| 日本蟳精子获取和超低温冷冻保存技术研究 |
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| 引用本文： | 刘翠玲,邹琰,吴莹莹,王英俊,刘童,宋爱环,唐学玺,刘洪军.日本蟳精子获取和超低温冷冻保存技术研究[J].中国海洋大学学报(自然科学版),2020,50(8). |
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| 作者姓名： | 刘翠玲 邹琰 吴莹莹 王英俊 刘童 宋爱环 唐学玺 刘洪军 |
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| 作者单位： | 中国海洋大学海洋生命学院,山东青岛266003;山东省海洋生物研究院,青岛市海洋生物种质资源挖掘与利用工程实验室,山东青岛266104;山东省海洋生物研究院,青岛市海洋生物种质资源挖掘与利用工程实验室,山东青岛266104;中国海洋大学海洋生命学院,山东青岛266003 |
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| 基金项目： | 水产经济生物种质资源数据库建立;种质评价应用项目;山东省农业良种工程项目;山东省现代农业产业技术体系建设项目虾蟹类创新团队项目;中海油公益基金会山东省典型海岸带大型底栖生物恢复研究项目 |
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| 摘 要： | 本文比较了胰酶消化法、网搓法和机械研磨法3种方法对获得游离日本蟳精子的效果。对获得的精子进行超低温冷冻保存,用曙红Y进行染色,检测精子的存活率。使用7种不同稀释液、不同浓度的二甲基亚砜(DMSO)、甘油(GLY)、1,2-丙二醇(PG)为抗冻保护剂,在6种不同的降温程序下,对日本蟳精子进行超低温冷冻保存,后在不同的温度下解冻复苏精子。实验结果表明:3种精子获取方法中以搓洗法的实验效果最好,胰酶消化法的效果次之,最差的是机械研磨法。其中搓洗法中以500目的筛绢效果最好,精子密度达2.56×10~(13)个/mL。日本蟳精子冷冻保存实验结果表明,稀释液以去钙人工海水、抗冻保护剂以5%DMSO、平衡时间20 min、降温程序P-1(0℃平衡20 min;-5℃/min降至-80℃;-80℃平衡5 min;-20℃/min降至-180℃;然后置于液氮中保存),水浴解冻37.5℃的效果最好,精子存活率最高。
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| 关 键 词： | 日本蟳 精子 精子获取 超低温保存 程序降温 |
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