米诺环素对新生鼠缺氧后脑室周围区域谷氨酸清除的影响

 目的: 探讨米诺环素对新生大鼠缺氧后脑室周围区域谷氨酸的作用及其可能的机制。方法: 对出生后1 d的大鼠给予系统性缺氧构建缺血缺氧性脑损伤模型(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)。采用液相色谱-串联质谱联用技术检测缺氧后4 h和1 d脑室周围区域谷氨酸水平;Western blot观察该区域EAAT1和EAAT2发育期变化以及EAAT1、EAAT2、Iba-1、IL-1β、TNF-α和TGF-β1蛋白在缺氧后4 h和1 d的动态变化,并同时观察给予米诺环素后对谷氨酸水平及上述蛋白的影响。结果: 谷氨酸水平检测发现,缺氧后4 h和1 d,脑室周围区域谷氨酸水平明显上升;给予米诺环素(45 mg/kg)后,谷氨酸水平显著下降。Western blot结果显示,出生后第1周EAAT1和EAAT2低表达,但在出生后第2周表达显著上升;缺氧后1 d,EAAT1、EAAT2、Iba-1、IL-1β和TGF-β1表达上调;给予米诺环素后能促进EAAT1和TNF-α的表达,但却抑制EAAT2的产生。结论: 缺氧后早期,米诺环素能降低脑室周围区域谷氨酸水平,其机制可能与它选择性调控谷氨酸转运体,而非抑制该区域炎症反应有关。     

米诺环素对大鼠脑出血后VEGF、GLUT-1 表达的影响

目的 研究米诺环素对脑出血大鼠VEGF、GLUT-1表达的影响,探讨其的脑保护作用机制。方法 选用雄性Wistar大鼠60只,随机分为假手术组、模型组及米诺环素组,每组20只。采用Ⅶ型胶原酶法制备Wistar大鼠右侧纹状体出血模型。模型制备成功后米诺环素组给予腹腔注射米诺环素,剂量为22.5 mg/kg,2次/d,假手术组和模型组给予腹腔注射等量的生理盐水。观察脑缺血后改良神经功能缺损评分（mNSS）、脑组织含水量,Western blots及免疫组化法分别检测VEGF及GLUT-1的表达。结果 与模型组相比,米诺环素组大鼠脑组织的mNSS评分、脑组织含水量、VEGF及GLUT-1的表达量降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 米诺环素可显著减轻脑出血后大鼠的神经功能损害及组织学损伤,并提高大鼠脑组织VEGF及GLUT-1的表达水平,对脑出血具有一定的神经保护作用,其机制可能与增强VEGF及GLUT-1的表达有关。     

地塞米松对小鼠脾脏巨噬细胞内TLR4和TLR2表达的影响

为观察小鼠脾巨噬细胞内的TLR4和TLR2在脂多糖 (LPS )刺激后 ,地塞米松 (Dx )对其表达量的影响 ,在向BALB/c小鼠腹腔内注射LPS和Dx后采用贴壁法分离小鼠脾巨噬细胞 ,通过半定量RT PCR方法测定了TLR4和TLR2mRNA的表达量。结果显示 :①LPS刺激后 ,小鼠脾巨噬细胞内TLR4mRNA显著上调 (吸光度比为 0 11) ,TLR2上调不明显 (吸光度比为0 0 0 8) ;②预先注射不同剂量Dx ,分别为 0 1mg/kg、 1mg/kg、 10mg/kg ,再用LPS刺激小鼠。注射了Dx后巨噬细胞TLR4mRNA表达量较单纯注射LPS的小鼠显著降低 (吸光度比分别为 0 0 93、 0 0 5 0和 0 0 14 ) ;但TLR2mRNA表达量随着Dx使用剂量增加而增加 (吸光度比分别为 0 0 5 4、 0 0 80和 0 16 1)。该项研究表明TLR4是参与LPS引起炎症反应的主要Toll样受体 ,而TLR2不起主要作用 ;Dx对LPS刺激后TLR 4mRNA的表达有抑制作用 ,而对TLR2mRNA的表达有增强作用 ;Dx抑制LPS引起的炎症反应可能与抑制TLR4的表达有关     

地塞米松对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织AQP-4表达的研究

目的探讨DEX（地塞米松）对缺氧缺血性脑损伤新生鼠脑组织AQP-4表达的影响,为临床治疗新生儿缺氧缺血脑病提供实验和理论依据,揭示其发病机制,以期指导该病的早期治疗。方法将健康7日龄SD新生大鼠96只,清洁级,雌雄不限,平均体重12-18g,随机分为假手术组,HIBD组,DEX组,各组32只,分离左侧颈总动脉并结扎,吸入92%N2＋8%O2氮氧混合气体行缺氧处理3h,制成HIBD模型。假手术组只作分离左侧颈总动脉而不结扎,不作缺氧处理,不给与药物处理。DEX治疗组于建模成功后立即腹腔注射10mg/kg,假手术组及HIBD组大鼠腹腔注射等量生理盐水,上述各组均于术后6h、24h、48h、72h随机抽取8只,于麻醉下处死取脑组织,通过Western blot方法检测新生大鼠脑组织AQP-4蛋白表达及实时定量PCR检测AQP-4 mRNA的表达。结果 SD鼠在缺氧处理后出现异常行为学改变。AQP-4 mRNA及蛋白的表达在缺氧诱导后显著升高,DEX的治疗则使SD鼠异常行为的表现程度减轻,后趋于正常,且能够降低HIBD导致的AQP-4的升高。结论 DEX对HIBD的治疗具有一定的疗效。     

缺血后适应对脑缺血树鼩海马TLR4表达的影响

目的: 观察血栓性脑缺血树鼩海马Toll 样受体4(TLR4)表达的改变,进一步探讨缺血后适应对海马TLR4表达的影响。方法: 用光化学法建立血栓性脑缺血模型;并于缺血4 h夹闭缺血侧颈总动脉5 min,再通5 min,重复3个循环,实施后适应处理。用HE染色观察海马组织学改变,Western blotting测定海马TLR4蛋白表达,RT-PCR测定海马TLR4 mRNA。结果: 脑缺血4、24、72 h海马神经元损伤进行性加重,24 h达高峰,后适应后损伤减轻。脑缺血海马TLR4蛋白表达明显增强(P＜0.05)。与脑缺血组比较,后适应4 h及24 h TLR4蛋白表达减少 (P＜0.05),后适应72 h TLR4蛋白表达增加(P＜0.05)。海马TLR4 mRNA的表达趋势与蛋白表达基本一致。结论: 脑缺血时海马TLR4表达明显增强,缺血后适应的脑保护机制可能与调控TLR4表达有关。     

缺氧缺血性脑病早产儿血清miR-181b、TLR4表达水平及与预后的关系

目的 探讨缺氧缺血性脑病(HIE)早产儿血清微小RNA-181b(miR-181b)、Toll样受体4(TLR4)表达水平及与预后的关系.方法 选取2018年12月至2021年3月在邯郸市中心医院新生儿科接受治疗的HIE早产儿105例作为HIE组,另选取同期在本院出生的正常早产儿80例作为对照组;根据HIE早产儿病情程...     

米诺环素对CCI大鼠抑郁样行为的影响及机制研究

目的:观察海马CA1区注射米诺环素对坐骨神经慢性缩窄性损伤(CCI)大鼠的抑郁样行为、海马和前额叶皮层小胶质细胞激活的影响并分析其机制。方法:成年SD雄性大鼠随机分为:对照组、假手术组、CCI模型组、CCI+米诺环素组。糖水偏好及旷场实验检测大鼠抑郁样行为;免疫组化观察海马以及前额叶皮层Iba-1表达;取海马以及前额叶皮层组织,real-time PCR观察Iba-1、NLRP3和caspase1 mRNA表达,ELISA测定IL-1β和IL-18含量。结果:与假手术组相比,CCI大鼠7、10 d和14 d的糖水偏好明显降低(P 0. 05),旷场中央活动距离和中央活动时间明显减少(P 0. 05);与CCI组相比,CA1区注射米诺环素后CCI大鼠7 d和14 d的糖水偏好明显升高(P 0. 05),旷场中央活动距离和中央活动时间明显增加(P 0. 05)。与假手术组相比,CCI组大鼠海马CA1、CA3及DG区和前额叶皮层Iba-1阳性细胞数目显著增多(P 0. 05),Iba-1、NLRP3和caspase1 mRNA表达明显上调; IL-1β和IL-18含量也明显升高(P 0. 05)。与CCI组相比,注射米诺环素后,CCI大鼠海马CA1、CA3及DG区和前额叶皮层Iba-1阳性细胞数目减少(P 0. 05),Iba-1、NLRP3和caspase1 mRNA表达降低(P 0. 05),IL-1β和IL-18含量降低(P 0. 05)。结论:海马CA1区注射米诺环素明显抑制CCI大鼠的抑郁样行为;其机制可能是抑制海马和前额叶皮层小胶质细胞激活,下调NLRP3和caspase1表达,从而使IL-1β和IL-18产生减少。     

缺氧后适应中HSP70对心肌细胞TLR4/NF-κB信号通路及免疫炎性损伤的影响

为探讨缺氧后适应(hypoxic postconditioning, HPC)中热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)对心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation, H/R)损伤的作用及其机制,将H9C2心肌细胞分为4组:对照组(常氧培养10 h)、H/R组(缺氧4 h后复氧6 h)、 HPC组(缺氧4 h后行复氧5 min/缺氧5 min,共3次,再复氧6 h)、HPC+槲皮素(quercetin, Quer)组(缺氧前1 h加50μmol/L的HSP70抑制剂Quer后行HPC)。采用Hoechst 33242染色观察细胞形态变化,FACS检测细胞凋亡情况,Western blotting检测HSP70、TLR4、NF-κB p65、TNF-α、IL-1β、IL-6、B淋巴细胞瘤2基因(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bcl-2-associated X protein, Bax)、Caspase-3蛋白表达水平。结果显示,HPC组HSP70、Bcl-2表达水平较H/R组显著升高(P0.05),TLR4、NF-κB p65、TNF-α、IL-1β、IL-6、Bax、Caspase-3表达水平较H/R组显著下降(P0.05);HPC+Quer组HSP70、Bcl-2表达水平较HPC组显著下降(P0.05),TLR4、NF-κB p65、TNF-α、IL-1β、IL-6、Bax、Caspase-3表达水平较HPC组显著升高(P0.05)。该研究提示,HPC可通过上调HSP70表达抑制TLR4/NF-κB信号通路,减轻H/R诱导的心肌细胞免疫炎症损伤。     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤AQP4表达及bFGF治疗效果的研究

目的探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage, HIBD)后脑组织水通道蛋白-4(AQP4)的表达变化及碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)对其治疗效果的影响.方法结扎阻断左侧颈总动脉,仓内N2浓度95%、O2浓度9±1%,缺氧持续20min,建立脑缺氧缺血模型,用RT-PCR方法检测出脑缺氧缺血后不同时间段AQP4 mRNA基因的表达.并对7日龄HIBD后新生大鼠进行bFGF治疗(4μ/g体重,腹腔注射,连续15d).观察治疗后5h、3d、7d、15d、17d后AQP4 mRNA表达的变化.结果 HIBD后5h,脑组织AQP4 mRNA表达增加;HIBD后7日达到高峰(1.93±0.11),15d后仍高于正常组织(1.41±0.23);HIBD后腹腔注射bFGF,3d脑组织AQP4 mRNA有明显变化(0.79±0.15),15d明显降低(0.47±0.06).结论 AQP4与HIBD的形成密切相关;bFGF对HIBD后有明显的改善作用,可能与其保护作用有关.     

大鼠缺氧缺血脑组织AQP-4蛋白和AQP-4mRNA表达的研究

目的探讨sD大鼠缺氧缺血过程中脑组织水通道蛋白_4（aquaporin-4,AQP-4）和AQP-4mRNA的表达情况及意义。方法健康雄性sD大鼠60只,分为缺氧缺血性脑损伤（HIBD）组和对照组。HIBD组经右侧颈总动脉结扎后建立模型,对照组仅行假手术,不结扎颈总动脉缺氧。HIBD组和对照组于模型制成后0h、6h、1d．2d和3d分别处死动物,对两组动物脑组织进行病理学观察,并检测脑组织中AQP-4蛋白和AQP-4mRNA表达。结果HIBD组在模型建立后6h、1d,2d和3d均出现脑水肿并发生组织病学改变,随时间延长病理改变加重。与对照组比较,HIBD组脑组织AQP-4蛋白和AQP-4mRNA表达从HIBD后6h即开始下降,2d内下降至最低,3d出现恢复。结论AQP-4可能参与了大鼠脑内渗透平衡的维持,AQP-4表达下降可能与HIBD脑组织水肿和病理学变化的发生发展相关。     

LPS对MRL/MpJ小鼠脾T细胞表达TLR4和TNFα的影响

研究Toll样受体 4 (TLR4 )在MRL/MpJ小鼠脾细胞的表达状况和革兰阴性菌脂多糖 (LPS )刺激后TLR4的表达变化以及对TNF α产生的影响。MRL/MpJ小鼠经腹腔注射LPS后在不同时间取脾细胞 ,用三色荧光标记流式细胞仪技术检测小鼠脾T细胞TLR4的表达情况 ,并与BALB/c小鼠作对照 ;通过RT PCR观察LPS刺激前后脾T细胞TNF αmRNA的表达变化。结果表明TLR4在MRL/MpJ小鼠CD3+ CD4 + T细胞和CD3+ CD8+ T细胞中均有表达 ;但TLR4 + /CD4 + 细胞表达仅BALB/c小鼠的 33% ,在受LPS刺激后 ,MRL/MpJ鼠CD4 + T细胞TLR4升高时间较BALB/c小鼠延迟 ;CD8+ T细胞TLR4在LPS刺激前后无明显变化 ;脾细胞TNF αmRNA水平升高亦延迟。通过对干燥综合征样自身免疫病鼠模型MRL/MpJ小鼠脾T细胞TLR4的表达及功能研究 ,将有助于认识天然免疫和获得性免疫间的联系和感染在自身免疫病发病中的作用。     

蛇床子素对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨蛇床子素对大鼠肾缺血再灌注损伤、 炎性因子水平、TLR4信号通路的影响.方法 构建肾缺血再灌注大鼠模型并给予蛇床子素干预,观察血流恢复24 h后肾功能变化,HE染色、TUNEL法、ELISA法、 流式细胞法和蛋白免疫印迹法分别检测肾组织病理、 凋亡、 炎性因子和TLR4信号通路蛋白水平.结果 蛇床子素(20、...     

缺血缺氧脑损伤大鼠IL-6和TNF-α的变化及其临床意义

目的：探讨缺血缺氧脑损伤大鼠白介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的动态变化及其临床意义。方法：90只Wistar大鼠随机分为对照组和实验组,再将实验组按造模后4h、8h、12h、24h和48h不同时点分为5个亚组。利用夹闭双侧颈总动脉,并进行缺氧的方法制备模型。以放射免疫分析（RIA）测定血清和脑组织中IL-6和TNF-α的变化。结果：造模后48h内,血清和脑组织中IL-6和TNF-α的水平呈动态变化。实验组中各亚组的两者含量均明显高于对照组（P〈0.01或P〈0.05）。血清和脑组织中两者分别在24h和12h时达到峰值。结论：缺血缺氧后不同时点IL-6和TNF-α的含量呈动态变化;两者可作为缺血缺氧后脑组织损伤程度及修复的临床指标。     

天麻素对缺血缺氧脑损伤新生大鼠小胶质细胞Sirt3表达的影响

目的:研究天麻素对缺血缺氧脑损伤(HIBD)新生大鼠脑内激活的小胶质细胞Sirt3表达的影响。方法:选取39只3 d龄SD幼年大鼠随机分为对照组(control)、缺血缺氧脑损伤组(HIBD)、天麻素组(HIBD+gastrodin)。采用左侧颈总动脉结扎结合缺氧法建立新生大鼠缺血缺氧性脑损伤(HIBD)模型,使用免疫荧光染色观察HIBD模型后新生大鼠大脑胼胝体区小胶质细胞的分布情况;使用免疫荧光双标染色及Western Blot检测大鼠大脑左侧胼胝体区小胶质细胞Sirt3的表达变化。结果:免疫荧光染色结果显示HIBD后新生大鼠大脑左侧胼胝体区小胶质细胞出现明显激活,确定模型建立成功。免疫荧光双标染色及Western Blot结果均显示,与对照组相比,HIBD模型组Sirt3的表达水平明显升高(P <0. 05);与HIBD模型组相比,天麻素组Sirt3的表达进一步增强(P <0. 05)。结论:天麻素可能通过促进新生大鼠脑内小胶质细胞Sirt3的表达,发挥其神经保护作用。     

Notch通路在大鼠肾脏缺血再灌注损伤TLR4介导的炎症反应中的作用

 目的: 探讨Notch通路对大鼠肾脏缺血再灌注损伤(IRI)中Toll样受体4(TLR4)介导的炎症反应的作用。方法: 雄性SD大鼠75只随机分为假手术组(sham组)、缺血再灌注组(IRI组)和γ-分泌酶抑制剂DAPT干预组(DAPT组)。分别于再灌注6 h、12 h、24 h、48 h、72 h时点观察各组肾脏病理改变,检测血尿素氮(BUN)和血清肌酐(Scr)水平,ELISA检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平,免疫组化和Western blot分别检测大鼠肾脏Notch1、TLR4和NF-κB p65蛋白表达水平。结果: 在IRI组,呈现不同程度的以肾小管上皮细胞和间质损伤为主的肾脏病理改变,BUN、Scr及血清炎性因子TNF-α、IL-6含量在各时点均显著高于sham组(P<0.05),而在DAPT干预组,在各时点肾脏病理损伤明显减轻,BUN、Scr和血清TNF-α、IL-6水平均显著低于IRI组(P<0.05)。Notch1、TLR4和NF-κB p65主要表达于肾小管上皮细胞胞质中,在sham组仅有微量表达,在IRI组则有高表达,在各时点表达与sham组相比均显著增强(P<0.05),而在DAPT组,各因子的表达水平在各时点均较IRI组显著降低(P<0.05)。结论: 大鼠肾脏IRI出现显著的肾功能及肾脏病理改变,血清炎性因子TNF-α和IL-6水平升高,Notch1、TLR4及NF-κB p65在肾组织中表达增强;而DAPT可通过抑制Notch1活化和TLR4/NF-κB通路,抑制TLR4所介导的炎症反应,从而发挥肾脏保护作用。     

天麻素对新生大鼠缺血缺氧脑损伤中小胶质细胞NOX2表达的影响

目的:研究天麻素(GAS)对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤后脑内激活的小胶质细胞表达NADPH氧化酶2(NOX2)的影响.方法:将39只3 d龄新生SD大鼠随机分为假手术组(sham)、缺血缺氧模型组(HIBD)、以及HIBD与GAS联合处理组(HIBD+GAS).利用左侧颈总动脉结扎结合缺氧箱(8％O2,92％N2)缺氧2...     

高压氧对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠TLR-4信号通路的影响

目的探讨高压氧对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠TLR-4信号通路的影响。方法选取36只7日龄SD新生大鼠,随机分为3组:假手术组(n=12),缺氧缺血性脑损伤组(n=12),高压氧治疗组(n=12)。采用Rice法制作新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型,假手术组大鼠分离左颈总动脉后不结扎直接缝合皮肤,高压氧治疗组大鼠在模型制作成功后,给予高压氧治疗,1 h/d,连续7 d。测定各组大鼠体质量增长率与左/右脑重量比值;应用TUNEL法检测脑组织神经细胞凋亡情况,Western Blot方法与real time PCR方法分别检测各组新生大鼠脑组织TLR-4、MyD88与NF-κB蛋白与mRNA的表达。结果高压氧治疗可使缺氧缺血性脑损伤新生大鼠的体质量增长率和左/右脑重量比值增加(P0.05)。与假手术组相比,缺氧缺血性脑损伤组新生大鼠脑组织的神经细胞凋亡数目、Toll样受体-4(TLR-4)、髓样分化因子(MyD88)与核转录因子-κB (NF-κB)蛋白与mRNA的表达均显著升高(P0.01);与缺氧缺血性脑损伤组相比,高压氧治疗组新生大鼠脑组织的神经细胞凋亡数目、TLR-4、MyD88与NF-κB蛋白与mRNA的表达均显著降低(P0.01)。结论高压氧减轻缺氧缺血性脑损伤新生大鼠的脑组织损伤可能与抑制TLR-4信号通路相关。     

富氢液对大鼠肾缺血再灌注肾功能及TLR4/NF-κB信号通路表达的影响

目的探讨富氢液(HRS)对大鼠肾缺血再灌注肾功能及TLR4/NF-κB信号通路表达的影响。方法SPF级雄性SD大鼠30只,随机分为假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、富氢液组(HRS组),每组10只。S组麻醉开腹后右肾切除;I/R组行右肾切除,左肾缺血45min,再灌注60min,造肾缺血再灌注模型;HRS组于术前口服40 ml/kg富氢液,连续3d后建立I/R模型。每组于I/R后6h取取血样,分离血浆,多功能生化仪检测肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)含量;ELISA检测IL-1β和TNF-α含量;另取肾脏,HE染色观察病理组织学变化,Western-blot检测TLR4、Myd88、NF-κB表达变化。结果 HRS可减轻由I/R造成的肾损伤,减低血浆中Scr、BUN、IL-1β和TNF-α含量,抑制肾脏TLR4、Myd88、NF-κB表达(P0.05)。结论 HRS减轻由I/R引起的肾功能障碍,抑制炎性反应,对肾脏有一定的保护作用,其机制可能与TLR4/NF-κB信号通路有关。     

静脉注射丙种球蛋白治疗对急性期川崎病IgGFc受体和TLR4表达的影响

目的 探讨静脉注射丙种球蛋白(intravenous immunoglobulin,IVIG)治疗对川崎病(Kawasaki disease,KD) Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)表达的影响.方法 急性KD患儿25例,正常同龄对照儿童15例.流式细胞术检测单核细胞(monocyte cells,MC) TLR4表达水平;双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆TNF-α浓度;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及荧光定量PCR检测MC FcγRⅡb、TLR4信号转导途径分子(MyD88、TRAF-6、TAKl)和细胞因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)mRNA表达.结果 急性期KD患儿MC TLR4及其转导分子表达明显高于同龄对照组(P＜0.05),IVIG治疗后较治疗前明显降低(P＜0.05);急性期KD患儿MC FcγRⅡb明显低于同龄对照组(P＜0.05),IVIG治疗后明显升高(P＜0.05);急性期KD患儿IL-1β、IL-6、TNF-α表达及血浆TNF-α浓度显著增高(P＜0.05),IVIG治疗后下降(P＜0.05);急性期KD患儿MC FcγRⅡb表达与TLR4表达及炎症细胞因子呈相关性(P＜0.05).结论 IVIG可能上调FcγRⅡb表达,下调TLR4表达,从而抑制炎症反应.