小鼠microRNA-21慢病毒抑制载体的构建及鉴定 |
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引用本文: | 覃玉桃,刘艳丽,伍伟锋.小鼠microRNA-21慢病毒抑制载体的构建及鉴定[J].当代医学,2013,0(15):35-37. |
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作者姓名: | 覃玉桃 刘艳丽 伍伟锋 |
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作者单位: | 广西 530021 广西医科大学第一附属医院放疗科 广西医科大学第一附属医院心内科 |
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基金项目: | 国家自然科学基金(81050020) |
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摘 要: | 目的构建microRNA-21(miR-21)慢病毒抑制载体,为研究miR-21在小鼠体内的功能及作用机制打下基础。方法利用miR-21前体并将其克隆入LV3pGLV-H1-GFP质粒中,经酶切及测序鉴定,利用脂质体将鉴定的阳性重组LV3pGLV-H1-GFP-miR-21抑制载体、PG-P1-VSVG和pCMV-dR3个质粒转染到HEK-293T细胞,将所得病毒感染293T细胞,检测病毒滴度,并将制备的病毒颗粒感染乳鼠心肌细胞和尾静脉注射小鼠,检测miR-21在小鼠体内的表达。结果酶切及测序结果证明成功构建了LV3pGLV-H1-GFP-miR-21重组质粒,并成功包装成慢病毒,病毒滴度为2.4×109TU/ml,重组病毒成功感染心肌细胞,同时在Balb/c小鼠心脏有表达。结论成功构建miR-21慢病毒抑制载体,获得高效表达miR-21的慢病毒颗粒,为miR-21的进一步研究奠定了基础。
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关 键 词: | microRNA miR-21慢病毒抑制载体 绿色荧光蛋白 |
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