微小RNA-204抑制E盒结合锌指蛋白1调控上皮-间充质转化途径影响甲状腺癌细胞侵袭能力的机制

目的:观察甲状腺乳头状癌(PTC)细胞中微小RNA(miR)-204对E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)表达的影响,及对上皮-间充质转化(EMT)及细胞侵袭能力的影响。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测甲状腺乳头状癌及其癌旁组织中miR-204的表达;将miR-204 mimics转染到甲状腺乳头状癌TPC...     

间充质-上皮转化的生物学作用及其影响因素

细胞可塑性是机体多种生物学过程的基础。其中,上皮表型和间充质细胞表型的相互转化是不可忽视的生物学过程。间充质细胞向上皮细胞转化在胚胎发育早期阶段就已开始,并且参与了肾脏等多个器官的形成。此外,间充质上皮转化还参与了机体组织的损伤修复以及肿瘤的发生发展过程。研究表明,多种因素可以促进间充质-上皮转化进程,可能成为促进组织损伤修复和抑制肿瘤生长的治疗靶点。     

微小RNA-155-5p靶向尾型同源盒基因1抑制人胰腺癌细胞迁移、侵袭和上皮-间充质转化

目的观察尾型同源盒基因1(CDX1)对胰腺癌(PC)细胞迁移、侵袭和上皮-间充质转化(EMT)的作用, 探讨微小RNA-155-5p(miR-155-5p)/CDX1轴调控PC细胞迁移、侵袭和EMT的分子机制。方法选取2020年1月至2023年1月在临沂市人民医院肝胆外科行PC切除术的30例PC患者的癌组织为研究对象, 采用免疫组织化学染色、免疫印迹和实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测PC癌和癌旁组织CDX1的表达水平。通过细胞计数试剂(CCK-8)、划痕实验、Matrigel侵袭实验检测细胞迁移、侵袭能力;采用免疫印迹和RT-qPCR检测EMT相关基因E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达水平, 采用荧光素酶报告基因实验检测miR-155-5p与CDX1启动子区的结合情况。组间差异采用t检验或方差分析(ANOVA)。结果 PC组织中CDX1蛋白和RNA表达水平(7.15±1.72、9.17±2.83)明显高于癌旁组织(1.00±0.28、1.00±0.38), 差异有统计学意义(t=11.290、13...     

微小RNA-21促进胰腺癌细胞侵袭的研究

目的探索微小RNA-21(miR-21)对胰腺癌MiaPaCa-2细胞侵袭能力的影响和机制。方法选取人类胰腺癌MiaPaCa-2细胞, 采用简单随机法分为四组:正常组、miR-21过度表达组、空白对照组和miR-21抑制组。通过慢病毒载体感染MiaPaCa-2细胞, 调节miR-21的表达, 反转录聚合酶链反应(RT-PCR)验证miR-21的表达;体外侵袭实验(Transwell)检测其侵袭能力;流式细胞蛋白检测和RT-PCR检测上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白和基因的表达, 包括E-钙黏附蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、N-钙黏附蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)。两样本间的比较采用t检验。结果 miR-21组中miR-21的表达(1.99±0.17)和MiaPaCa-2细胞侵袭能力(128.00±5.66)高于正常组(0.87±0.12、36.50±0.71), 差异有统计学意义(t=9.406、39.315, P<0.01), 反之miR-21i组中miR-21的表达(0.50±0...     

胃癌上皮-间充质转化过程中微小RNA-579-3p/含锌指和BTB域4通路的作用及其机制

目的探讨微小RNA-579-3p(miR-579-3p)/含锌指和BTB域4(ZBTB4)通路在胃癌上皮-间充质转化(EMT)中的作用机制。方法生物信息学筛选胃癌与癌旁组织差异表达的微小RNA(miRNA);实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测50例患者胃癌和癌旁癌旁组织中miR-579-3p、ZBTB4表达;检测胃上皮细胞株GES-1和胃癌细胞株HGC27、AGS、MKN45中miR-579-3p的表达, 分析miR-579-3p与临床病理特征的关系。生物信息学分析miR-579-3p靶基因。双荧光素酶报告基因验证miR-579-3p与ZBTB4的调控关系。应用miR-579-3p抑制物(inhibitor)干扰HGC27细胞株miR-579-3p表达, 细胞计数试剂盒(CCK-8)法、划痕实验、Transwell小室实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力;RT-qPCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测mRNA和蛋白表达水平。采用t检验、χ2检验分析数据。结果生物信息学筛选后RT-qPCR检测结果发现miR-579-3p在胃癌组织中表达显著高于癌旁组织(3.259...     

体外共培养hBMSCs和HUVECs对Panc-1胰腺癌细胞上皮间质转化的影响

目的:利用三维共培养技术体外构建含多种细胞的胰腺癌微组织,研究骨髓间充质干细胞(hBMSCs)、内皮细胞(HUVECs)对Panc-1胰腺癌细胞上皮间质转化的影响。方法:水凝胶复合细胞培养构建三维胰腺癌微组织模型。第一组:单纯Panc-1细胞;第二组:Panc-1细胞复合HUVECs;第三组:Panc-1细胞复合hBMSCs;第四组:Panc-1细胞复合HUVECs和hBMSCs。实时定量PCR分析胰腺癌肿瘤侵袭相关的基质金属蛋白酶(MMP-9)、肿瘤上皮间质化E-cadherin和Snail基因。Western blot测定胰腺癌肿瘤侵袭相关的MMP-9、肿瘤上皮间质化E-cadherin和Snail蛋白。结果:HUVECs共培养不影响MMP-9、E-cadherin和Snail基因和蛋白的表达(P>0.05),hBMSCs共培养促进MMP-9和Snail基因和蛋白的表达、抑制E-cadherin基因和蛋白的表达(P<0.05),同时加入两种细胞促进MMP-9和Snail基因和蛋白的表达、抑制E-cadherin基因和蛋白的表达(P<0.05)。结论:利用水凝胶为载体,加入骨髓间充质干细胞、内皮细胞与Panc-1胰腺癌细胞共培养,成功构建复杂的胰腺癌肿瘤微组织。通过对胰腺癌上皮间质转化相关机制研究,发现骨髓间充质干细胞通过调节MMP-9和上皮间质化对胰腺癌的侵袭行为起重要作用。     

上皮-间充质可塑性在胚胎着床过程中的研究进展

上皮-间充质可塑性(EMP)是指上皮细胞与间充质细胞在形态学上发生互相转化的过程,包括间充质-上皮转化(MET)及上皮-间充质转化(EMT)两个过程。EMP在胚胎发育、组织再生、肿瘤转移和器官纤维化疾病中发挥着重要作用。随着对EMP的深入研究发现,在胚胎植入的过程中,植入胚泡的滋养外胚层及母体的子宫内膜均会发生EMP,从而促进胚泡的附着和粘附并有助于其成功妊娠。因此,本文将对胚胎着床过程中子宫内膜上皮细胞(EEC)、子宫内膜间质细胞(ESC)和滋养外胚层中的EMP相关研究进展进行综述,以期为防治不孕不育及妊娠相关疾病提供更多线索和理论依据。     

微小RNA-324-5p在胰腺癌中的表达及对胰腺癌细胞增殖和迁移能力的影响

目的:检测分析微小RNA(miR)-324-5p在胰腺癌中的表达情况及临床意义,并探究其对胰腺癌细胞增殖和迁移能力的影响及潜在分子机制。方法:实时定量PCR方法检测34对2018年10月至2019年9月在北京大学第一医院手术切除的胰腺癌和癌旁组织中miR-324-5p表达水平,结合癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析其...     

大黄素纳米载药系统逆转人胆囊癌细胞上皮-间充质转化的可行性研究

目的 为改善大黄素（EMO）水溶性差等问题,使用中空介孔硅纳米颗粒（HMSNs）包封EMO,体外培养人胆囊癌细胞（NOZ）评价其逆转胆囊癌细胞上皮-间充质转化（EMT）的效用。方法 通过油水双相反应结合模板法合成了具有介孔结构的中空介孔硅。利用物理吸附法制备负载EMO的纳米载药系统（EMO-HMSNs）。同时,采用扫描电镜（SEM）、透射电镜（TEM）观察纳米微粒形态,动态光散射（DLS）测定其电势和粒径大小,紫外分光光度计定量其载药率、包封率。体外实验中,我们用Western blotting、荧光显微镜、Transwell迁移实验分析EMO-HMSNs对胆囊癌细胞EMT的逆转效用。结果 SEM观察可见制备出的HMSNs微粒为球形且粒径均一,TEM观察可见HMSNs具有中空结构,DLS结果显示粒径约为201 nm,表面电位约为27.29 mV。荧光显微镜发现随着时间延长载药微粒在NOZ中聚集增加。NOZ中加入EMO-HMSNs共培养后,Transwell迁移实验发现其迁移能力被显著抑制（P<0.05）,Western blotting结果表明E-cadherin、N-cadhe...     

上皮-间充质转化在营养剥夺促进肝癌细胞侵袭中的作用

目的 观察上皮-间充质转化在营养剥夺条件下促进肝癌细胞侵袭的作用.方法 以Hank's平衡盐缓冲液对肝癌细胞株HepG2和BEL7402细胞进行营养剥夺培养,观察营养剥夺对肝癌细胞上皮间质标记表达和侵袭能力的影响,并以转化生长因子(TGF)-β/Smad3通路抑制剂SIS3(2μmol/L)处理营养剥夺的肝癌细胞,分析上皮间质标记表达与细胞侵袭力之间的关系.结果 平衡盐缓冲液显著增加HepG2和BEL7402肝癌细胞的侵袭数[(58 450±1245)个;(61 750±1800)个,P＜0.05],同时其上皮标记CK18表达下调而间质标记纤维连接蛋白(fibronectin)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达升高.以TGF-β/Smad3通路抑制剂SIS3处理平衡盐溶液培养的HepG2和BEL7402细胞后,较对照组细胞未出现明显上皮间质标记表达改变,细胞侵袭数较SIS3未处理组也明显减少[(16500±1050)个比(15 450±985)个,P＜0.05].结论 上皮-间充质转化可能是营养剥夺条件下促进肝癌细胞侵袭性的机制之一.     

microRNA-200c在胰腺癌干细胞中的表达及作用

目的：探讨microRNA-200c（miRNA-200c）在胰腺癌干细胞中的表达及作用。方法：应用流式细胞术在人胰腺癌PANC-1细胞中以CD24+CD44+ESA+为标记物分选胰腺癌干细胞,并通过NOD/SCID小鼠移植瘤实验验证其肿瘤干细胞特性;分别用RFQ-PCR法Transwell试验检测PANC-1细胞、胰腺癌干细胞以及转染miRNA-200c前体片段或阴性对照序列的胰腺癌干细胞的miRNA-200c表达与侵袭能力。结果：PANC-1细胞中分选出CD24+CD44+ESA+细胞（占0.8%）具有肿瘤干细胞特性,其在小鼠皮下移植后的移植瘤体积明显大于同期移植的PANC-1细胞[（1 725.14±261.29）mm3 vs.（479.65± 99.67）mm3,P<0.05];胰腺癌干细胞中miRNA-200c的表达量明显低于PANC-1细胞（0.15±0.01 vs. 1.00±0.09,P<0.05）,平均穿膜细胞数明显多于PANC-1细胞[（321±7.62）个vs.（70±16.47）个,P<0.05],但转染miRNA-200c前体片段后,胰腺癌干细胞中miRNA-200c表达量明显升高,平均穿膜细胞数明显减少（P<0.05）。结论：胰腺癌干细胞中miRNA-200c的表达降低,miRNA-200c具有抑制胰腺癌干细胞生长及侵袭力的作用。

     

KAP-1对胰腺癌细胞Capan-2上皮细胞间质转化的促进作用

目的 研究KAP-1对胰腺癌细胞Capan-2上皮细胞间质转化(EMT)的调节作用.方法 构建LV-plenti-GFP-KAP-1慢病毒载体.将Capan-2细胞分为实验组(转染LV-plenti-GFP-KAP-1慢病毒载体)、阴性对照组(转染空载体)以及空白对照组1(含10％小牛血清的1640培养基);而后再将实验组Capan-2细胞分为抑制剂组(转染化学合成的miR-100-5p抑制剂)、空载体对照组(转染无关序列micro-RNAs抑制剂)、空白对照组2(含10％小牛血清的1640培养基).用双酶切及测序鉴定慢病毒并计算病毒滴度.LV-plenti-GFP-KAP-1慢病毒载体稳定转染至Capan-2细胞后,观察细胞的形态学改变.应用实时定量PCR检测各组细胞中KAP-1、EMT标志蛋白以及miR-100-5pmRNA的表达情况.应用Western blot法检测各组细胞中KAP-1、EMT标志蛋白表达水平.计量资料采用(x)±s表示,组间比较均采用方差分析.结果 成功构建LV-plenti-GFP-KAP-1慢病毒载体,病毒滴度为2×108 TU/ml.慢病毒载体转染Capan-2细胞48 h后,实验组细胞与对照组比较其形态有明显间质样改变.实验组、阴性对照组、空白对照组1细胞中各目标蛋白mRNA的相对表达量:KAP-1分别为1.77±0.83、5.03 ±0.29、5.13±1.14,N-钙黏蛋白分别为2.62 ±0.71、5.07 ±1.53、5.81 ±1.49,波形蛋白分别为2.50 ±0.21、3.83±0.57、4.92±0.90,E-钙黏蛋白分别为7.20±1.17、7.83 ±0.78、3.07±0.36,miR-100-5p分别为1.81 ±0.40、7.01 ±0.96、6.87±0.35,3组比较,差异有统计学意义(F=5.99,7.62,7.88,6.62,4.64,P＜0.05).抑制剂组、空载体对照组、空白对照组2细胞中KAP-1 mRNA的相对表达量分别为1.56 ±0.42、4.89 ±0.61、5.20 ±0.38,3组比较,差异有统计学意义(F=5.14,P＜0.05);波形蛋白mRNA的相对表达量分别为3.10±1.37、3.44 ±0.94、3.08±1.16,3组比较,差异无统计学意义(F=0.49,P＞0.05).Western blot检测结果表明:实验组、阴性对照组、空白对照组1细胞中各目标蛋白的相对表达量:KAP-1蛋白分别为2.77 ±1.99、0.83 ±0.46、0.71 ±0.26,N-钙黏蛋白分别为1.31 ±0.38、0.41 ±0.37、0.08 ±0.04,波形蛋白分别为4.25±0.63、1.03 ±0.33、1.37±0.92,E-钙黏蛋白分别为0.62 ±0.06、1.17 ±0.45、3.04±0.65,3组比较,差异有统计学意义(F=5.54,4.68,3.19,8.18,P＜0.05).抑制剂组、空载体对照组、空白对照组2细胞中KAP-1蛋白的相对表达量分别为2.27 ±0.71、0.56 ±0.43、0.61 ±0.39,3组比较,差异有统计学意义(F=4.81,P＜0.05);波形蛋白分别为3.19±0.55、3.93±0.06、3.61 ±0.73,3组比较,差异无统计学意义(F =0.04,P＞0.05).结论 KAP-1转录因子通过特异性调控其下游miR-100-5p表达,从而促进人类胰腺癌细胞Capan-2 EMT.     

抑制乙肝病毒X蛋白表达对肝癌细胞上皮-间质转化和凋亡的影响

目的 探讨乙肝病毒X蛋白(HBx)对肝癌细胞转移能力的影响及其机制.方法 采用siRNA干扰技术抑制MHCC97H细胞的HBx表达.通过Transwell小室和裸鼠肺转移模型实验比较HBx抑制前后MHCC97H细胞转移能力的变化.应用Western blotting技术检测肝癌细胞上皮间质转化(EMT)和凋亡相关基因的表达变化.结果 将HBx-siRNA导人MHCC97H细胞可以抑制HBx的表达及其转移能力,可下调EMT相关分子Twist和N-cadherin的表达,并上调E-cad-herin表达而抑制EMT,同时还可通过Twist-P53途径诱发细胞的凋亡.结论 抑制HBx表达可以通过改变上皮-间质转化和诱发凋亡而减弱高侵袭肝癌细胞MHCC7H的转移能力.

Abstract：

Objective To investigate the effects and possible mechanism of action of inhibiting hepatitis B virus X protein (HBx) expression on liver cancer metastasis. Methods The suppression of HBx expression in MHCC97H cells was performed by siRNA interference technique, and the effects of HBx suppression on the metastasis of MHCC97H cells were detected by Matrigel invasion assays and in a lung-metastasis mouse model. The expression levels of related epithelial-mesenchymal transition (EMT) and apoptosis proteins were examined by Western blotting. Results Introduction of HBx-siRNA into MHCC97H cells inhibited the expression of HBx and the ability to metastasize,downregulated the expression of Twist and N-cadherin, and upregulated E-cadherin expression. These changes resulted in inhibiting EMT of MHCC97H cells. Meanwhile, apoptosis involved in the Twist-P53 pathway was also found. Conclusions Inhibiting expression of HBx can decrease the metastatic a-bility of MHCC97H cells by changing EMT and inducing apoptosis.     

微小RNA-101对前列腺癌干细胞EZH2表达及增殖迁移的影响

目的 调控前列腺癌干细胞(PCSCs)中微小RNA-101(miR-101)表达,观察细胞中EZH2表达及其增殖迁移能力的变化.方法 通过流式分选从LNcap细胞株中获取PCSCs;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western blot、双荧光素酶、细胞凋亡、细胞周期、细胞迁移实验观察miR-101对前列腺癌干细胞EZH2表达及增殖迁移能力影响.结果 在PCSCs中转染miR-101后,实验组较未处理组EZH2表达量下降46％ (P ＜0.05);双荧光素酶实验证实PCSCs中miR-101直接调控EZH2;凋亡实验中,实验组细胞凋亡率为(3.79±0.24)％,较对照组凋亡率明显增加(P＜0.05);周期实验中,实验组细胞G1期比例为(82.95±0.78)％,较对照组比例增加(P＜0.05),细胞被阻滞在G1/S期;迁移试验中,细胞迁移率为0.38±0.01,明显低于对照组(P＜0.05).结论 过表达miR-101能下调前列腺癌干细胞中EZH2的表达并能降低细胞的增殖迁移能力.     

成人胰腺干细胞分离及转分化为胰岛的研究

目的 通过对成人胰腺干细胞分离和转分化为胰岛过程的研究以便更进一步了解及改进胰腺干细胞分离、培养、鉴定方法。方法 成人胰腺组织以胶原酶消化，密度梯度离心法获得纯化的胰腺外分泌细胞、导管上皮细胞和胰岛。导管上皮细胞在体外共培养27d，观察细胞形态学变化及干细胞特异性转录基因PDX—1，CK—19蛋白等的表达。结果 上述方法可获得大量胰腺导管上皮细胞。体外培养第1天即可见PDX—1，CK—19阳性细胞，胰腺导管上皮细胞迅速分裂增殖并转变为有分化能力的干细胞继而转分化为三维结构的胰岛细胞。培养27d后，平均每克胰腺组织可生成760个胰岛。结论 用改进的方法可获得大量成人胰腺导管上皮细胞，并可在体外转分化为大量具有内分泌功能的胰岛，可能为克服胰岛移植的供体短缺提供一条新途径。     

胰腺癌干细胞研究进展

胰腺癌干细胞（PCSC）在胰腺癌的发生、发展过程中起着重要作用,且与胰腺癌的耐药、转移机制关系密切。PCSC的表面标志物、分离、鉴定、信号通路、微环境、耐药、转移和靶向治疗等方面的研究,将为临床胰腺癌的治疗提供新的方向。     

人胰腺癌干细胞差异性基因的表达

目的 分选、鉴定人胰腺癌干细胞,运用基因芯片技术分析其差异性基因的表达.方法 运用流式分选技术分选胰腺癌干细胞(CD24+CD44+ESA+),NOD/SCID鼠移植瘤试验进行肿瘤干细胞特性鉴定.采用Affymetrix U133 plus2.0人类全基因组表达谱芯片对胰腺癌干细胞和非干细胞进行差异基因筛选.结果 分选得到人胰腺癌CD24+CD44+ESA+亚群细胞,占所有细胞的0.8%;5×103个CD24+CD44+ESA+细胞就能成瘤(2/4),而阴性细胞1×105才能成瘤(1/4);CD24+CD44+ESA+具有一定的自我更新和分化能力.基因芯片杂交获得6553(11.99%)条差异基因,胰腺癌干细胞中5255(9.61%)条上调表达,1298(2.37%)条下调表达.其中差异基因涉及细胞凋亡、细胞周期、代谢、细胞线粒体结构和耐药等多个方面.结论 胰腺癌于细胞具有自身特征性基因表达谱,为进一步从干细胞层面研究胰腺癌发病机制及靶向治疗奠定基础.     

胰腺癌肿瘤干细胞对抗肿瘤药物敏感性的实验研究

目的 探讨胰腺癌肿瘤干细胞对抗肿瘤药物的敏感性.方法 FACS技术分选人胰腺癌PANC-1细胞;RT-PCR技术检测分选PANC-1细胞中CD133、ABCG2、Notch1的表达情况;MTT法检测分选细胞对抗肿瘤药物5-氟尿嘧啶和吉西他滨的耐药性.建立分选细胞的移植瘤模型,随机分为吉西他滨治疗组(n=3)和对照组(n=3),观察肿瘤生长情况,作CD133免疫组化染色.结果PANC-1细胞中含有SP亚群.SP细胞CD133、ABCG2、Notch1的mRNA的表达明显上调,non-SP细胞的表达量显著低于前者.在吉西他滨的干预下,SP细胞和non-SP细胞的OD值差异有统计学意义.而5-氟尿嘧啶的干预(10 μg/ml和100 μg/ml)则没有显著差异.移植肿瘤治疗组中CD133阳性细胞明显多于对照组(P=0.001).结论胰腺癌中存在SP亚群细胞.胰腺癌PANC-1的成瘤能力是由其中的SP亚群细胞决定的,而并非所有胰腺癌PANC-1细胞.胰腺癌肿瘤干细胞对抗肿瘤药吉西他滨具有较高耐药性.     

红细胞生成素对高糖诱导下肾小管上皮细胞转分化的影响

目的 探讨红细胞生成素（EPO）对高糖诱导下的肾小管上皮细胞转分化的影响。 方法 体外培养人肾小管上皮细胞株（HK-2细胞）,分为正常对照组、渗透浓度对照组、高糖组、高糖＋EPO（5 U/ml）组和高糖＋EPO（10 U/ml）组。RT-PCR法检测各组细胞α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、转化生长因子β1（TGF-β1）、Smads信号蛋白2（Smad2）及整合素连接激酶（ILK）的mRNA表达。细胞免疫荧光法检测细胞TGF-β1及α-SMA的蛋白表达。 结果 RT-PCR结果显示,相对于对照组,高糖组细胞α-SMA、TGF-β1、Smad2、ILK的mRNA表达均显著上调（P ＜ 0.01）。细胞免疫化学也显示,高糖组TGF-β1和α-SMA的蛋白表达较对照组显著上调（P ＜ 0.01）,而高糖＋EPO（5 U/ml）组和高糖＋EPO（10 U/ml）组上述指标的表达均显著低于高糖组（均P ＜ 0.01）。 结论 EPO能抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞转分化,可能与其抑制TGF-β1、Smad2及ILK表达有关。