多重PCR方法检测食品中转基因成分

根据转基因农作物中最常用的花椰菜花叶病毒启动子（CaMV35S）和根癌农杆菌终止子（NOS）的序列，设计合成了两对不同的引种和相对应的两种荧光双链探针（FDCP），分别建立了多重PCR，应用FDCP的实时荧光PCR同时检测转基因成分35S启动子和NOS终止子的方法，并利用该套方法对马铃薯、大豆、玉米、甜椒、番茄等实物样品进行了检测，发现13份样品有6份检出35S启动子、NOS终止子，其余7份样品的检测结果为阴性，表明作者建立的多重PCR方法能有效检测出35S和NOS成分，其中多重PCR法具有灵敏度高、特异性好的特点，多重荧光PCR法则更为简便、快速、准确。     

转基因食品的快速PCR鉴定

用十六烷基-二甲基-乙基-溴化铵(CTAB)法快速高效地从样品中提取了可供分析的基因组DNA，经PCR扩增，鉴定了含有35S启动子和NOS终止子的转基因样品，该方法的灵敏度可达0．1％，并且具有很好的稳定性。     

玉米中转基因成分的定性PCR检测

利用改良CTAB法提取玉米产品的基因组DNA,应用PCR检测方法,并以玉米特异性内源基因IVR为内参,花椰菜花叶病毒35S启动子（CaMV35S启动子）、农杆菌胭脂碱合成酶终止子（NOS终止子）为靶基因检测玉米中是否存在转基因成分。实验结果表明,有些玉米样品中存在转基因成分,表明市场上存在未经标识的转基因玉米及其加工品。     

玉米转基因成分的非同源模板竞争定量PCR检测

建立了玉米转基因成分中35S启动子非同源模板的竞争定量PCR检测系统．竞争定量PCR的关键问题是内标物的制备．实验中非同源模板的构建是采用PCR方法对大肠杆菌基因组进行低严紧型扩增，回收预期DNA片段并将其构建到T-easy载体上．通过调整非同源模板浓度使竞争物PCR产物亮度与1％GMO玉米的亮度相同，从而确定转基因玉米的检出限为1％．然后以确定的内标物浓度与不同含量的GMO玉米样品进行竞争定量PCR反应，以此进一步确定样品中GMO的含量范围．     

转基因食品及其检测技术

就转基因食品的发展现状，转基因食品的安全性及其检测技术做了介绍。     

应用间接ELISA方法定量检测转基因抗虫玉米

应用纯化的Bt1杀虫晶体蛋白质作为标准蛋白和免疫抗原，通过抗体-抗原-酶标抗体反应，建立了间接酶联免疫吸附测定法（ELISA），以快速检测转基因抗虫玉米中的BtL表达蛋白，用建立的ELISA法对4种进口玉米实物样品进行了测定，实验结果得到了免疫印迹分析的验证，并与进口试验盒方法的定量分析结果相一致。     

基于gyrB基因的克罗诺杆菌属菌株PCR快速检测方法的建立

43株克罗诺杆菌属菌株和5株肠杆菌属菌株的gyrB基因被克隆并测序,根据已测序的结果设计了一对特异性引物.经优化后的PCR反应体系只能扩增到43株克罗诺杆菌属菌株的目的片段(438 bp),而无法扩增出其他30株非克罗诺杆菌属菌株.通过系统生物学试验评价得出:该PCR方法的基因组DNA检测灵敏度是1.41 pg/PCR.将56 cfu阪崎克罗诺杆菌菌株ATCC 29544人工污染到3种不同的婴幼儿配方粉中,经人工增菌培养(37℃)6 h后即可扩增到目的片段.将该方法应用于25份实际样品的检测中,结果有3份样品扩增到目的片段.但是经传统的国家标准方法进行检测,只有2份样品检测到克罗诺杆菌属菌株.该方法的建立为快速准确鉴定食品中克罗诺杆菌属菌株提供了一种非常有用的技术手段.     

玉米中转基因成分的定性PCR检测

利用改良 CTAB 法提取玉米产品的基因组 DNA,应用 PCR 检测方法,并以玉米特异性内源基因 IVR 为内参,花椰菜花叶病毒 35S 启动子(CaMV35S 启动子)、农杆茵胭脂碱合成酶终止子(NOS终止子)为靶基因检测玉米中是否存在转基因成分.实验结果表明,有些玉米样品中存在转基因成分,表明市场上存在未经标识的转基因玉米及其加工品.     

转基因产品的PCR—ELISA液相杂交检测条件研究

确定杂交液成分，选择探讨浓度，将5′端标记生笔素的PCR扩增产物与5′端标记地高辛的探针呈液相混合，在PCR管中按优化后的条件（92℃，5min；55℃，5min）进行液相杂交。杂交产物通过链霉亲和素被固定在微孔表面，同时在含高浓度二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide,DMSO）的杂交液中将非特异结合的探针解离，然后对被固定的特异杂交产物进行ELISA检测。PCR－ELISA液相杂交检测方法操作简便，特异性高，避免了繁琐的杂交程序和对人体有害的溴乙锭，适用于转基因产品及春加工食品的快速检测。     

转基因粮食作物的研究进展与PCR法检测

介绍了基因枪法、农杆菌介导法和花粉管通道法等转基因方法。对小麦、水稻、大豆、玉米4种粮食作物的转基因技术研究进展,以及PCR技术对转基因粮食的检测进展进行了综述,     

SYBR Green实时定量PCR检测外源基因拷贝数

以SYBR Green为荧光染料,通过携带双基因GFP和IL-24的质粒标准品绘制双标准曲线,并以绝对定量的方法检测GFP在稳定细胞株Hela-GFP基因组中的整合拷贝数。结果证实,该方法能有效检测外源基因在基因组上的整合拷贝数。从而建立起一种高效且廉价的检测外源基因拷贝数的通用方法来广泛应用于各种实验。     

玉米转基因成分的非同源模板竞争定量PCR检测

建立了玉米转基因成分中35S启动子非同源模板的竞争定量PCR检测系统.竞争定量PCR的关键问题是内标物的制备.实验中非同源模板的构建是采用PCR方法对大肠杆菌基因组进行低严紧型扩增,回收预期DNA片段并将其构建到T-easy载体上.通过调整非同源模板浓度使竞争物PCR产物亮度与1%GMO玉米的亮度相同,从而确定转基因玉米的检出限为1%.然后以确定的内标物浓度与不同含量的GMO玉米样品进行竞争定量PCR反应,以此进一步确定样品中GMO的含量范围.     

白斑综合征病毒PCR检测方法的建立及初步应用

引起白斑综合征(White spot syndrome, WSS)的白斑综合征病毒(White spot syndrome virus, WSSV)是一种传播速度快、致死率高的对虾病毒,对全球对虾养殖业构成了严重威胁。为及早诊断WSS,防止WSS的传播和暴发,有必要开发一种适用于对虾养殖场所的高灵敏度WSSV检测方法。该文针对保守区VP28序列设计和优化了一种可以特异地扩增WSSV的聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction, PCR)检测方法。WSSV扩增产物在凝胶电泳图上可观察到清晰且单一的目的条带,而非靶标病毒则没有对应扩增产物出现,最低检测限可以达到50拷贝/反应;利用该PCR方法检测杭州地区采集的112份对虾混样样品,WSSV阳性率为15.7%。该特异和灵敏的PCR方法可被应用于WSS流行早期监控。     

浅析转基因食品的检测

转基因食品的检测是指对食品原料和深加工食品中的转基因成分进行检测。目前,国际市场出现越来越多的转基因食品,对其进行检测是保证其质量和安全的必要手段。     

乳品中4种常见致病菌多重PCR检测方法的建立

建立同时快速检测乳品中检出率较高的沙门氏菌、单核细胞增生李斯特菌、金黄色葡萄球菌、克罗诺杆菌属(原阪崎肠杆菌)4种食源性致病菌的四重PCR方法。采用针对沙门氏菌omp C基因、单核细胞增生李斯特菌hly基因、金黄色葡萄球菌nuc基因、克罗诺杆菌属gyr B基因特异性引物,建立并优化多重PCR体系,检测特异性和灵敏度,并用建立的体系检测实际样品。该体系具有特异性,对混合模板中沙门氏菌模板的灵敏度达10-6 ng/μL,单核细胞增生李斯特菌、克罗诺杆菌属的灵敏度达10-3 ng/μL,金黄色葡萄球菌的灵敏度达10-2 ng/μL。可有效检出经过增菌后初始菌浓度为1 CFU/m L的4种菌。本多重PCR方法能够特异、高效、准确地检测沙门氏菌、单核细胞增生李斯特菌、金黄色葡萄球菌、克罗诺杆菌属4种食源性致病菌。     

单纯疱疹病毒Ⅰ,Ⅱ半巢式PCR检测方法的建立和在病毒性脑炎诊 …

为进一步提高ＰＣＲ诊断方法的特异性和敏感性，在单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）ＴＫ基因区设计了一对外层公用引物和两个内层分型引物，建立了半巢式ＰＣＲ检测和分型ＨＳＶ的方法。用该方法检测了天津地区６４例病毒性脑炎患者和４６例其他中枢神经系统疾病患者（对照组）的脑脊液（ＣＳＦ）标本，病脑组了阳性率为１５．６３％，其中９例为ＨＳＶ－１感染，１例为ＨＳＶ－２感染。对照组阳性率为２．１７％。本方法在发病后第１天好可测     

浅论转基因食品的安全性

随着生物技术的发展,生物技术已开始在食品领域中得到广泛运用,并以转基因食品的形式出现。由于转基因食品是由外源基因导入产生的,因此,人们从自身健康和生态环境两方面对转基因食品的安全性提出了疑问。     

论我国转基因食品标识制度的完善

我国现有转基因食品标识制度体系比较粗陋且威慑力严重不足,标识制度的监管主体有待优化,转基因食品安全性宣传缺乏。参考欧美、日本等发达国家的转基因食品标识制度,提出了通过扩大转基因食品标识范围和内容、加大违法行为的惩治力度,优化监管的主体,加强制度宣传和运行环境的优化,以及扩大并加强公众的参与等建议,以期使消费者的知情权和选择权得到更有效的保障,并促进转基因食品相关产业的有序健康发展。     

以DNA为靶标的芝麻油定量PCR检测技术

根据GenBank中芝麻种属特异性基因序列,利用分子生物学软件oligo7.60在其保守区设计并合成相应的特异性引物,提取芝麻DNA作为标准品模板,采用荧光定量PCR建立了芝麻油的定量检测技术。结果表明:芝麻特异性引物S199对芝麻DNA的定量检测效果最好。在芝麻油中以不同比例掺入其他食用油(大豆油),利用qPCR进行定量分析,最低检出限为1%。     

转基因食品的安全性与发展前景分析

在对转基因食品进行分类的基础上,论述了转基因食品存在的技术优势和潜在的安全问题,指出转基因食品具有广阔的发展前景.