甲胺鸢尾素对H2O2损伤大鼠心肌细胞线粒体膜电位的影响

目的：研究新型化合物甲胺鸢尾素（methyl-amine irisolidone,MMI）预处理对H2O2损伤大鼠心肌细胞线粒体膜电位变化的影响。方法：甲胺鸢尾素预处理心肌细胞12 h后,采用H2O2诱导细胞氧化应激损伤,瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态,MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位变化。结果：与正常对照组比较,模型组心肌细胞存活率明显降低（P〈0.01）。MMI0.1μmol/L组与模型组相比细胞存活率相近（P〉0.05）,0.5、1、5、10μmol/L组显著增高（P〈0.05,P〈0.01）。与模型组比较,10μmol/L MMI减轻细胞形态变化,1、5、10μmol/L MMI显著抑制线粒体膜电位下降（P〈0.05,P〈0.01）。结论：甲胺鸢尾素可改善H2O2所致心肌细胞氧化应激损伤,其机制与稳定细胞膜、抑制线粒体膜电位下降,进而抑制心肌细胞凋亡有关。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对H_2O_2诱导的SH-SY5Y神经细胞损伤的保护作用

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对过氧化氢(H2O2)诱导的SH-SY5Y神经细胞凋亡的保护作用。方法采用体外细胞培养的方法,建立SH-SY5Y神经细胞H2O2损伤模型。通过观察细胞形态,测定细胞存活率(MTT法)、乳酸脱氢酶(LDH)活性,实时荧光定量(real-time)PCR检测细胞bax、bcl-2 mRNA表达的变化。结果同H2O2组比较,终浓度为50、100、150、200μmol.L-1的EGCG能减轻H2O2引起的SH-SY5Y神经细胞的损伤,且呈现剂量依赖趋势,能明显提高细胞的存活率,减少LDH的释放量,bax mR-NA表达下降,bcl-2 mRNA表达升高。结论 EGCG对H2O2诱导的SH-SYSY神经细胞损伤具有明显的保护作用。     

蜗牛多肽混合物抗过氧化氢诱导的SH-SY5Y细胞损伤的作用

目的观察蜗牛多肽混合物对过氧化氢(H2O2)诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤的抑制作用及其可能机制。方法用H2O2诱导SH-SY5Y细胞损伤,MTT法测定细胞存活率;39～1250 mg·L-1蜗牛多肽混合物处理后,Hoechst染色检测细胞凋亡;罗丹明123染色检测线粒体通透性;细胞免疫化学技术和Western blot技术分别检测增殖细胞核抗原(PCNA)和脑源性神经营养因子(BDNF)的表达。结果 1.54 mmol·L-1H2O2可诱导SH-SY5Y细胞凋亡。用39～156 mg·L-1浓度的蜗牛多肽混合物处理后,H2O2诱导的SH-SY5Y细胞凋亡数量明显减少,同时可减少H2O2引起的线粒体通透性增加,升高PCNA与BDNF的表达(P﹤0.01)。结论蜗牛多肽混合物可抑制过氧化氢诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,其作用机制可能与其增加细胞PCNA与BDNF的表达有关。     

红花甙对过氧化氢诱导SH-SY5Y细胞凋亡保护作用的实验研究

目的研究红花甙(carthamin)对过氧化氢(H2O2)诱导神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞(SH-SY5Y cells)凋亡的影响,并探讨其机制。方法实验分为空白对照组、H2O2损伤组及红花甙高、中、低剂量组。用H2O2作用于SH-SY5Y细胞,使其发生凋亡。MTT法检测SH-SY5Y细胞活性,比色法测丙二醛(MDA)的含量,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果与损伤组比较,随着红花甙剂量的增加,SH-SY5Y细胞存活率提高(P<0.01),MDA生成量减少(P<0.01),凋亡率下降(P<0.05)。结论红花甙对H2O2诱导SH-SY5Y细胞凋亡有保护作用,与红花甙能抗氧化、降低细胞凋亡有关。     

海康灵各组分抗神经细胞损伤有效部位和有效剂量的研究

目的:通过比较海康灵复方中单味药对过氧化氢(H2O2)诱导SH-SY5Y神经细胞损伤的保护作用,筛选更为理想的量效关系。方法:采用体外细胞培养的方法,复制神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞H2O2损伤模型。通过MTT法测定细胞存活率,检测海康灵复方中单味药与复方对SH-SY5Y细胞损伤的保护作用。结果:根据最佳有效剂量组建的海康灵新复方(浓度为0.159g.mL-1)同单味药与原复方比较,能减轻H2O2引起的SH-SY5Y细胞的损伤,明显提高细胞的存活率。结论:海康灵新复方对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有明显的保护作用。     

黄芩苷对H_2O_2诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及其对Trx表达的影响

目的探讨黄芩苷对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及其作用机制。方法采用体外培养细胞的方法,建立SH-SY5Y细胞H2O2损伤模型。分设药物组(50,100,200μmol/L)、H2O2损伤组、阴性对照组。采用MTT法检测细胞活力,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞的Trx表达的变化。结果同H2O2损伤组比较,黄芩苷能明显减轻H2O2引起的SH-SY5Y细胞的损伤,同时Trx表达升高。结论黄芩苷对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有明显的保护作用,其作用机制可能是黄芩苷通过上调Trx表达,起到抗氧化作用,继而起到抗凋亡的作用。     

人参水提物对MPP^＋诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的研究人参水提物（WEG）对四氢吡啶离子（MPP^＋）诱导SH-SY5Y细胞凋亡的影响。方法体外培养SH-SY5Y细胞,建立MPP＋致SH-SY5Y细胞凋亡的模型,同时给予WEG干预。应用MTT比色法检测细胞活力;Hoechst33258染色观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果0.5mmol·L^-1MPP^＋作用于SH-SY5Y细胞60h,MTT值降低到（51.97%±2.46%）（P〈0.01）,Hoechst 33258染色可见明显的颗粒状和固缩状荧光,凋亡率增加到（40.52%±1.68%）（P〈0.01）,而WEG则能明显改善SH-SY5Y细胞的凋亡特性,显著升高其MTT值,降低凋亡率（P〈0.05）。结论人参水提物对MPP＋诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有显著的保护作用。     

黄芩苷通过上调SIRT1保护SH-SY_5Y氧化应激的损伤

观察黄芩苷(baicalin,BL)对过氧化氢诱导SH-SY5Y细胞损伤的作用,并初步探讨SIRT1是否是其发挥作用的靶点及其可能机制。培养的人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞加入黄芩苷(25、50及100μmol·L-1)预孵育12 h,加入H2O2(150μmol·L-1)作用24 h诱导产生氧化损伤,应用MTT比色法检测细胞存活率,测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、一氧化氮(NO)含量;并采用流式细胞仪检测细胞凋亡及应用免疫荧光组化法检测Caspase-3的活性、RT-PCR检测SIRT1水平。结果表明,与H2O2模型组比较,黄芩苷(50和100μmol·L-1)组的细胞存活率增高(P<0.05、P<0.01),而LDH、NO的释放量及细胞凋亡数(P<0.05、P<0.01)、Caspase-3的表达量均减少;SIRT1 mRNA表达明显(P<0.05、P<0.01)。黄芩苷对H2O2损伤的SY5Y细胞具有保护作用,可减轻神经细胞的损伤、抑制细胞的凋亡,其作用机制可能是通过上调SIRT1水平而抑制Caspase-3表达实现的。     

20-羟基蜕皮甾酮对H_2O_2诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用

本文旨在研究一种类固醇激素即20-羟基蜕皮甾酮对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及其作用机制。预孵育20-羟基蜕皮甾酮可以明显提高H2O2诱导的SH-SY5Y细胞的生存率,减少乳酸脱氢酶（LDH）漏出率,抑制脂质过氧化水平（MDA）升高,提高超氧化物歧化酶（SOD）活性。此外,20-羟基蜕皮甾酮可以通过降低Bax/Bcl-2的比值,延缓caspase-3的活化来抑制H2O2诱导的细胞凋亡。本研究表明20-羟基蜕皮甾酮对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞具有保护作用,有可能用于由氧化应激和凋亡导致的神经退行性疾病的治疗。     

Ndfip1对神经细胞铁超载损伤的保护作用及机制探讨

摘要： 目的 探讨Ndfip1过表达对神经细胞SH-SY5Y铁超载损伤的保护作用及机制。方法 以SH-SY5Y细胞为细胞模型, 并成功构建Ndfip1质粒。应用Ndfip1质粒和空质粒分别转染SH-SY5Y细胞, 建立实验组和对照组。 MTT法检测不同浓度FeSO4作用下, SH-SY5Y细胞存活率的变化, 确定铁超载浓度; Ndfip1质粒转染SH-SY5Y细胞,确定转染效率; Ndfip1质粒和空质粒分别转染SH-SY5Y细胞, MTT法检测2组细胞存活率的变化; 应用Calcein AM法处理细胞, 荧光显微镜下观察2组细胞的荧光强度, 以确定细胞内铁离子的含量; 荧光分光光度计检测2组细胞的荧光强度变化, 以确定细胞铁摄入能力的改变。结果 随着FeSO4浓度增加, SH-SY5Y细胞存活率逐渐降低。200 μmol/L FeSO4可导致SH-SY5Y细胞存活率明显下降。Ndfip1质粒转染可明显增加SH-SY5Y细胞Ndfip1蛋白表达量, 提高SH-SY5Y细胞铁超载损伤后的存活率, 减少细胞内铁离子含量及细胞对铁离子的摄入。结论 铁超载对神经细胞造成损伤, 导致其存活率降低; Ndfip1可减少铁离子进入神经细胞, 减轻神经细胞内铁蓄积, 降低铁超载对神经细胞的损伤作用, 提高细胞存活率, 从而发挥其保护作用。     

牛蒡苷元对H89诱导的SH—SY5Y细胞损伤的保护作用

目的：考察牛蒡苷元对H89诱导的人神经母细胞瘤SH—SY5Y细胞损伤的保护作用。方法：用蛋白激酶A抑制剂H89处理SH—SY5Y细胞．建立细胞损伤模型。将SH—SY5Y细胞分成正常组（正常细胞）、模型组（经H89处理的细胞）、H89＋牛蒡苷元组（经H89处理后给予牛蒡苷元处理的细胞）和H89＋丹酚酸B组（阳性对照组,经H89处理后给予丹酚酸B处理的细胞）。采用MTT法检测细胞活力、免疫荧光细胞化学法检测细胞中β-淀粉样肽和神经营养因子-3的表达以及Hoechst33258染色法检测细胞凋亡率。结果：H89诱导的细胞损伤模型造模成功。牛蒡苷元在低浓度（0．5μmol·L-1）用最佳,与模型组相比,H89＋低浓度显著提高（P〈0．01）,细胞中β-淀粉样肽的表达下调5．17％（P〈0．05）,而神经营养因子-3的表达上调80．54％（P〈0．01）．凋亡细胞百分比也显著降低（P〈0．05）。结论：低浓度牛蒡苷元对H89诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有显著保护作用。     

五甲基槲皮素预处理对大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤保护作用的机制研究

目的 探讨五甲基槲皮素（PMQ）预处理对大鼠心肌细胞缺氧/复氧（A/R）损伤的保护作用及其线粒体功能的影响。方法 原代培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,经终浓度分别为10,30,100 μmol·L-1 PMQ预处理24 h后,制作A/R损伤,检测培养液中乳酸脱氢酶（LDH） 活性、四唑盐（MTT）比色法检测细胞存活率、流式细胞法检测线粒体膜电位和细胞凋亡情况、线粒体肿胀法检测各组心肌细胞线粒体mPTP开放情况。结果 不同剂量PMQ（10, 30,100 μmol·L-1）预处理24 h后可剂量依赖性的降低LDH活性、增加细胞存活率、减少细胞凋亡（P 〈0.05或P 〈0.01）;30, 100 μmol·L-1 PMQ预处理24 h后,线粒体膜电位更为稳定、mPTP开放减少（P 〈0.05或P 〈0.01）。结论 PMQ预处理24 h后,可产生药理性延迟保护作用,机制与其稳定线粒体膜电位、抑制mPTP开放,进而减少细胞凋亡有关。     

蛹虫草提取物对高糖诱导内皮细胞衰老的影响

目的：探讨蛹虫草乙酸乙酯提取物（CME）对高糖诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）衰老的影响。方法：用高糖（40mmol／L）诱导建立HUVECs衰老体外模型,以冬虫夏草提取物（CSE）（50μg／mL）为阳性对照,观察CME（12．5～100μg／mL）对内皮细胞衰老的干预作用。四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖;SA—β-半乳糖酐酶（SA—β—gal）染色法检测细胞衰老特异性的SA—β—gal活性;流式细胞术检测细胞周期分布和细胞内活性氧（ROS）含量。结果：经高糖干预24、48、72h后,HUVECs增殖活性OD值明显低于对照组;而且在高糖孵育96h后,SA—β-gal染色阳性细胞率明显增加;孵育48h后,处于G0／G1期细胞的百分率和ROS相对水平明显增加（P〈0．01）。与高糖组相比,CME（25～50μg／mL）孵育48和72h后细胞OD值显著提高（P〈0．05）;CME（12．5～100μg／mL）孵育96h后SA-β-gal染色阳性细胞率显著降低（P〈0．01）;孵育48h后Go／G1期的细胞百分率（P〈0．01）、细胞内ROS水平显著降低（P〈0．05）;CME25、50／μg／mL效果优于CME12．5、100〉g／mL（P〈0．05）,且与CSE50ptg／mL作用相近（P〉0．05）。结论：蛹虫草乙酸乙酯提取物可促进内皮细胞生长增殖,可能与其降低细胞内ROS水平,减轻细胞氧化应激损伤有关,从而减轻内皮细胞衰老。     

黄芩苷对SH-SY5Y细胞损伤的Bcl-2和Bcl-xL mRNA基因表达的影响

目的 探讨黄芩苷对过氧化氢(H₂O₂)诱导的SH-SY5Y细胞损伤的Bcl-2和Bcl-xL mRNA表达的影响. 方法 建立人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的体外H₂O₂损伤模型,采用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度黄芩苷对SH-SY5Y细胞存活率的影响,采用Real-time PCR法检测各组细胞的Bcl-2和Bcl-xL表达水平的变化. 结果 50,100,200 μmol.L^-1黄芩苷组细胞存活率分别为130.4%,89.9%和60.9%,H₂O₂损伤组细胞存活率为33.9%,50,100 μmol.L^-1黄芩苷组与H₂O₂损伤组比较,差异有统计学意义(P<0.01). 50,100,200 μmol.L^-1黄芩苷组Bcl-2 mRNA表达量分别为(11.48±0.48),(7.37±1.57),(7.39±2.01),H₂O₂损伤组为(5.84±0.58);50,100,200 μmol.L-1黄芩苷组Bcl-xL mRNA表达量分别为(19.96±2.22),(11.36±3.94),(13.07±2.37),H₂O₂损伤组为(7.95±0.58),50 μmol.L^-1组Bcl-2 和Bcl-xL mRNA与H^₂O^₂损伤组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05). 结论 黄芩苷对H₂O₂诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用,可能与黄芩苷上调Bcl-2和Bcl-xL的表达而起到抗凋亡的作用有关.     

红景天苷对脂多糖诱导的支气管上皮细胞损伤的保护作用

目的：探讨红景天苷对脂多糖（LPS）诱导的正常人支气管上皮细胞（NHBE）损伤的保护作用及机制。方法：培养NHBE细胞,调整其细胞的密度为每毫升含有1＆#215;104个,给予不同浓度的红景天苷（3.3、10、30μg·mL-1）作用24 h,MTT检测细胞的活力,观察红景天苷在正常的情况下对人支气管上皮细胞的影响。在此基础上,以终浓度为2μg·mL-1的LPS作用NHBE细胞6 h,诱导其损伤,然后给予红景天苷24 h,MTT检测细胞活力,收集上清液,ELISA试剂盒检测炎症因子IL-6（白介素-6）、IL-1β（白介素-1β）、TNF-α（肿瘤坏死因子-α）的水平,收集细胞,用Western blot方法测定细胞中的蛋白NF-κB（核因子）、MAPK（丝裂原活化蛋白激酶）的表达。结果：在正常条件下,红景天苷对人支气管上皮细胞的活力无影响,没有损伤作用。红景天苷可明显降低培养液中IL-6、IL-1β、TNF-α的水平（P〈0.01）,降低细胞中NF-κB、MAPK的表达（P〈0.01）。结论：红景天苷可以通过降低IL-6、 IL-1β、TNF-α的水平来减轻LPS诱导的NHBE细胞的损伤,减轻炎症反应。     

多奈哌齐对人脐静脉内皮细胞损伤的防护作用研究

目的 探讨多奈哌齐对过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的防护作用,并研究其作用机制.方法 将实验细胞平均分为对照组、模型组、多奈哌齐组,通过过氧化氢建立细胞损伤模型,采用细胞计数试剂盒( CCK-8)法检测细胞存活率,通过光镜观察细胞形态,Hoechst 33258染色观察细胞凋亡的形态学变化,蛋白质印迹测定细胞中锰超氧化物歧化酶(MnSOD)蛋白表达.结果 多奈哌齐组与模型组比较,细胞存活率明显增加,且差异有统计学意义[(60.8±12.2)％比(44.7±9.3)％,P＜0.05];多奈哌齐组皱缩细胞数量介于模型组和对照组处理组之间;而多奈哌齐组细胞凋亡数量和程度均较模型组降低,差异有统计学意义[(30.8±10.4)％比(45.1±14.1)％,P＜0.05];此外,蛋白质印迹试验结果表明,多奈哌齐组细胞MnSOD蛋白表达强于对照组.结论 多奈哌齐可以明显减少过氧化氢诱导的HUVEC损伤,提高细胞存活率.多奈哌齐对于过氧化氢诱导的内皮细胞损伤的防护作用可能通过上调MnSOD的表达来实现.     

车前子对晶状体上皮细胞氧化损伤防护作用的信号转导机制

目的：研究车前子对过氧化氢（H2O2）所致氧化损伤的晶状体上皮细胞（LEC）内钙（Ca^2＋）、环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）的影响,探讨归肝经明目中药防治白内障的细胞信号转导机制。方法：将H2O2与传代培养的牛LEC共同孵育复制氧化损伤模型,同时加入车前子水提取液孵育后,用四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测LEC活性,用荧光分光光度法检测LEC内钙离子的浓度（[Ca^2＋]i）、放射免疫分析法检测LEC内cAMP和cGMP含量,并探讨不同浓度的车前子及孵育12、24、36h的影响。结果：H2O2组LEC活性下降,车前子可明显增强氧化损伤的LEC活性（P〈0.01）,呈浓度依赖关系和时间依赖关系。H2O2组LEC的[Ca^2＋]i升高,车前子可显著降低由氧化损伤所致的LEC的[Ca^2＋]i的升高（P〈0.01）,呈时间-效应关系。H2O2组LEC的cAMP浓度升高、cGMP浓度下降,车前子可使氧化损伤的LEC的cAMP水平显著降低（P〈0.01）、cGMP水平显著升高（P〈0.01）,也呈时间-效应关系。结论：车前子可明显抑制LEC氧化损伤及凋亡,[Ca^2＋]i、cAMP和cGMP信号系统及其相互作用调节生物学效应可能是其细胞和分子生物学的主要作用机制。