蛋白激酶Cγ基因在脊髓背角跨器官敏化调控中的作用及其机制

目的 探索在内脏高敏感状态下,跨器官敏化模型鼠脊髓背角蛋白激酶(PKC)γ基因表达的改变并探索其与内脏痛敏程度之间的相关性,寻求调控跨器官敏化的新靶点.方法 采用鸡卵清蛋白(OVA)基础致敏联合结直肠芥子油(MO)灌注的方法建立跨器官敏化大鼠模型.30只SD大鼠随机分为:正常对照组(A组,n=7);跨器官敏化模型组(B组,n=8),给予OVA基础致敏联合MO结肠灌注;OVA+MO+生理盐水对照组(C组,n=7),给予OVA基础致敏联合MO结肠灌注,鞘内注射生理盐水10μl;OVA+MO+PKCγ特异性抑制剂(GF109203X)组(D组,n=8),OVA基础致敏联合MO结肠灌注,鞘内注射GF109203X 10μl.采用免疫荧光染色技术及Western blotting检测各组大鼠脊髓PKCγ的表达情况,并探讨PKCγ表达与内脏痛敏程度之间的关系.结果 免疫荧光染色结果显示,跨器官敏化模型组大鼠L4-6脊髓背角组织PKCγ蛋白表达量(98.99±7.73)明显多于正常对照组(56.14±6.22,P<0.05);而鞘内注射GF109203X的D组大鼠PKCγ表达量显著降低,明显低于鞘内注射生理盐水的C组(56.83±7.07 vs 89.59±9.90, P<0.05).Western blotting检测结果也显示,B组大鼠L4-6脊髓背角组织中PKCγ的表达量(1.538±0.228)与A组(1.065±0.064)相比显著增加(P<0.001);D组大鼠PKCγ表达量(1.124±0.169)与C组大鼠(1.605±0.224)比较则显著降低(P<0.001).结论 采用OVA基础致敏联合MO结肠灌注可成功建立跨器官敏化大鼠模型,脊髓背角组织中PKCγ参与了跨器官内脏痛敏信号的传递,在跨器官敏化的产生和维持中发挥了重要作用.