以IL-8为评价指标的THP-1细胞光致敏评价方法的确定和验证

目的 确定并验证以白细胞介素-8 （IL-8）作为评价指标的THP-1细胞光致敏体外评价方法。方法 将THP-1细胞与19种光致敏剂、4种光刺激剂、2种皮肤致敏剂、1种皮肤刺激剂和阴性受试物分别孵育24 h，在光照射（1.7 mW·cm^-2，50 min）或避光处理后，细胞换液放入培养箱内继续培养5 h。光刺激剂需在正式光照射前进行预照射（光照30 min，然后避光15 min）处理。用Luminex液相芯片检测技术测定细胞培养上清和细胞裂解液中IL-8和肿瘤坏死因子-α （TNF-α）的含量并统计分析，进一步确定评价光致敏的细胞因子指标，并进行方法验证。结果 与非照射组比较，13种光致敏剂均引起照射组THP-1细胞IL-8总含量显著增加（P<0.01） ，阿伏苯宗为非照射组的1 148～2 269倍，其余12种为非照射组的6.7～195.1倍；光刺激剂经光照射后也可引起细胞分泌IL-8显著增加（P<0.01） ，但经过预照射处理后，IL-8的含量相比直接照射组显著下降（P<0.01）。未经光照射条件下，皮肤致敏剂即可引起THP-1细胞分泌IL-8比对照组显著增加（P<0.01） ，光照后IL-8含量虽也较非照射组显著增加（P<0.01） ，但增加的幅度小于皮肤致敏剂本身引起IL-8变化的幅度。在光照条件下，皮肤刺激剂、阴性受试物均可引起细胞分泌IL-8较非照射组显著性增加（P<0.05） ，但增加的幅度较小，与对照组相似。以上受试物引起光照前后细胞TNF-α变化的幅度均与对照组相近。以IL-8为评价指标的THP-1细胞光致敏评价方法检测光致敏剂的准确性、特异性和灵敏度分别是77.8%、100.0%、68.4%，并且该方法具有良好的重复性。结论 确定了THP-1细胞光致敏评价方法的细胞因子标志物评价指标为IL-8，判定标准为： ①UVA照射后THP-1细胞中IL-8含量比非照射组显著增加；②UVA照射组与非照射组IL-8含量比值≥6.5；③当上述两条均满足时，对受试物进行UVA预照射处理，预处理照射组IL-8的含量与直接照射组（未经预照射）相比无显著性差异，且预处理照射组与预处理非照射组IL-8含量比值≥6.5。

Identification and validation of THP-1 cell photoallergy evaluation method with IL-8 as evaluation index