miR125a对胆管癌细胞株QBC939增殖、凋亡影响及可能机制

目的探讨miR125a对胆管癌细胞株QBC939细胞增殖及凋亡的影响及可能机制。方法实时荧光定量PCR检测52例经手术和病理证实的肝外胆管癌,31例癌旁组织及10例正常胆管组织标本miR125a的表达,免疫组化检测MMP-9蛋白表达。miR125a转染胆管癌细胞株QBC939,MTT法检测细胞增殖,流式细胞分析法检测细胞周期,Caspase-3试剂盒检测凋亡,Western blot检测MMP-9蛋白表达。结果胆管癌组织miR125a表达明显下调,低于正常胆管组织(P<0.05),MMP-9明显高于正常胆管组织(P<0.05)。与对照质粒组比较,转染miR125a胆管癌细胞QBC939增殖受到抑制,流式细胞分析法表明转染miR125a的胆管癌细胞QBC939导致G1阻滞,Caspase-3试剂盒检测显示凋亡增加,Western blot分析表明转染miR125a的胆管癌细胞QBC939中MMP-9的表达出现明显的下调。结论miR125a在肝外胆管癌中低表达,它们可能与胆管癌的发生有关。胆管癌细胞株QBC939 miR125a表达上调,能够抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡和G1阻滞,miR125a的作用可能与MMP-9的表达相关。     

大黄素对人胆管癌多药耐药细胞QBC_（939）/ADM的耐药逆转作用

目的探讨大黄素（Emodin,EM）对人胆管癌多药耐药细胞QBC939/ADM的耐药逆转作用。方法细胞生长周期、凋亡率采用流式细胞术（FCM）,多药耐药P糖蛋白（P-gP）以免疫组织化学（SP）法检测。结果阿霉素（ADM）、紫杉醇分别与EM联合作用于人胆管癌多药耐药细胞QBC939/ADM的凋亡率比单独作用有显著提高。细胞周期分布显示：ADM、紫杉醇分别与EM联合作用于人胆管癌多药耐药细胞QBC939/ADM,使QBC939/ADM阻滞于G2/M期的细胞数明显增加。EM和紫杉醇联合作用后,人胆管癌多药耐药细胞QBC939/ADM中多药耐药P糖蛋白（P-gP）的表达由72.00%降低到46.00%（P〈0.01）。结论EM对QBC939/ADM细胞的多药耐药性有逆转作用。其作用机理可能与人胆管癌细胞P-gP的表达有关,通过与化疗药物竞争性结合P-gP的结合位点发挥疗效。     

缺氧诱导因子-1α和M2型丙酮酸激酶在胆管癌细胞中的表达及对糖酵解的影响

目的分析缺氧诱导因子-1α和M2型丙酮酸激酶在胆管癌细胞中的表达情况及其对糖酵解的影响。方法分别以不同浓度的氯化钴溶液诱导的缺氧条件下培养胆管癌QBC939细胞,测定并比较培养24h后各组细胞HIF-1α、PK-M2蛋白表达水平和乳酸分泌量。结果缺氧组的HIF-1α、PK-M2蛋白表达水平均显著高于常氧组,胆管癌QBC939细胞24h乳酸分泌量,随氯化钴浓度逐渐增加,且均显著高于常氧培养时分泌的乳酸量,比较差异具有统计学意义(P0.05)。经Pearson相关分析法分析,PK-M2与HIF-1α呈显著正相关(r=0.436,P=0.002)。结论缺氧诱导因子-1α和M2型丙酮酸激酶在人胆管癌QBC939细胞中的蛋白表达水平显著提高,且均在胆管癌细胞糖酵解水平的升高过程中发挥重要作用。     

TSA对胆道癌细胞系生长的影响

目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂在体外和体内对胆囊癌细胞系和肝外胆管癌细胞系生长的影响,并探讨其临床应用价值。方法:用组蛋白去乙酰化酶抑制剂-曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)作用于胆囊癌细胞系(Mz-ChA-1)和肝外胆管癌细胞系(QBC939、KMBC、OZ),用MTT法检测TSA对这些细胞系生长的影响。将Mz-ChA-1接种裸鼠皮下建立胆囊癌裸鼠种植模型,观察TSA处理前后体内种植瘤生长的变化。结果:TSA可以抑制Mz-ChA-1和QBC939、KMBC、OZ的增殖,以上作用与药物浓度在一定范围内呈正相关。成功建立胆囊癌裸鼠体内种植模型,TSA处理后裸鼠体内种植瘤生长受抑制。结论:TSA在体外能抑制胆囊癌细胞系和肝外胆管癌细胞系的增殖;TSA在体内能抑制胆囊癌细胞系的增殖。     

阿伐他汀诱导人胆管癌QBC939细胞凋亡的研究

目的 观察阿伐他汀(ATV)对人胆管癌QBC939细胞增殖及凋亡的影响.方法 应用细胞培养技术培养QBC939细胞,经不同浓度的阿伐他汀处理后,以MTT法检测QBC939细胞的存活率,通过光镜、倒置显微镜及琼脂糖凝胶电泳检测胆管癌细胞凋亡的形态学特征、生化学特征.结果 在阿伐他汀的作用下,QBC939细胞的生长、增殖变的相对缓慢,凋亡的细胞出现膜小泡、凋亡小体等特征性改变;DNA电泳呈现典型的梯状条带.结论 阿伐他汀可抑制胆管癌细胞的生长、增殖,并可诱导细胞发生凋亡,且其作用呈剂量效应关系.     

维拉帕米联合阿霉素抑制胆管癌细胞的实验研究

目的：研究维拉帕米联合阿霉素抑制胆管癌细胞的作用并探讨维拉帕米增强胆管癌细胞对阿霉素敏感性的机制。方法：以体外培养的人胆管癌细胞QBC939为实验模型,分别或联合不同浓度的维拉帕米与阿霉素作用于QBC939,光学显微镜下观察药物作用后QBC939的形态学变化,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法、流式细胞术（FCM）进行检测。结果：在阿霉素、阿霉素联合维拉帕米作用48 h后,光镜下观察,胆管癌细胞变圆,体积缩小,细胞内颗粒、空泡增多,有较多细胞从瓶壁脱落,随着药物浓度增大、时间延长,该变化越来越明显;阿霉素对QBC939有增殖抑制作用,呈剂量依赖性;小剂量的维拉帕米（〈10μg/mL）对QBC939无细胞毒性作用;维拉帕米联合阿霉素作用48 h后使QBC939阻滞于S期,其凋亡率明显升高。结论：维拉帕米联合阿霉素明显抑制QBC939的生长,与细胞内药物浓度的提高而诱导细胞凋亡、干扰细胞生长周期有关。     

大黄素对人胆管癌细胞株QBC_(939)的抑制作用

目的探讨中药成分大黄素(EM)联合化疗药物阿霉素(ADM)对人胆管癌细胞株QBC939的抑制作用及其机制。方法药物对肿瘤细胞抑制率检测采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法;多药耐药P糖蛋白(P-gp)以免疫组织化学法检测。结果单用ADM培养时IC50为36.60μg/mL,细胞抑制率分别为37.96%~94.87%,加用不同浓度EM培养后IC50分别为29.68、24.78、17.22和17.18μg/mL,两两比较,P均<0.05,且均显著低于单用ADM者(P均<0.05);细胞抑制率均显著低于单用ADM者,且抑制能力呈浓度依赖性。结论EM可增加化疗药ADM对胆管癌QBC939细胞株的抑制作用,可明显下调P-gp的表达,增强胆管癌细胞对化疗药的敏感性。     

原花青素对人胆管癌细胞QBC939抑制的体内外研究

目的研究原花青素(PC)体内外对人胆囊癌细胞的抑制作用。方法常规培养细胞,24 h后随机分为阳性对照组、空白对照组和PC组。MTT法检测PC对人胆囊癌细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期;建立QBC939细胞裸鼠异种移植瘤模型。将荷瘤裸鼠随机分为5组:阴性对照组、5-Fu阳性对照组及PC 3个剂量组,每日腹腔注射给药,每隔3 d测肿瘤大小;12 d后,处死裸鼠,剥瘤称重并计算抑瘤率。结果 PC 3个剂量组显著抑制QBC939细胞增殖,且呈时间和剂量依赖性;将细胞周期阻滞在S期,并诱导QBC939细胞凋亡;PC可抑制QBC939细胞裸鼠异种移植瘤的生长。结论 PC体内外均可抑制SHG-44细胞生长,并诱导肿瘤细胞凋亡。     

黄芩苷通过调控c-Myc介导的细胞周期抑制胆管癌细胞增殖

目的　探究黄芩苷（BC）对人胆管癌（CCA）细胞QBC939和RBE增殖的影响及其潜在机制。方法　取对数生长期QBC939和RBE细胞，不同浓度的BC处理细胞24 h后，采用CCK-8法分别检测BC对CCA细胞增殖及敲低原癌基因蛋白质（c-Myc）后对BC引起细胞增殖活性改变的影响；高倍显微镜观察BC对细胞生长状态的影响；流式细胞术检测BC对CCA细胞周期的影响；蛋白免疫印迹（Western blot）实验分别检测BC及小干扰RNA（siRNA）敲低CCA细胞中c-Myc后对周期相关蛋白周期素依赖激酶抑制剂（p27）、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）及c-Myc表达的影响。结果　与0 μmol/L组相比，BC明显抑制QBC939和RBE细胞的增殖活性（P＜0.01），且高倍显微镜下观察到细胞生长减缓；BC可将QBC939细胞周期阻滞于S期（P＜0.05）；随着BC浓度的增加，p27的蛋白水平明显上调，而Cyclin D1则显著降低（P＜0.01）；BC可下调c-Myc的蛋白表达，且敲低c-Myc后p27和Cyclin D1蛋白表达的变化趋势与BC处理时一致（P＜0.05）；单独敲低c-Myc后可明显抑制QBC939和RBE细胞的存活率（P＜0.01），并能进一步增强BC的抑制作用。结论　BC通过抑制c-Myc信号通路阻滞细胞周期，进而抑制CCA细胞的增殖。     

RhoC基因转染对胆管癌QBC939细胞生物学行为的影响

目的将人RhoC正义、反义基因真核表达载体转染胆管癌QBC939细胞株,研究RhoC基因对胆管癌QBC939细胞株增殖和侵袭能力的影响。方法以脂质体将包含正义、反义RhoC cDNA真核表达载体,分别转染人胆管癌QBC939细胞。应用克隆形成试验检测细胞增殖活性的变化,流式细胞仪检测转染前后细胞周期的变化,Boyden小室侵袭实验检测侵袭及运动能力的变化。结果正义RhoC基因能促进胆管癌QBC939细胞增殖,流式细胞仪分析结果显示,转染后细胞出现G1期细胞减少;侵袭实验显示,转染后细胞侵袭能力较转染前有显著加强。反义RhoC基因能抑制胆管癌QBC939细胞增殖,流式细胞仪分析结果显示,转染后细胞出现G1期细胞增加;侵袭实验显示,转染后细胞侵袭能力较转染前有显著减弱。结论RhoC基因能够促进胆管癌QBC939细胞株的体外增殖和侵袭能力,反义RhoC基因可抑制胆管癌QBC939细胞的增殖和侵袭能力。     

Berberine Inhibits Growth and Induces G1 Arrest and Apoptosis in Human Cholangiocarcinoma QBC939 Cells

The chemotherapeutic approach using non-toxic natural products may be one of the strategies for the management of the cholangiocarcinoma. Here we report that in vitro treatment of human cholangiocarcinoma QBC939 cells with berberine, a naturally occurring isoquinoline alkaloid, decreased cell viability and induced cell death in a dose-dependent manner, which was associated with an increase in G1 arrest. Our western blot analysis showed that berberine-induced G1 cell cycle arrest was mediated through the increased expression of cyclin-dependent kinase inhibitors (Cdki) proteins (Cip1/p21 and Kip1/p27); a simultaneous decrease in Cdk2 and Cdk4 and cyclins D1, and reduced activity of the Cyclins-Cdk complex. In additional studies, treatment of QBC939 cells with different concentrations (10, 40, 80 μM) of berberine for 48 h resulted in a significant dose-dependent increase in apoptosis compared to the non-berberine-treated control, which was associated with an increased expression of pro-apoptotic protein Bax and decreased expression of anti-apoptotic proteins Bcl-2 and Bcl-xL. Together, this study for the first time identified berberine as a chemotherapeutic agent against human cholangiocarcinoma cells QBC939 cells in vitro. Further in vivo studies are required to determine whether berberine could be an effective chemotherapeutic agent for the management of cholangiocarcinoma.     

姜黄素对人胆囊癌细胞株QBC939增殖和凋亡的影响

目的探讨姜黄素对人胆囊癌细胞株QBC939增殖及凋亡的影响,为胆囊癌的临床治疗提供新的思路。方法姜黄素与QBC939共同孵育后,采用MTT方法测定QBC939的增殖情况并计算抑制率,用流式细胞仪评估凋亡率,同时以蛋白免疫印迹(Western blot)方法检测姜黄素对凋亡相关蛋白Caspase 3表达水平的影响。数据比较采用t检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果姜黄素处理组细胞生长明显受抑并存在显著凋亡,Western blot结果显示Cas-pase 3表达量远大于对照组。结论姜黄素可显著抑制胆囊癌细胞株QBC939的增殖,这种变化可能与其诱导的Cas-pase 3的高表达及促进凋亡有关。     

二烯丙基二硫下调cyclin D1和CDK4的表达诱导人鼻咽癌CNE2细胞G_1期阻滞

目的研究二烯丙基二硫(DADS)对人鼻咽癌CNE2细胞的影响及其分子机制。方法采用MTT法检测DADS对CNE2细胞增殖抑制作用;流式细胞术分析DADS对CNE2细胞周期分布的影响;运用RT-PCR和Western blot方法分析DADS作用CNE2细胞后,cyclin D1和CDK4的表达变化。结果 MTT结果显示,不同浓度DADS(90、140、240、400μmol·L-1)处理CNE2细胞48h后,生长抑制率分别为4.0%、13.8%、25.8%、51.2%;流式细胞术分析显示,DADS阻滞CNE2细胞于G1期,并呈浓度依赖性;RT-PCR和Western blot结果表明,细胞周期调控基因cyclinD1、CDK4表达下调。结论 DADS对CNE2细胞的增殖抑制作用与其阻滞细胞G1期有关,并且可能是通过抑制cyclin D1、CDK4的表达使CNE2细胞阻滞于G1期。