小鼠前列腺干细胞抗原的原核表达、纯化及抗原活性检测

摘要：目的RT-PCR扩增小鼠前列腺干细胞抗原（mPSCA）基因，构建原核表达质粒pET-42a-mPSCA，诱导mPSCA蛋白表达并
纯化，并检测mPSCA蛋白的抗原活性。方法利用RT-PCR的方法从小鼠前列腺癌细胞系RM-1细胞中扩增mPSCA基因，测序
正确后PCR的方法去掉mPSCA的信号肽序列将其克隆至原核表达载体pET-42a中构建重组载体pET-42a-mPSCA。将其转化
至大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达，随后将表达的融合蛋白进行纯化。经SDS-PAGE分析后，Western blot检测纯化的蛋白，
将纯化蛋白进一步包板后用ELISA法对其抗原活性进行评价。结果测序结果证实成功扩增出全长mPSCA基因；酶切和测序
结果证实pET-42a-mPSCA原核表达载体构建成功；转化后可以成功诱导并纯化出大小与预期一致的蛋白；Western blot检测证
实纯化的蛋白能与特异性的抗体发生反应；ELISA 检测显示纯化后的mPSCA抗原具有免疫原性。结论成功扩增出小鼠全长
PSCA基因，成功构建了mPSCA基因的原核表达载体，获得了纯化的mPSCA蛋白，该蛋白具有良好的抗原活性，为进一步研究
以PSCA为靶点的前列腺癌的免疫治疗奠定了基础。