A型产气荚膜杆菌α毒素单克隆抗体对小鼠治疗作用的观察

本文通过一系列小鼠动物实验，以观察A型产气英膜杆菌α毒素单克隆抗体的治疗作用，无论从中和实验或单抗治疗受感染小鼠的实验中均可证明，此单克隆抗体对小鼠有其保护作用。它能部分地抑制其α毒素抗原的活性，使受该毒素感染的小鼠延长生存时间，甚至得到完全保护。文章也提示有待今后进一步解决的问题。如：提高其单抗效价，再制备多株单抗以针对α毒素的多个抗原决定簇，使得治疗效果更为理想。本研究为制备特异性好、效价高的α毒素单抗作了尝试，为该毒素单抗的进一步制备和过渡到临床应用打下了较好基础。     

产气荚膜杆菌α毒素单克隆抗体诊断盒的研究

应用细胞杂交瘤技术制备了10株抗产气荚膜杆菌α毒素的单克隆抗体(PM_1～PM_(10)),从中选出PM_(10)和PM_2 2种做为包被固相和酶标记抗体,组成ELISA试剂盒。通过检测模拟标本和动物感染标本,证明该试剂盒特异性和敏感性较高,检出敏感度可达5～10ng/ml。     

抗A型产气荚膜梭菌α毒素mAb V_H和V_L基因的克隆与序列测定

用提取的Ａ 型产气荚膜梭菌α毒素包涵体为免疫原, 制备了１ 株ｍＡｂ ２Ｅ３ 。其Ｉｇ 亚类为ＩｇＧ３, 细胞培养上清和腹水的ｍＡｂ 效价分别为１∶１０２４ 和１∶１０８ 。该ｍＡｂ ２Ｅ３ 可中和α毒素的磷脂酶Ｃ 活性和溶血活性, 对α毒素致死性腹腔攻击的小鼠具有良好的被动保护作用。另外, 应用ＲＴＰＣＲ 技术, 从杂交瘤细胞株２Ｅ３ 中, 扩增出ｍＡｂ ＶＨ 和ＶＬ基因, 分别克隆至载体ｐＧＥＭＴ中。序列分析证实, ＶＨ 基因为３５７ ｂｐ, 编码１１９ 个氨基酸;ＶＬ 基因为３２４ ｂｐ, 编码１０８ 个氨基酸。计算机分析表明,ＶＨ 和ＶＬ基因均为新发现的基因序列, 符合功能性重排的鼠抗体可变区基因的特征。ＶＨ 和ＶＬ 基因分别属于鼠免疫球蛋白重链Ⅱ（ Ｂ） 和轻链κⅢ家族。     

抗A型产气荚膜杆菌α毒素单克隆抗体的研制

α毒素是A型产气荚膜杆菌所致的严重创伤性感染气性坏疽的主要致死因素,至今尚无有效的防治方法,使用抗生素和多价抗毒素效果不明显。针对此问题,作者采用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗α毒素单克隆抗体,以探索高效、特异、均一的单克隆抗体用于治疗气性坏疽病人α毒素中毒的可能性。     

抗A型产气荚膜梭菌α毒素单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及鉴定

α毒素是A型产气荚膜梭菌所致严重创伤性气性坏疽的主要致死因素,至今尚无有效的防治方法,使用抗生素和多价抗毒素效果不明显t‘J。为此,我们采用细胞融合技术,制备了抗a毒素的单克隆抗体（InAb）,为治疗气性坏疽患者的a毒素中毒提供可能性。互材料和方法1．l抗原和细胞a毒素抗原系重组菌株BLZI（DE3）（PXlryAI）的表达产物,按照表达系统十ET－28b（＋）的操作手册进行提取。SpZ／0骨ff＄细胞,由本室保存。且．2实验动物6周一百周龄＊alb／C小鼠,由卫生部长春生物制品研究所提供。互．3抗a霉素mAb的制备动物免疫、细胞融合…     

抗A型产气荚膜梭菌α毒素mAb VHt VL基因的克隆与序？…

用提取的Ａ型产气荚膜梭菌α毒素包涵体为免疫原,制备１株ｍＡｂ ２Ｅ３。其Ｉｇ亚类为ＩｇＧ３,细胞培养上清和腹水的ｍＡｂ效价分别为１：１０２４和１：１０＾８。该ｍＡｂ ２Ｅ３可中和α毒素致死性腹腔攻击的小鼠具有良好珠被动保护作用。另外,应用ＲＴ－ＰＣＲ技术,从杂交瘤细胞株２Ｅ３中,扩增出ｍＡｂ ＶＨ和ＶＬ基因,分别克隆至载体ｐＧＥＭ－Ｔ中。     

A型产气荚膜杆菌α毒素单克隆抗体对小鼠治疗作用的观察

<正> α毒素是A型产气荚膜杆菌的主要致死性毒素,本质为卵磷酯酶。此酶在钙、镁离子作用下具有致死、坏死、溶血等活性。战伤中伤口遇有产气荚膜杆菌感染时,该菌所产生的α毒素可作用毛细血管,致使渗透作用发生障碍,引起水肿、出血、局部组织坏死等一系列病变,最终导致死亡。因此,受产气荚     

A型产气荚膜杆菌α毒素单克隆抗体对小鼠治疗作用的观察

本文通过一系列小鼠动物实验,以观察A型产气荚膜杆菌α毒素单克隆抗体的治疗作用,无论从中和实验或单抗治疗受感染小鼠的实验中均可证明,此单克隆抗体对小鼠有其保护作用。它能部分地抑制其α毒素抗原的活性,使受该毒素感染的小鼠延长生存时间,甚至得到完全保护。文章也提示有待今后进一步解决的问题。如:提高其单抗效价,再制备多株单抗以针对α毒素的多个抗原决定簇,使得治疗效果更为理想。本研究为制备特异性好、效价高的α毒素单抗作了尝试,为该毒素单抗的进一步制备和过渡到临床应用打下了较好基础。     

抗艰难梭菌A毒素单克隆抗体的制备及特性分析

目的 :制备抗艰难梭菌A毒素的单克隆抗体 (mAb)并鉴定其特性。方法 :用纯化的艰难梭菌A毒素免疫BALB/c小鼠 ,将免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2 / 0融合 ,采用间接ELISA筛选杂交瘤细胞。用ELISA检测mAb腹水的效价、相对亲和力和进行表位分析 ;用Westernblot检测mAb的特异性。结果 :得到 6株杂交瘤细胞株 ,5C10株细胞分泌的mAb为IgG2a ,4B5和 8A1株细胞分泌的mAb为IgG1,其他 3株细胞mAb (2H7、3E9和 6G8)均分泌IgM。中和试验表明 ,所有的mAb均无中和活性。腹水mAb的效价均在 10 -4以上 ,其中mAb 2H7、6G8、5C10、4B5和 8A1具有共同的表位 ,而mAb 3E9识别的位点与其他 5株不同。mAb 8A1和 4B5的相对亲和力>10 5,其他 4株mAb的相对亲和力 >10 4。在非变性条件下 ,PAGE后Westernblot的结果显示 ,6株mAb均可与相对分子质量 (Mr)为 5 5× 10 4的A毒素产生反应 ;而在变性条件下 ,还原与非还原SDS PAGE后Westernblot均显示 ,6株mAb均可与Mr 为 5× 10 4～ 2 4× 10 4的A毒素产生反应。结论 :6株杂交瘤细胞株均能分泌抗艰难梭菌A毒素的特异性mAb ,为艰难梭菌A毒素的研究提供了有利的工具     

禽多杀性巴氏杆菌(5∶A)荚膜保护性抗原提纯及单克隆抗体细胞系的建立

用机械物理方法与Sephadex G-200分子筛层析、DEAE-cellulose离子交换层析相结合,将多杀性巴氏杆菌(5∶A)荚膜抗原粗提物(CE)分为P_1、P_2两种成份,并经免疫保护性试验证明:荚膜中含有保护性蛋白成份P_1,P_1分子量为129.1 kD,且至少含分子量分别为46.7kD、42.6kD和39.8kD的3种蛋白亚基。 用CE免疫BALB/c小鼠,首次建立了2株抗P_1的单克隆抗体细胞1B和2B_7。特异性试验表明,所制备的McAb只与多杀性巴氏杆菌反应,而不与其他细菌交叉为特异性高、纯度高的单克隆抗体,对于多杀性巴氏杆菌病的诊断、流行病学调查及防治有一定的意义。     

破伤风毒素C片段单克隆抗体的研制

目的:研制抗破伤风毒素C片段(TetC)的单克隆抗体(mAb).方法:以纯化蛋白His-TetC免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,末次加强免疫后取其脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0-Ag-14融合,应用间接ELISA筛选阳性克隆.Westernblot鉴定mAb的特异性,并用mAb亚类试剂盒鉴定mAb亚类.结果:共获得5株稳定分泌抗TetC的杂交瘤细胞株,分别命名为1E5、5G10、689、7D6、7F5,其腹水效价除1E5为3×210外,其余均为1×105,亚类鉴定结果均为IgG1.West-唧blot分析结果显示,5株mAb均与融合蛋白His-TetC发生特异性反应.结论:成功制备了抗TetC的mAb,为进一步研究TetC的生物学功能、破伤风毒素结构与功能的关系以及建立快速检测破伤风抗毒素水平的方法奠定了基础.     

抗肉毒神经毒素A(BoNT/A)单克隆抗体的制备与鉴定

目的 :制备抗肉毒毒素A(BoNT/A)的单克隆抗体 (mAb)。方法 :用纯化的重组BoNT/A Hc片段免疫BALB/c小鼠 ,取其脾细胞与骨髓瘤Sp2 /0融合 ,经间接ELISA筛选和克隆化制备杂交瘤细胞系 ,及Western免疫印迹分析等方法对mAb进行特异性鉴定。结果 :获得 3株杂交瘤细胞株 :命名为4A8、2F7和 4F2 ,IgG亚类鉴定均为IgG1,腹水mAb的效价在 1× 10 -4～ 1× 10 -6之间。其中 ,4A8和 4F2能稳定分泌抗BoNT AmAb,并可特异性地识别重组BoNT/A和天然BoNT/A ,特别是 4A8可保护小鼠抵抗 10LD50 BoNT/A的攻击。结论 :成功地制备 3株特异性抗BoNT/AmAb ,并有 1株属于中和性mAb ,为BoNT/A的检测和肉毒中毒的临床治疗奠定了基础     

抗产气荚膜杆菌θ毒素单克隆抗体与链球菌溶血素O的交叉反应性

本文报告六株抗产气荚膜杆菌θ毒素的单克隆抗体的特性鉴定,发现其中四株抗体2C_3、2D_4、2B_4、及3F_(11)都不能中和θ毒素,也不与链球菌溶血素O结合发生交叉中和反应。而另外两株抗体(3H_(10)和2C_5)则与链球菌溶血素O都结合,并发生交叉中和反应。3H_(10)的中和活性高于2C_5,在此基础上可见与θ毒素和链球菌溶血素的结合活性。这两株抗体在该毒     

抗A型产气荚膜杆菌PBbK株及老山株单克隆抗体细胞系的建立及应用

本文报道了应用杂交瘤技术制备分泌抗A型产气荚膜杆菌的四株单克隆抗体细胞系,其中一株(2G_(11))为抗芽胞(McAb),另外三株(1A_2、3C_5、3D_6)为抗菌体McAb。经实验证明,此单抗有较好的特异性和敏感性。应用间接免疫荧光检测,仅与A型产气荚膜杆菌起反应。而与气性坏疽菌属中其它常见菌不发生交叉。即使待检标本中此菌数量极少,也能检出,并能清楚辨认,结果可靠。应用此类McAb对33例疑有产气荚膜杆菌感染之伤口分泌物作直接涂片检测不仅在特异性和敏感性上优于培养法,且大大缩短了检测时间,确能达到及早为临     

禽多杀性巴氏杆菌（5：A）荚膜保护性抗原提纯及单克隆抗体细胞系的建立

用机械物理方法与Sephadex G-200分子筛层析、DEAE-cellulose离子交换层析相结合，将多杀性巴氏杆菌(5：A)荚膜抗原粗提物(CE)分为P1、P2两种成份，并经免疫保护性试验证明：荚膜中含有保护性蛋白成份P1，P1分子量为129．1kD，且至少含分子量分别为46．7kD、42．6kD和39．8kD的3种蛋白亚基。     

脾内免疫法制备抗α2-抗纤溶酶单克隆抗体

α2抗纤溶酶(α2Ａｎｔｉｐｌａｓｍｉｎ,α2ＡＰ)是由肝脏合成分泌的,含有452个氨基酸的单链糖蛋白,分子量为70000。α2ＡＰ属于丝氨酸酶抑制物家族成员之一,在人血浆中α2ＡＰ是主要的纤溶酶抑制物,在控制纤溶中起关键作用[1]。为此制备α2ＡＰ单克隆抗体,建立ＥＬＩＳ?..