一种新型速效人胰岛素类似物的构建、制备及性质研究

目的：构建和制备出一种新型速效人胰岛素类似物（PIns）,进行其性质研究。方法：采用加端PCR的方法,扩增出在天然人胰岛素原N端添加精氨酸、脯氨酸、赖氨酸、脯氨酸4个氨基酸残基的重构胰岛素原基因片段,将其插入通用表达载体pET28 a后,再将经过改构后的硫氧还蛋白（1-20 aa）的基因片段与重构胰岛素原基因的5′端通过赖氨酸连接,成功构建了速效人胰岛素原类似物融合蛋白（FKPPIns）的表达载体（pET28 a-FKPPIns）。此融合蛋白在大肠杆菌BL-21（DE3）中以包涵体的形式表达,经包涵体洗涤和DEAE阴离子交换树脂纯化后进行复性、酶切。酶切产物经RP-HPLC纯化后,质谱法测定其分子量;等电聚焦法测定此蛋白的等电点;凝胶过滤法测定其自身的缔合性质。对新西兰大白兔肌肉注射纯化后PIns,进行初步的药效学评价。结果：获得了结构为R-P-K-P-Insu lin的PIns纯品,其等电点为7.3,自身缔合性较标准胰岛素显著下降。结论：PIns与标准人胰岛素相比,起效快、达峰时间及持续时间短。

Construction, preparation and properties of a novel short-acting human insulin analog