组增高42．5％(培养细胞)和19．5%(肿瘤组织),而cyclin E的水平则降低31．7％(培养细胞)和39．9％(肿瘤组织);(3)RT-PCR结果显示Fas mRNA水平增高44、2％。结论：MLT通过阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡抑制H22细胞增殖。其机理可能是通过p53抑制下游的cyclin E的表达,阻止细胞进入S期;同时又通过p53上调Fas表达,从而诱导细胞凋亡。     

苦参碱诱导K562白血病细胞分化和凋亡的实验研究

目的：研究苦参碱的抗肿瘤作用。方法：以人红白血病细胞株Ｋ５６２为研究对象,通过形态学观察和细胞化学染色了解不同浓度的苦参碱对肿瘤细胞的诱导分化作用。并利用程序性细胞死亡检测试剂盒检测肿瘤细胞凋亡的情况。结果：０．１ｇ／Ｌ苦参碱能够诱导Ｋ５６２白血病细胞分化,形态学上类似中幼红和晚幼红细胞,联苯胺染色阳性率由１％￣２％上升至７％,细胞化学染色显示糖原由阴性转为强阳性且阳性率为１００％;１．０ｇ／Ｌ苦     

髓系来源的抑制性细胞在小鼠H22原位种植性肝癌中的表达及其意义

目的:比较小鼠H22原位种植性肝癌模型中髓系来源的抑制性细胞（MDSCs）和调节性T细胞（Tregs）的表达,确定主要的免疫抑制性细胞。并探讨主要免疫抑制性细胞在小鼠H22原位种植性肝癌模型中的意义。方法:建立小鼠H22原位种植性肝癌模型,用流式细胞术的方法比较外周血、脾脏、肿瘤组织中MDSCs、Tregs的比例。分析MDSCs与CD4+T细胞、CD8+T细胞、NK细胞、NKT细胞的相关性。通过脾脏切除的方法下调MDSCs的表达,观察对肿瘤存活的影响。结果:MDSCs的比例无论在外周血、脾脏还是肿瘤组织中都显著高于Tregs。MDSCs的比例与CD4+T细胞、CD8+T细胞、NK细胞、NKT细胞呈负相关。下调MDSCs的比例可以显著延长小鼠存活期。结论:小鼠H22原位种植性肝癌中主要的免疫抑制性细胞是MDSCs。MDSCs的高表达预示着不良的小鼠存活期。     

消癌平对肝癌细胞Hepa1-6增殖和凋亡的影响

 目的　研究不同质量浓度、不同作用时间消癌平注射液（XAP）对肝癌细胞Hepa1-6增殖和凋亡的影响。方法　以低、中、高剂量（10、20、30 mg／ml）的XAP作用肝癌细胞Hepa1-6 24、48、72 h,采用MTT比色法观察XAP对肝癌细胞Hepa1-6生长的抑制作用,HE染色光镜下观察细胞结构的改变,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果　XAP对肝癌细胞Hepa1-6有明显的抑制效应,且具有时间、剂量依赖关系（P＜0.01）,光学显微镜下可见细胞形态趋向良性分化,流式细胞术检测,低、中、高剂量组XAP作用Hepa1-6细胞48 h后,均出现凋亡峰,凋亡率分别为（7.65±0.40）％、（11.26±1.09）％和（26.71±0.85）％,与对照组的（2.88±0.30）％相比,细胞凋亡率显著升高（P＜0.01）。结论　XAP对肝癌细胞Hepa1-6有明显的抑制效应,其抑制效应具有时间、剂量依赖性,其机制可能与抑制肝癌细胞DNA合成及诱导肝癌细胞凋亡有关。     

苦参碱对人类肝癌细胞HepG2增殖、细胞周期及凋亡的影响

 目的　探讨苦参碱（MT）对人类肝癌细胞株HepG2增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法　用不同质量浓度的MT（0.0125、0.025、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 g／L）对培养的HepG2细胞作用不同时间（24、48、72 h）,用四氮噻唑蓝（MTT） 比色法检测MT对细胞增殖的影响;流式细胞术（FCM）检测MT对HepG2细胞周期及凋亡的影响。结果　质量浓度≥0.1 g／L的MT有抑制HepG2细胞增殖的作用,且作用随药物质量浓度的增加及时间的延长而加强（P＜0.01）。FCM检测分析显示,0.8 g／L MT作用48 h能将HepG2细胞阻滞在G1期[（75.3±6.5）%对（64.1±6.3）%]（P＜0.05）,1.6 g／L MT作用48 h能将HepG2细胞阻滞在G2期[（29.1±9.1）%对（11.6±2.1）%]（P＜0.01）。0.4、0.8、1.6 g／L MT作用12、24、48 h对HepG2细胞都有诱导凋亡作用,且作用随药物质量浓度的增加及作用时间的延长而加强（P＜0.01）。结论　MT能够抑制HepG2细胞的增殖、诱导其凋亡并影响其细胞周期,呈时间和剂量依赖性。MT抗肝癌的机制可能与影响肝癌细胞周期、抑制细胞增殖及诱导凋亡有关。