| Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因第2外显子核酶对靶RNA的体外切割活性的研究 |
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| 引用本文： | 朱家源,朱斌,徐兵,张涛,陈东,唐兵,李新强.Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因第2外显子核酶对靶RNA的体外切割活性的研究[J].第一军医大学学报,2004,24(6):653-655. |
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| 作者姓名： | 朱家源 朱斌 徐兵 张涛 陈东 唐兵 李新强 |
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| 作者单位： | [1]中山大学附属第一医院烧伤外科，广东广州510080 [2]第一军医大学南方医院血液科，广东广州510515 |
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| 摘 要： | 目的 体外研究锤头型α1Ⅰ型及Ⅲ型前胶原基因第2外显子片段核酶对各自靶RNA分子的切割活性及反应条件。同时观察两反义核酶对瘢痕中成纤维细胞胶原合成的影响。方法 将含α1Ⅰ型及Ⅲ型前胶原基因第2外显子片段的重组质粒(pT-Ⅰ、pT-Ⅲ)，经体外^32P标记转录后形成产物靶RNA。同时将含特异性核酶基因的重组质粒(pT-gⅠ、pT-gⅢ)进行非标记的体外转录，产物(核酶)与各自的^32P-靶RNA按不同的条件混和反应，电泳后放射自显影观察结果。将构建好的核酶以脂质体包裹后导入培养的成纤维细胞内，采用图像分析法观察核酶对成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白mRNA合成的影响。结果 两种核酶在37℃、42℃均能有效切割各自的靶RNA，对Mg^2 浓度的要求范围较宽(10～20mmol／L)；反应温度从65℃逐渐降至并维持在37℃的条件下核酶切割活性显提高。Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达明显降低，胶原蛋白生成降低，胶原生成明显受抑制。结论 针对α1Ⅰ型及Ⅲ型前胶原基因第2外显子片段的核酶能有效地在体外对靶RNA进行切割并能有效地抑制瘢痕中成纤维细胞胶原的合成。
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| 关 键 词： | 前胶原基因 核酶 体外活性 成纤维细胞 瘢痕 |
In vitro cleavage activity of the ribozymes constructed specifically for the second exons of pro alpha I and III collagen genes] |
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| Jia-yuan Zhu,Bin Zhu,Bing Xu,Tao Zhang,Dong Chen,Bing Tang,Xin-qiang Li.In vitro cleavage activity of the ribozymes constructed specifically for the second exons of pro alpha I and III collagen genes][J].Journal of First Military Medical University,2004,24(6):653-655. |
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| Authors: | Jia-yuan Zhu Bin Zhu Bing Xu Tao Zhang Dong Chen Bing Tang Xin-qiang Li |
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| Affiliation: | Department of Burns, First Affiliated Hospital, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510080, China. zhujiayuan@163.net |
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