Hsp90抑制剂的研究进展

热休克蛋白90（heat shock protein 90,Hsp90）是热休克蛋白家族中重要的蛋白之一,参与调控,维持细胞内多种蛋白的构象和功能,在调节细胞的生长、分化和凋亡等方面发挥重要的作用。热休克蛋白90抑制剂是一类能与Hsp90调节位点结合,引起Hsp90构象改变干扰其执行分子伴侣的功能,阻碍蛋白质翻译后的加工修饰,使功能蛋白丧失相应的功能甚至诱导底物蛋白降解而发挥药理作用以Hsp90为作用靶点的化合物。近年来的研究表明,很多癌基因蛋白均为Hsp90的客户蛋白,在肿瘤的发生进展方面发挥至关重要的作用,因此,通过抑制Hsp90的功能,间接干扰Hsp90客户蛋白的功能甚至促进癌基因蛋白的降解可以有效的抑制肿瘤的进展。该文主要对Hsp90抑制剂的研究进展做一综述。     

微生物来源的Hsp90抑制剂研究进展

热休克蛋白90(Hsp90)是一种分子伴侣,它的效应蛋白多为细胞内信号转导通路的关键蛋白,参与肿瘤的发生与发展。抑制Hsp90,可在多个通路中产生抗肿瘤效应。因此寻找和开发Hsp90抑制剂已成为肿瘤治疗药物的研究热点。本文综述微生物来源的Hsp90抑制剂及其衍生物的研究进展。     

石见穿醇提取物对血管内皮细胞生物学行为的影响

目的探讨石见穿醇提取物体外对血管内皮细胞生物学行为的影响。方法采用人脐静脉内皮细胞(HUVECs)原代培养模型,通过MTT法观察石见穿醇提取物对HUVECs及人肝癌HepG2细胞增殖的影响;通过Transwell小室迁移、体外小管形成实验,观察石见穿醇提取物对HUVECs迁移、小管形成能力的影响。结果 12.5-200μg/ml的石见穿醇提取物作用于HUVECs48h,细胞增殖抑制率为17.73%-59.70%,明显高于其作用于人肝癌HepG2细胞的7.19%-39.66%(P<0.01);12.5-200μg/ml石见穿醇提取物作用HUVECs 12h后,迁移抑制率为1.83%-64.51%,且抑制作用与药物浓度呈正相关(r=0.940,P<0.05);12.5-200μg/ml石见穿醇提取物作用于HUVECs 24h后,形成管腔数目明显减少,管腔不完整甚至消失。结论石见穿醇提取物在体外能够明显抑制HUVECs增殖、迁移和小管形成,改变血管内皮细胞生物学行为。     

白花丹参对过氧化氢致人脐静脉血管内皮细胞损伤的保护作用

目的研究白花丹参对过氧化氢（H2O2）所致人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）损失的保护作用。方法应用酶消化灌注法培养人脐静脉血管内皮细胞,采用形态学观察和Ⅷ因子抗体免疫荧光检测法进行鉴定;取对数生长期的细胞分组进行干预,应用形态学观察法和MTT法检测各组血管内皮细胞的活性。结果H2O2损伤模型组细胞损伤明显,经白花丹参高、中、低各剂量组的干预,受损情况均有较明显地改善,使细胞活性（OD值）增高。结论白花丹参对H2O2所致的HUVEC损伤具有保护作用。     

丁苯酞对缺氧人脐静脉血管内皮细胞Ang-2蛋白表达的影响

目的:探讨药物丁苯酞(NBP)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)缺氧损伤的保护作用及其对血管生成素2(Ang-2)表达的影响。方法:体外培养HUVEC,建立稳定的内皮细胞缺氧损伤模型。试验分为正常对照组、缺氧损伤模型组、NBP组,按要求分别给予药物处理后,用CCK-8法检测细胞活力,采用免疫细胞化学方法和图像定量分析技术检测平均吸光度,比较各组Ang-2蛋白表达的变化;Western Blot法检测各组Ang-2蛋白的表达情况。结果:NBP可提高HUVEC的存活率;与正常组比较,缺氧组Ang-2蛋白表达量明显升高(P<0.05);与缺氧组比较,NBP组Ang-2蛋白表达进一步增高(P<0.05)。结论:NBP可以上调Ang-2蛋白的表达,对HUVEC缺氧损伤有一定的保护作用。     

转化生长因子β1对人脐静脉血管内皮细胞活性的影响

目的观察转化生长因子β1（TGF—β1）刺激增生性瘢痕成纤维细胞上清液对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）增殖和趋化能力的影响。方法以增生性瘢痕成纤维细胞为实验组,正常皮肤为对照组,添加TGF—β1（10μg/L）为TGF—β1组,向TGF—β1组内添加丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶（Akt）阻断剂Tricirlbine（5Ixmol／L）为Akt阻断剂组,二者皆未添加的瘢痕成纤维细胞为非干扰组,利用各组细胞上清液（条件培养基）培养HUVEC,使用四甲基偶氮唑盐（MTT）法观察各条件培养基对HUVEC增殖的影响,并利用细胞划痕实验和Transwell细胞迁移实验对HUVEC的趋化情况进行评估。结果对照组吸光度值为0．91±0．34,非干扰组1．75±0．15,TGF—B,组3．26±0．58,Akt阻断剂组1．14±0．81。非干扰组吸光度值与对照组和TGF-β1组比较,差异均有统计学意义（均P〈0．01）;而Akt阻断剂组成纤维细胞增殖吸光度值明显低于TGF—β1组（P〈0．01）。细胞划痕24h后,TGF—β1组促使HUVEC划痕的闭合率较非干扰组高（P〈0．01）;而Akt阻断剂组则明显减弱HUVEC划痕闭合的速度（P〈0．01）。Transwell细胞迁移实验中,TGF—β1组迁移的细胞较非干扰组多[TGF—β1组细胞迁移数目：（1718±15）个,非干扰组：（829±2）个,P〈0．01];而Akt阻断剂组阳性细胞迁移率又明显降低[Akt阻断剂组：（935±11）个,P〈0．01]。对照组血管内皮生长因子（VEGF）（65．2±0．3）ng／L,非干扰组（87．0±0．5）ng／L,TGF—β1组（132．7±0．4）ng／L,Akt阻断剂组（70．5±0．6）ng／L。非干扰组与对照组、TGF-β1组与非干扰组、Akt阻断剂组与TGF—β1组比较,差异均有统计学意义（均P〈0．01）。结论TGF—β1可以通过刺激增生性瘢痕成纤维细胞旁分泌VEGF等细胞因子对血管内皮细胞增殖、趋化等能力产生影响。     

门脉高压症患者上消化道出血的护理

目的观察60例门脉高压症患者上消化道出血采用静脉滴注生长抑素、重体后叶素加口服去甲肾上腺素、三腔二囊管压迫止血和内镜直视下进行曲张静脉套扎术等止血方法的护理。方法根据4种不同的止血方法制定相应的护理措施,认真书写护理记录。结果患者临床止血效果较好。结论迅速建立静脉通道,及时扩容补液止血,作好4种止血的护理是治疗门脉高压症患者上消化道出血的保证。     

腹腔镜手术治疗门脉高压症患者的护理体会

门脉高压症是一种由于各种原因造成患者门静脉高压的疾病,主要表现为呕血、黑便,不仅带给患者生理上的痛苦,还带给其精神上的折磨[1].笔者对采用腹腔镜手术治疗门脉高压症患者80例的护理方法进行分析,现报道如下.     

西拉普利对缺氧性肺动脉高压血管内皮细胞保护作用的实验研究

观察大鼠缺氧性肺动脉高压的血液动力学变化，血管内皮细胞损伤的敏感而又特异的指标－循环内皮细胞，血管紧张素转化酶，脂质这氧化产物丙二醛的变化，以西拉普利对上述指标的影响。结果发现：缺氧性肺动脉高压时循环内皮细胞显著产加，而西拉普利治疗后环玻内皮细胞数量低于对照组。     

线粒体凋亡通路在棕榈酸诱导的血管内皮细胞凋亡中的作用

目的探讨线粒体凋亡通路在棕榈酸诱导的人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)凋亡中的作用。方法不同浓度棕榈酸(0.1、0.2、0.4、0.8 mmol·L~(-1))作用HUVECs(0、12、24、48 h),MTT法检测HUVECs增殖能力;免疫荧光法检测HUVECs细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的表达水平;免疫印迹法检测HUVECs中AIF、Cyt-C、cleaved caspase-3、Bcl-2、Bax等线粒体凋亡通路蛋白的表达水平;TUNEL法检测细胞内凋亡水平。结果 0.4 mmol·L~(-1)棕榈酸作用HUVECs 24 h时,细胞增殖率明显降低;AIF、Cyt-C、cleaved caspase-3、Bax/Bcl-2的水平明显升高(P<0.05),细胞凋亡水平明显增高(P<0.05);线粒体通透性抑制剂环孢素A (ciclosporine A, CsA)预处理组HUVECs凋亡水平明显下调(P<0.05)。结论棕榈酸所致血管内皮细胞损伤的发病机制可能与线粒体凋亡相关通路密切关联,此研究对脂毒性心肌损伤的防治有重要意义。     

热休克蛋白90抑制剂的研究进展

热休克蛋白90（heat shock protein90，Hsp90）是生物进化过程中高度保守的一类蛋白质，参与很多生理过程，在信号转导中起重要作用。Hsp90抑制剂与Hsp90结合，抑制Hsp90活性，诱导Hsp90作用蛋白降解，从而阻断细胞的增殖生长，是一类具有开发前景的抗肿瘤、抗病毒药物。现对Hsp90的结构和作用机制以及4类Hsp90抑制剂——格尔德霉素及其衍生物、根赤壳菌素、新生霉素及以嘌呤结构为基础的抑制剂的研究现状进行综述。     

以热休克蛋白90为靶点的抗肿瘤药物研究进展

热休克蛋白90(Hsp90)是ATP依赖性的分子伴侣,参与客户蛋白(client protein)激活并促进其成熟,维持细胞多种蛋白的构象和功能,与细胞的增殖、凋亡、癌变和肿瘤发展密切相关,是很有希望的抗肿瘤药物的作用靶点之一。目前已有多个抗肿瘤Hsp90抑制剂进入Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ 期临床试验。该文综述以Hsp90为靶点的抗肿瘤药物研究进展。     

Tanespimycin: the opportunities and challenges of targeting heat shock protein 90

Background: Heat shock protein 90 (HSP90) is the core of a multi-chaperone complex critical for the folding, trafficking, and stabilization of many client proteins that are involved in tumor cell proliferation, survival, and angiogenesis. Targeting HSP90 results in degradation of these client proteins. Objective: Data supporting the development of tanespimycin, which targets HSP90, are reviewed. Methods: Clinical data available for tanespimycin development are presented. Results: Tanespimycin can be given safely at biologically active doses with mild toxicity such as nausea, vomiting, diarrhea, and fatigue. Although single-agent studies have shown limited activity, combinations of tanespimycin with bortezomib or trastuzumab have suggested promising avenues of further evaluation in multiple myeloma and breast cancer, respectively. Conclusions: Further development of HSP90-targeted strategies include testing of novel chemical structures having better solubility and stability and the potential for oral administration. Targeting of HSP90 in combination with other heat shock proteins, such as HSP70 or HSP27, may be an alternative strategy that warrants further exploration.     

Inhibition of matrix metalloproteinase-2 improves endothelial function and prevents hypertension in insulin-resistant rats

BACKGROUND AND PURPOSE

Insulin resistance is often found to be associated with high blood pressure. We propose that in insulin-resistant hypertension, endothelial dysfunction is the consequence of increased activity of vascular MMP-2. As MMP-2 proteolytically cleaves a number of extracellular matrix proteins, we hypothesized that MMP-2 impairs endothelial function by proteolytic degradation of endothelial NOS (eNOS) or its cofactor, heat shock protein 90 (HSP90).

EXPERIMENTAL APPROACH

We tested our hypothesis in bovine coronary artery endothelial cells and fructose-fed hypertensive rats (FHR), a model of acquired systolic hypertension and insulin resistance.

KEY RESULTS

Treatment of FHRs with the MMP inhibitor doxycycline, preserved endothelial function as well as prevented the development of hypertension, suggesting that MMPs impair endothelial function. Furthermore, incubating endothelial cells in vitro with a recombinant MMP-2 decreased NO production in a dose-dependent manner. Using substrate cleavage assays and immunofluorescence microscopy studies, we found that MMP-2 not only cleaves and degrades HSP90, an eNOS cofactor but also co-localizes with both eNOS and HSP90 in endothelial cells, suggesting that MMPs functionally interact with the eNOS system. Treatment of FHRs with doxycycline attenuated the decrease in eNOS and HSP90 expression but did not improve insulin sensitivity.

CONCLUSIONS AND IMPLICATIONS

Our data suggest that increased activity of MMP-2 in FHRs impairs endothelial function and promotes hypertension. Inhibition of MMP-2 could be a potential therapeutic strategy for the management of hypertension.     

H型高血压患者血管内皮功能变化及与血浆同型半胱氨酸水平的关系

目的 探讨H型高血压患者血管内皮功能变化及与血浆同型半胱氨酸水平(Hcy)的关系.方法 收治的原发性高血压患者120例,根据血浆Hcy水平分为观察组(82例H型高血压患者,Hcy≥10 μmol/L)和对照组(38例单纯原发性高血压患者,Hcy<10 μmol/L),选择同期体检的30例健康志愿者为空白组,检测3组血清一氧化氮(NO)、一氧化氮合成酶(NOS)、肱动脉血管内皮依赖性舒张功能(EDFMD)表达水平,Peaeson直线相关分析法研究原发性高血压患者血浆Hcy表达与血管内皮功能变化的相关性,Logistic 回归分析法分析血管内皮功能指标(NO、NOS、EDFMD)的可能影响因素.结果 高血压患者血浆Hcy较空白组显著较高,观察组H型高血患者Hcy较对照组单纯原发性高血压患者高,差异均有统计学意义(P<0.05);高血压患者血管内皮功能指标NO、NOS、EDFMD较空白组低,观察组上述指标较对照组显著较低,差异均有统计学意义(P<0.05);Peaeson直线相关分析显示高血压血浆hcy表达和血管内皮功能指标均呈显著负相关关系(r=-0.627、-0.608、-0.713,P<0.05);Logistic 回归分析法显示血浆Hcy、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)是血管内皮功能损害的影响因素(OR=1.162、1.427、3.584,P<0.05).结论 高血压患者血浆Hcy异常升高和伴有血管内皮功能损害,且在H型高血压患者中表现尤为明显;血浆Hcy过度表达是血管内皮功能指标异常的影响因素,二者表达呈高度负相关.     

长春西汀对体外培养的人脐静脉内皮细胞脂质过氧化的影响

目的 观察长春西汀(吲哚类生物碱,治疗和预防缺血性脑血管病)对活性氧造成的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)脂质过氧化损伤的影响.方法 用含100 g·L-1小牛血清的DMEM培养液体外培养HUVEC,用不同浓度(10、20、、50 100 μmol·L-1)的H2O2作为外源性活性氧,作用于HUVEC,用3H-胸腺嘧啶脱氧核苷掺入和细胞周期时相测定等方法,观察给予不同浓度(10、50、100 mmol·L-1)长春西汀预处理后,长春西汀对H2O2作用后的HUVEC增殖的影响.结果 H2O2对HUVEC的增殖活性具有剂量依赖性抑制作用;长春西汀可以抑制H2O2诱导的脂质过氧化损伤,且具有剂量依赖性.结论 长春西汀对动脉粥样硬化的防治可能具有应用前景.     

庆大霉素对人肾小管上皮细胞系(HK-2)热休克蛋白(HSP)70表达的影响

目的观察了庆大霉素在体外对肾小管上皮细胞内HSP70表达的影响。方法将庆大霉素(100mg·L-1)作用于人肾小管上皮细胞系(HK-2),用MTT法检测庆大霉素对HK-2细胞增殖活力的影响,应用免疫细胞化学和Westernblot法观察了HSP70蛋白表达的改变,采用RT-PCR法检测HSP70mRNA表达的变化。结果庆大霉素在作用HK-2细胞24、48、72h后,MTT吸光度值为0·166±0·02、0·181±0·009、0·237±0·016,均低于对照组0·187±0·011、0·32±0·016、0·515±0·035(P<0·01);HSP70蛋白阳性表达率(%)分别为69±17、86±21、89±25,均高于对照组6±3、4±3、7±2(P<0·01);还可增加HSP70蛋白和mRNA表达(P<0·01)。结论庆大霉素在降低人肾小管上皮细胞系细胞增殖活力的同时,增加HSP70的表达。     

Heat shock protein 90 inhibitors in the treatment of cancer: current status and future directions

Introduction: Heat shock protein 90 (HSP90) serves as a critical facilitator for oncogene addiction. There has been augmenting enthusiasm in pursuing HSP90 as an anticancer strategy. In fact, since the initial serendipitous discovery that geldanamycin (GM) inhibits HSP90, the field has rapidly moved from proof-of-concept clinical studies with GM derivatives to novel second-generation inhibitors.

Areas covered: The authors highlight the current status of the second-generation HSP90 inhibitors in clinical development. Herein, the authors note the lessons learned from the completed clinical trials of first- and second-generation inhibitors and describe various assays attempting to serve for a more rational implementation of these agents to cancer treatment. Finally, the authors discuss the future perspectives for this promising class of agents.

Expert opinion: The knowledge gained thus far provides perhaps only a glimpse at the potential of HSP90 for which there is still much work to be done. Lessons from the clinical trials suggest that HSP90 therapy would advance at a faster pace if patient selection and tumor pharmacokinetics of these drugs were better understood and applied to their clinical development. It is also evident that combining HSP90 inhibitors with other potent anticancer therapies holds great promise not only due to synergistic antitumor activity but also due to the potential of prolonging or preventing the development of drug resistance.     

苏黄止咳胶囊对老年患者动态血压的影响

目的观察苏黄止咳肢囊对老年患者动态血压的影响。方法对80例老年感冒后咳嗽患者于应用苏黄止咳胶囊前、应用后第3天和第7天进行动态血压监测各参数进行对比分析,包括24 h平均收缩压（24hSBP）、24h平均舒张压（24hDBP）、日间平均收缩压 （dSBP）、日间平均舒张压（dDBP）、夜间平均收缩压（nSBP）、夜间平均舒张压（nDBP）和昼夜平均动脉压差值百分率（d-nMAP/dMAP）。结果用药后第3天和第7天动态血压24hSBP,24hDBP,dSBP, dDBP, nSBP,nDBP和d-nMAP/dMAP与用药前的比较无统计学差异 （p〉0.05）。结论苏黄止咳胶囊可以安全用于无高血压、心脏病及肝肾肺疾病的老年感冒后咳嗽患者。