金黄色葡萄球菌蛋白A的原核表达及生物亲和特性研究

目的构建金黄色葡萄球菌蛋白A (SPA)基因片段的表达载体，并在大肠杆菌表达系统中进行表达，探讨该重组蛋白与不同来源IgG结合的生物学特性。方法利用PCR法扩增SPA基因片段，将该段基因克隆到pET30a(+)表达载体，转化感受态BL21大肠杆菌细胞，IPTG诱导表达,利用SDS PAGE及Westen blot鉴定目的蛋白。His亲和层析纯化后分别与人、小鼠、兔、猪及山羊血清反应，分析其与不同来源IgG的亲和关系。结果构建的pET30a(+) SPA表达载体在大肠杆菌BL21中可表达SPA蛋白，且发现其与人及小鼠源IgG具有较高亲和性，与兔及猪源IgG亲和性较低。结论该重组蛋白SPA与人及小鼠源免疫球蛋白IgG具有较高亲和性，为下一步应用于SPA ELISA打下基础。