小鼠PDL1胞外区的克隆、表达及生物学效应研究

目的：克隆小鼠PDL1膜外区（简称mPDL-1 IgV）基因，构建原核表达载体，检测其表达和生物学活性。方法：提取小鼠脾细胞总RNA，采用RT-PCR克隆mPDL-1 IgV基因，并将其克隆到原核表达载体pET28a（＋）中，构建原核表达质粒pET28a（＋）／mPDL-1 IgV，转化大肠杆菌DH5α，进行PCR和双酶切鉴定，并测序。筛选阳性菌落，提取质粒，转化至大肠杆菌BL21（DE3）中进行表达，对表达产物进行SDS-PAGE电泳和Western blot检测分析，同时纯化mPDL-1 IgV蛋白，进行生物学活性检测。结果：从小鼠脾细胞总RNA中成功获得mPDL-1 IgVcDNA克隆，重组质粒pET28a（＋）／mPDL-1 IgV构建正确。转化pET28a（＋）／mPDL-1 IgV的E．coli BL21（DE3）成功诱导性表达重组小鼠PDL-1胞外区蛋白，并纯化mPDL-1 IgV蛋白，对其进行了复性和浓缩，复性后的蛋白显示出良好的生物学活性。结论：成功地克隆、表达和纯化了小鼠PDL1胞外区蛋白，为进一步研究其功能提供了条件。