Pit-1与垂体腺瘤发生关系的研究

 目的通过定量研究Pit-1 mRNA在不同类型的垂体腺瘤中的表达,探讨Pit-1 mRNA与垂体腺瘤发生的关系.方法34例垂体腺瘤手术中取出,迅速冻于液氮中保存.根据血清激素水平、临床表现以及垂体组织免疫组化染色结果确定腺瘤类型.用异硫氢酸胍一步法提取垂体腺瘤组织总RNA,用RT-PCR方法检测Pit-1 mRNA在各组垂体腺瘤组织中的表达.结果Pit-1 mRNA在所有PRL瘤、GH+PRL瘤、GH瘤、寂静PRL瘤以及寂静GH瘤中有表达.在ACTH腺瘤和零细胞瘤中无表达.PRL瘤术前血清PRL值与腺瘤组织Pit-1表达量呈明显的正相关(γ=0.90,P＜0.01),GH腺瘤术前血清GH值与腺瘤组织Pit-1表达量呈明显的正相关(γ=0.96,P＜0.01).结论Pit-1 mRNA在垂体腺瘤中呈细胞特异性表达,提示对垂体GH和PRL腺瘤的细胞特异分化及分泌功能有一定的作用.     

蛋白酶体抑制剂对雌激素诱发的大鼠催乳素瘤的抑制作用

目的　研究蛋白酶体抑制剂PS - 341对雌激素诱发的大鼠催乳素 (Prolactin ,PRL)瘤的抑制作用。方法　成年雄性SD大鼠 2 5只 ,随机分为 2组 :催乳素瘤组 2 0只 ,皮下植入含有乙烯雌酚的硅胶管 ;对照组 5只 ,皮下植入空白硅胶管。 8周后 ,将催乳素瘤组随机分 3组 ,分别给予蛋白酶体抑制剂PS - 341、诺果宁或安慰剂。治疗 4周后处死大鼠 ,垂体称重 ,做垂体免疫组化检查 ,用放免法测定外周血PRL水平。结果　蛋白酶体抑制剂组和诺果宁组大鼠垂体重量和血清催乳素水平均较安慰剂组明显降低 (P <0 .0 1) ,催乳素阳性细胞计数较安慰剂组明显减少 (P <0 .0 1)。结论　蛋白酶体抑制剂PS - 341对乙烯雌酚诱发的大鼠PRL瘤均具有一定程度的抑制作用。     

蛋白酶体抑制剂对雌激素诱发的大鼠催乳瘤的抑制作用

 目的研究蛋白酶体抑制性SD大鼠25只,随机分为2组:催乳素瘤组20只,皮下植入含有乙烯雌酚的硅胶管;对照组5只,皮下植入空白硅胶管.8周后,将催乳素瘤组随机分3组,分别给予蛋白酶体抑制剂PS-341、诺果宁或安慰剂.治疗4周后处死大鼠,垂体称重,做垂体免疫组化检查,用放免法测定外周血PRL水平.结果蛋白酶体抑制剂组和诺果宁组大鼠垂体重量和血清催乳素水平均较安慰剂组明显降低(P＜0.01),催乳素阳性细胞计数较安慰剂组明显减少(P＜0.01).结论蛋白酶体抑制剂PS-341对乙烯雌酚诱发的大鼠PRL瘤均具有一定程度的抑制作用.     

雌激素诱导大鼠催乳素瘤发生机制的研究

 目的研究雌激素诱发大鼠催乳素(prolactin PRL)瘤的机制.方法制备雌激素诱发的大鼠PRL瘤模型.放免法测定大鼠血清PRL水平.用免疫组化方法显示垂体组织PRL蛋白的表达和分布,用BT-PCR方法检测癌基因c-fos mRNA在各组垂体组织中的表达,以β-actin作为内参照,借助于计算机凝胶成像系统分析表达量.结果用药8周后,根据大鼠垂体重量,以及组织学和免疫组化的改变,证实已诱发出PRL瘤模型.在PRL瘤组中,c-fos的表达量明显高于对照组(P＜0.01).结论雌激素刺激垂体PRL细胞表达c-fos癌基因,在雌激素诱导PRL瘤中起一定的作用.     

实验性甲状腺功能亢进大鼠脑多巴胺转运蛋白及多巴胺含量的变化

目的研究甲状腺激素升高时脑纹状体多巴胺转运蛋白（DAT）、多巴胺（DA）及其代谢产物3,4二羟苯乙酸（DOPAC）的含量变化。方法将24只大鼠分为2组,其中一组采用灌胃法连续每天给予大鼠左甲状腺素钠（优甲乐,用量按大鼠体质量25μg／100g,溶于生理盐水中,体积1ml）造成实验性大鼠甲状腺激素增高状态;对照组仅采用灌胃法给予生理盐水1ml;于模型建立前后按随机数字表法抽取左甲状腺素钠组及对照组大鼠各6只,分别取尾静脉血1ml,采用放射免疫法测定TT3及,TT4水平。14d后将上述对照组及左甲状腺素钠组大鼠再各自平均分为2组,一组用于99^Tc^m-2β-[N,N’-双（2-巯乙基）乙撑二胺基]甲基-3β-（4-氯苯基）托烷（TRODAT-1）大鼠脑内分布研究,另一组用于高效液相-电化学检测器（HPLC-ECD）测纹状体DA及DOPAC含量,观察上述大鼠脑纹状体区DAT的分布及DA、DOPAC含量的变化。多组比较采用ANOVA分析,2组间比较采用均数t检验。结果左甲状腺素钠组大鼠在服用左甲状腺素钠后活动明显增加,体质量增长低于正常对照组[（223．90±8．40）与（261．60±14．20）g,t=6．98,P〈0．05]。甲状腺激素水平测定示：左甲状腺素钠组给药前后TT3,分别为（1．46±0．17）和（2．72±0．29）nmol／L（t=10．51,P〈0．0001）;TT4分别为（83．52±10．06）和（187．12±36．48）nmol／L（t=7．74,P〈0．0001）;对照组生理盐水注射前后TT3分别为（1．54±0．09）和（1．71±0．20）nmol／L（t=1．68,P〉0．05）,TT4分别为（98．38±9．77）和（88．38±6．76）nmol／L（t=1．36,P〉0．05）。99^Tc^m-TRODAT-1大鼠脑内分布（每克脑组织百分注射剂量率,％ID／g）研究示：左甲状腺素钠组纹状体为（2．80±0．25）％ID／g,明显低于正常对照组[（3．13±0．14）％ID／g,t=-3．62,P〈0．05]。经检测左甲状腺     

Mdivi-1对帕金森病大鼠多巴胺能神经元损伤的保护作用研究

目的 研究线粒体分裂引发帕金森病（Parkinson’s disease,PD）大鼠模型中多巴胺能神经元损伤作用及线粒体分裂抑制剂1（mitochondrial division inhibitor 1,Mdivi-1）对神经元损伤的保护作用机制。方法 将大鼠随机分成对照组(生理盐水组)、模型组、美多巴组和Mdivi-1组,采用6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)注射大鼠单侧纹状体的方法建立PD动物模型,利用阿朴吗啡（apomorphine,APO）引起的大鼠旋转实验和转棒实验来观察行为学变化。利用免疫组化方法评估酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylasez,TH）在中脑黑质中阳性细胞比例以及纹状体中TH阳性纤维数量,采用ELISA法检测大鼠黑质和纹状体中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）、还原型谷胱甘肽（glutathione,GSH）、过氧化氢酶（catalase,CAT）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）、一氧化氮（nitric oxide,NO）及一氧化氮合酶（nitric oxide synthase,NOS）的含量。结果与对照组相比,PD模型组大鼠在APO诱发第3周和6周后旋转圈数均显著增加,同时转棒上停留时间均显著缩短;大脑黑质TH阳性细胞数和纹状体中TH阳性纤维数目显著减少;组织内SOD、GSH Px、CAT的活性显著降低,而NOS 活性显著升高,MDA和NO含量升高,而GSH含量则降低。美多巴及Mdivi-1处理3周和6周后均可显著改善PD大鼠的相关行为学症状,并增加黑质TH阳性细胞数和纹状体中TH阳性纤维数目,同时增加组织内SOD,GSH-Px,CAT,GSH含量,降低NOS 活性,减少MDA和NO含量。结论 Mdivi-1对6-OHDA诱导PD大鼠的多巴胺能神经元损伤具有保护作用,其机制可能与其抗氧化能力有关。     

溴隐亭对大鼠催乳素瘤细胞表达bcl-2、Bax的影响

 目的 研究溴隐亭对大鼠催乳素（prolactinoma,PRL）瘤表达bcl-2、Bax的影响。方法 （1）用皮下植入17β-雌二醇的方法制备大鼠催乳素瘤模型,同时设立10只大鼠为对照组;（2）将成功诱发出催乳素瘤的大鼠随机分2组,分别给予自来水（安慰剂组）、溴隐亭（溴隐亭组）灌胃,对照组也给予安慰剂灌胃,用药4周后处死动物,垂体称重,测定PRL、Bax、bcl-2的表达水平。结果 （1）17β-雌二醇组大鼠血清PRL水平［（4236.9±416.9） vs （121.2±12.8） ng/ml］和垂体重量［（62.0±5.1） vs （13.8±1.2） mg］均明显高于对照组（P＜0.01）,证实17β-雌二醇组成功诱发出大鼠泌乳素瘤。（2）溴隐亭组血清PRL水平和垂体重量低于安慰剂组（P＜0.01）,bcl-2表达水平较安慰剂组明显下降［（1.8±0.5） vs (4.0±0.6),P＜0.01］,Bax表达水平明显增高［（4.5±0.6） vs ( 1.0±0.3),P＜0.01］。结论 抑制bcl-2的表达,刺激Bax的表达,从而促进催乳素瘤细胞的凋亡可能是溴隐亭抗催乳素瘤的重要机制之一。     

多巴胺对严重烫伤大鼠血清乳酸、一氧化氮水平的影响

大鼠预置心导管 ,3 0 %Ⅲ度烫伤后静脉复苏 ,观察多巴胺 [3 μg/(kg·min) ]持续给药后大鼠的血清乳酸、一氧化氮 (NO)水平的变化。结果显示 ,与对照组相比 ,多巴胺治疗能显著降低严重烫伤大鼠血清中的乳酸、NO水平 ,以伤后 3～ 12h明显。研究表明 ,多巴胺可降低严重烫伤大鼠休克期血清乳酸、NO水平。     

The role of dopamine transporter imaging agent [Tc]TRODAT-1 in hemi-parkinsonism rat brain

This study aims to investigate the relationship between the determination of dopamine level by high performance liquid chromatography (HPLC) with electrochemical detection (ECD) and the detection of dopamine transporter (DAT) counts using autoradiography with DAT image agent [^99mTc]TRODAT-1. For striatal lesions, pretreatment of 6-hydroxydopamine (6-OHDA) in the medial forebrain bundle shows that autoradiogaphic labeling of striatum region is reduced to near-background level. Using HPLC with ECD, unilateral 6-OHDA treatment is associated with significant (p < 0. 0002) reductions of dopamine levels. For the striatum of the 6-OHDA-lesioned side, dopamine content and DAT counts are reduced to 97% and 90%, respectively. Thus, our observation indicates a potential of using [^99mTc]TRODAT-1 for the evaluation of animal DAT.     

高压氧对急性CO中毒大鼠海马神经元Bc1-2蛋白表达的影响

目的　研究高压氧 (HBO)治疗对急性 CO中毒大鼠海马区神经元 Bc1- 2蛋白表达的影响。方法　 6 0只雄性 SD大鼠随机分成 3个组 (正常对照组、CO中毒不治疗组、CO中毒 HBO治疗组 )。各组大鼠分别暴露在空气或 CO气体 (3.2× 10 - 3体积分数 )中 6 0 m in,对 CO中毒 HBO治疗组大鼠行HBO治疗 ,常规 HE染色和免疫组化染色 ,观察 CO中毒后第 1,3,5和 7天大鼠海马区神经元损伤和Bc1- 2蛋白表达变化的特点。结果　 CO中毒组大鼠海马可见大量变性坏死神经元 ,HBO治疗组海马区神经元变性坏死减少 ,Bc1- 2蛋白表达增多 ,尤以中毒后 3和 5 d明显 (P<0 .0 5 )。结论　 HBO治疗可以促进急性 CO中毒大鼠海马区神经元 Bc1- 2蛋白表达 ,具有保护神经元的作用。     

雌激素及其受体1在先兆子痫患者中的研究

目的通过研究雌激素受体1( estrogen receptor 1,ER1)在先兆子痫（preeclampsia,PE）和正常胎盘组织中信使RNA（messenger RNA,mRNA）及蛋白水平表达,并结合PE孕妇和正常孕妇血浆中雌激素水平探讨雌激素及ER1与PE的相关性及其意义。方法采用电化学发光全自动免疫分析系统检测正常足月孕妇（对照组,n=20）和PE孕妇（试验组,n=20）血浆中雌激素水平;反转录聚合酶链反应和免疫印迹（Western Blot）技术检测对照组和试验组胎盘组织中ER1在mRNA及蛋白水平的表达。结果试验组血浆中雌激素水平明显低于对照组（P<0.05）;反转录聚合酶链反应和Western Blot检测对照组和试验组均有ER1表达,试验组ER1在mRNA及蛋白水平表达均高于对照组（P<0.05）。结论PE病理状态下体内较低水平的雌激素水平可能导致了ER1的代偿性增多;ER1作为雌激素功能实现的核心,可能通过对雌激素的介导作用而参与了PE的发生、发展。     

内皮素-1在不同月龄大鼠神经细胞中的表达

目的研究内皮素-1(endothelin-1,ET-1)在不同月龄大鼠神经细胞中表达变化,为探讨纹状体易卒中机制、揭示脑血管病发病机制提供参考资料。方法应用链霉亲和素-生物素复合物免疫组化染色法观测1~2个月龄、6~7个月龄及>24个月龄3组共36只Wistar大鼠神经细胞ET-1的表达。结果随大鼠月龄增加,ET-1在纹状体、颞叶皮质、海马区表达增加,>24个月龄组纹状体、颞叶皮质、海马区ET-1阳性反应强度与其他2组比较差异有统计学意义(P<0.01),同月龄组纹状体、颞叶皮质、海马区的ET-1表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论ET 1在神经系统的表达,可能与老年人易发生脑血管病有关。     

99m Tc-TRODAT-1动物体内生物学分布特性的实验研究

目的:探讨国内研制的“一步法”药盒标记的多巴胺转运蛋白(DAT)显像剂99mTc-TRODAT-1在动物体内的生物学特性和显像效果。方法:①“一步法”药盒生产标记物;②正常大鼠体内生物分布特性的实验;③正常猴和偏侧PD模型猴给药后3h脑SPECT显像。结果:①TRODAT-1药盒标记简便。经TLC检测,标记率为79.9%,室温下放置2.5h稳定;②正常大鼠体内放射性清除迅速,主要由肝脏代谢后经肠道排出体外;③99mTc-TRODAT-1脑内浓聚较低,但纹状体(ST)区放射性摄取快速且保留较好,小脑(CB)清除较快,ST/CB值于2h达峰值(ST/CB=3.21),持续4h;④纹状体对99mTc-TRODAT-1的特异性摄取不受预先注射的氟哌啶醇的影响;⑤99mTc-TRODAT-1在大鼠体内分布无性别差异;⑥猴脑DATSPECT显像能基本清晰显示双侧ST正常影像及其病理改变。ST/CB值可以作为反映ST特异性摄取的参数指标。结论:“一步法”药盒制备的99mTc-TRODAT-1可用于脑SPECT显像研究,显像时间取给药后2~3h时间段为宜。     

西红花酸对动脉粥样硬化大鼠血脂及LOX-1表达的影响

目的研究西红花酸对动脉粥样硬化大鼠血脂及LOX-1表达的影响。方法健康SD雄性大鼠,随机分为4组：空白对照组、模型组、西红花酸高剂量组、西红花酸低剂量组。高脂饲料建立大鼠实验性动脉粥样硬化模型,测定大鼠血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白。同时取主动脉做病理切片检查。RT-PCR、Western blotting技术检测主动脉LOX-1的基因与蛋白表达水平,观察西红花酸对其血管平滑肌细胞LOX-1表达的影响。结果高、低剂量的西红花酸能显著降低动脉粥样硬化大鼠血清TC、TG和LDL-C含量;明显降低主动脉LOX-1的表达。结论西红花酸可明显下调动脉粥样硬化大鼠LOX-1的表达。     

多巴胺转运蛋白显像剂^99Tc^m—TRODAT-1药盒及注射液的质量控制

目的对自制多巴胺转运蛋白显像剂^99Tcm-TRODAT-1药盒及注射液进行质量控制研究。方法对3批^99Tc^m-TRODAT-1药盒及注射液进行澄清度、pH值、氯化亚锡与TRODAT-1含量、标记率、放化纯、半衰期测定,无菌以及细菌内毒素检查,可见异物、不溶性微粒检查,并分析药盒在不同存放环境下的稳定性。结果^99Tc^m-TRODAT-1药盒澄清度好,pH值为5．9±0．1,药盒中氯化亚锡与TRODAT-1含量稳定,标记率大于95％。药盒在0-4℃下6个月、室温（20～25℃）下10d内稳定性好。注射液澄清透明、pH值在5．5～7．0之间,放化纯≥95％,室温（20～25℃）下8h内放化纯〉90％。药盒及注射液无菌、细菌内毒素检查合格。结论自制的^99Tc^m-TRODAT-1药盒及注射液的质量控制方法简便易行,药盒及注射液质量符合临床应用要求。     

脑多巴胺转运蛋白显像剂99Tcm-TRODAT-1的SPECT显像

目的探讨脑多巴胺转运蛋白显像剂99Tcm-2β-[N,N′-双(2-巯乙基)乙撑二胺基]甲基,3β-(4-氯苯基)托烷(TRODAT-1)SPECT显像对帕金森病(PD)的诊断价值.方法对30例PD患者及16例健康志愿者行99Tcm-TRODAT-1脑SPECT显像.用2种半定量方法分析①应用感兴趣区(ROI)技术计算双侧横断面、矢状面纹状体(ST)/小脑(CB)放射性摄取比值(ST/CB);②取横断面基底节,将其划分成左、右ST,左、右尾状核和左、右壳核6个ROI,CB和枕叶皮质(OC)作为本底参考区,计算基底节ROI的放射性摄取比值[ROI/(CB+OC/2)].结果对照组横断面、矢状面左、右侧ST/CB分别为1.55±0.15、1.58±0.14和1.62±0.17、1.69±0.16.PD患者ST/CB和ROI/(CB+OC/2)均比对照组明显减低,差异有显著性(P＜0.001).计算矢状面双侧ST/CB更合理.根据ROI/(CB+OC/2)可获得基底节各神经核团放射性分布半定量数据.结论99Tcm-TRODAT-1脑SPECT显像是诊断PD的有效方法.