| SP-TAT-Apoptin融合基因真核表达载体的构建和鉴定 |
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| 引用本文： | 韩苏夏,马瑾璐,吕毅,黄辰,段康民.SP-TAT-Apoptin融合基因真核表达载体的构建和鉴定[J].第四军医大学学报,2009,30(1):20-23. |
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| 作者姓名： | 韩苏夏 马瑾璐 吕毅 黄辰 段康民 |
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| 作者单位： | 韩苏夏,HAN Su-Xia(西安交通大学医学院第一附属医院肿瘤中心;西北大学生命科学院分子微生物研究室,陕西,西安,710069);马瑾璐,吕毅,MA Jin-Lu,LV Yi(西安交通大学医学院第一附属医院肿瘤中心);黄辰,HUANG Chen(西安交通大学医学院中心实验室,陕西,西安,710061);段康民,DUAN Kang-Min(西北大学生命科学院分子微生物研究室,陕西,西安,710069)
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| 摘 要： | 目的：通过基因克隆构建表达SP—TAT—Apoptin融合基因的真核表达载体．方法：通过DNA重组技术，以pCD—NA3．1／Apoptin质粒为模板，进行PCR反应；将具有分泌功能的信号肽和能够携带核酸、蛋白和肽自由地通过细胞膜和核膜的蛋白转导域TAT序列连接于Apoptin基因5’端；PCR反应的产物连接于plenti6-V5-D—TOPO真核表达载体．用限制性内切酶酶切分析和DNA序列分析鉴定重组结果；将重组的真核表达载体瞬时转染HUVEC细胞，用免疫荧光标记对转染后的细胞进行处理，观察重组蛋白的表达情况．结果：PCR产物大小符合要求，重组质粒plenti6-V5-D—TOPO／SP-TAT-Ap—optin双酶切鉴定与预期一致，测序结果正确．且经激光共聚焦显微镜观察到重组蛋白的表达，表明重组表达载体已构建成功．结论：成功克隆出SP-TAT-Apoptin融合基因，并成功构建其真核细胞表达载体，为下一步研究SP-TAT-Apoptin融合基因对肿瘤的生长抑制作用的体内外研究奠定了基础．
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| 关 键 词： | 信号肽 蛋白转导域 鸡贫血病毒 Apoptin基因 |
Construction and identification of eukaryotic expression vector of SP-TAT-Apoptin |
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| HAN Su-Xia,MA Jin-Lu,LV Yi,HUANG Chen,DUAN Kang-MinOncology Center,First Affiliated Hospital,Central Laboratory,College of Medicine,Xi'an Jiaotong University,Xi'an ,China.Construction and identification of eukaryotic expression vector of SP-TAT-Apoptin[J].Journal of the Fourth Military Medical University,2009,30(1):20-23. |
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| Authors: | HAN Su-Xia MA Jin-Lu LV Yi HUANG Chen DUAN Kang-MinOncology Center First Affiliated Hospital Central Laboratory College of Medicine Xi'an Jiaotong University Xi'an China |
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| Affiliation: | HAN Su-Xia1,3,MA Jin-Lu1,LV Yi1,HUANG Chen2,DUAN Kang-Min31Oncology Center,First Affiliated Hospital,2Central Laboratory,College of Medicine,Xi'an Jiaotong University,Xi'an 710061,China,3Department of Molecular Microbiology,College of Life Sciences,Northwest University,Xi'an 710069 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | signal peptide protein transduction domains PTDs Chicken Anaemia Virus Apoptin |
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