| 摘 要： | 目的利用网络药理学与分子生物学方法探究川续断皂苷乙(DB)的药理作用。方法在ChemMapper数据库上预测DB的靶标,通过iGEMDOCK软件进行化合物与靶标蛋白对接,根据评分选出关键靶标蛋白,关键靶标蛋白通过STRING数据库构建蛋白之间的相互作用,GO富集分析与KEGG通路分析关键靶标蛋白调控蛋白网络的生物过程与通路。血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖,通过MTT法与EdU法检测DB对VSMCs的细胞活性及增殖的影响。流式细胞术检测VSMCs周期,Western blot法与免疫荧光法检测关键靶标蛋白表达。结果 DB具有4个靶标蛋白,根据分子对接能量值选取DNA拓扑异构酶2a(TOP2a)后续研究对象,TOP2a相关的蛋白进行预测,得到相关蛋白10种,经过GO富集分析与KEGG通路分析,TOP2a可能参与VSMCs的增殖调控。MTT法结果显示DB对VSMCs活性明显抑制,具有剂量依赖性。EdU法检测DB(3、10、30μmol/L)对VSMCs增殖有明显抑制作用。流式细胞术显示DB可能阻滞VSMCs的G1期向S期合成,进而影响细胞增殖。Western blot法结果显示DB下调蛋白TOP2a表达水平,同样免疫荧光法结果显示TOP2a表达下调。结论 DB可能通过下调TOP2a表达,调控细胞周期,抑制VSMCs的增殖。
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