基于MAPK/ERK通路研究芍药汤对溃疡性结肠炎黏膜损伤修复作用机制

目的] 探讨芍药汤通过有丝分裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(mitogen-activated protein kinase/extracellular signal-regulated kinase，MAPK/ERK)通路对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)结肠黏膜损伤的修复作用和机制。方法] 经结肠缓慢推注5%三硝基苯磺酸(trinitrobenzene sulfonic acid，TNBS)0.09 mL+无水乙醇0.06 mL，复制大鼠UC模型，将48只无特定病原体(specific pathogen free，SPF)SD大鼠随机分为正常组，模型组，芍药汤高、中、低剂量组与美沙拉嗪组。各组灌胃干预 ，评价疾病活动指数(disease activity index，DAI)，观察组织病理变化并进行组织学活动指数(histological activity index，HAI)评分；以实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction，Real-time qPCR)及免疫印迹法检测结肠组织中屏障保护相关指标的mRNA及蛋白表达水平。建立脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)小肠上皮细胞IEC-6损伤模型，以噻唑蓝比色法(dimethylthiahiazo，MTT)筛选药物最佳干预浓度，将细胞分为空白组、LPS组和芍药汤组，划痕实验观察细胞迁移率；免疫印迹法检测细胞闭锁小带蛋白-1(zonula occludens-1，ZO-1)蛋白表达水平。 结果] 体内实验显示，与正常组比较，模型组大鼠肠黏膜结构缺失，黏膜下层和固有层可见明显的炎性细胞浸润；DAI、HAI评分显著升高(P＜0.01)，紧密连接蛋白-2(claudin-2)、磷酸化p38MAPK(phosphorylated-p38MAPK，p-p38MAPK)、磷酸化ERK1/2(phosphorylated-ERK1/2，p-ERK1/2)蛋白表达显著下调(P＜0.001，P＜0.01，P＜0.001)；肠三叶因子(intestinal trefoil factor，ITF)的mRNA表达显著降低(P＜0.05)，缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α)蛋白与mRNA表达显著升高(P＜0.01)。与模型组比较，芍药汤各组病理损伤明显改善，DAI、HAI评分明显降低(P＜0.05，P＜0.01)，芍药汤各组claudin-2、p-p38 MAPK、p-ERK1/2蛋白表达水平显著上调(P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001)，ITF mRNA表达量显著上调(P＜0.01)；HIF-1α蛋白与mRNA表达水平显著下调(P＜0.01)。体外实验显示，与空白组比较，LPS可明显抑制IEC-6细胞迁移(P＜0.01)，下调ZO-1蛋白表达(P＜0.05)。与LPS组比较，芍药汤组细胞迁移率明显上升(P＜0.05，P＜0.01)，ZO-1蛋白表达明显上调(P＜0.05)。结论] 芍药汤对UC大鼠结肠黏膜损伤具有修复作用，其机制可能与激活MAPK/ERK通路，上调claudin-2、ZO-1，下调HIF-1α蛋白表达，促进肠黏膜上皮细胞迁移有关。

Study on the Repair Mechanism of Shaoyao Decoction on Mucosal Barrier in Ulcerative Colitis Based on MAPK/ERK Pathway