| 小鼠巨细胞病毒即刻早期基因M122酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活作用的检测 |
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| 引用本文： | 王慧,田佳,罗丹,刘兴楼,舒赛男,张慧娟,方峰.小鼠巨细胞病毒即刻早期基因M122酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活作用的检测[J].实用儿科临床杂志,2010(4). |
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| 作者姓名： | 王慧 田佳 罗丹 刘兴楼 舒赛男 张慧娟 方峰 |
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| 作者单位： | 华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科学系; |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(30671859) |
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| 摘 要： | 目的构建小鼠巨细胞病毒(MCMV)即刻早期基因M122的酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-M122,并检测其自激活作用及对酵母AH109菌株有无毒性作用,用于筛选小鼠胚胎脑cDNA文库。方法采用反转录(RT)-PCR的方法扩增MCMV的M122基因片段,并将其插入到pMD18-Tsimple vector,构建重组质粒pMD18-T-M122。用限制性内切酶EcoRⅠ和SalⅠ将重组质粒酶切鉴定,并测序。测序正确的pMD18-T-M122重组质粒和载体pGBKT7-BD分别用限制性内切酶EcoRⅠ和SalⅠ进行双酶切,凝胶回收M122基因片段及pGBKT7-BD载体片段。将回收的M122基因片段和pGBKT7-BD载体片段,用T4 DNA连接酶16℃连接过夜,构建诱饵质粒pGBKT7-M122。对pGBKTT-M122进行酶切鉴定,测序。将测序正确的pGBKT7-M122转化AH109酵母感受态细胞,转化菌液涂布于营养缺陷培养基SD/-Trp平板和SD/-Trp/X-α-Gal平板。空载体质粒pGBKT7-BD和阳性质粒pCL作为对照亦被转入AH109酵母感受态细胞,转化菌液分别涂布于SD/-Trp平板和SD/...
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| 关 键 词： | M122基因 诱饵载体 酵母双杂交系统 自激活作用 小鼠巨细胞病毒 |
Construction and Self-Activation Detection of Bait Vector Containing of Mouse Cytomegalovirus Immediate-Early Gene M122 in Yeast Two-Hybrid System |
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| WANG Hui,TIAN Jia,LUO Dan,LIU Xing-lou,SHU Sai-nan,ZHANG Hui-juan,FANG Feng.Construction and Self-Activation Detection of Bait Vector Containing of Mouse Cytomegalovirus Immediate-Early Gene M122 in Yeast Two-Hybrid System[J].Journal of Applied Clinical Pediatrics,2010(4). |
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| Authors: | WANG Hui TIAN Jia LUO Dan LIU Xing-lou SHU Sai-nan ZHANG Hui-juan FANG Feng |
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| Affiliation: | WANG Hui,TIAN Jia,LUO Dan,LIU Xing-lou,SHU Sai-nan,ZHANG Hui-juan,FANG Feng(Department of Pediatrics,Tongji Hospital Affiliated to Tongji Medical College of Huazhong University of Science , Technology,Wuhan 430030,Hubei Province,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | M122 gene bait vector yeast two-hybrid system self-activation mouse cytomegalovirus |
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