从巨噬细胞角度探讨复方五凤草液干预结核性溃疡的机制

目的 探讨复方五凤草液治疗结核性溃疡的临床疗效及对巨噬细胞极化的影响。方法 ①临床实验。将南京市中西医结合医院145例结核性溃疡患者按随机数字表法分为观察组、对照Ⅰ组和对照Ⅱ组。3组均予以基础抗结核化学治疗的同时，观察组予以复方五凤草液，对照Ⅰ组予以康复新液，对照Ⅱ组予以异烟肼液局部外用治疗，疗程4周。分别观察3组患者创面愈合总有效率、中医证候积分、创面组织病理学形态及创面组织中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、精氨酸酶-1（Arg-1）的表达水平。②细胞实验。RAW264.7细胞在完全培养基DMEM（10%的胎牛血清，1%青-链酶素溶液）于37 ℃、5% CO₂的细胞培养箱中培养。经佛波酯（PMA）诱导后向巨噬细胞分化，分别用脂多糖（LPS）诱导成M1巨噬细胞、白细胞介素-4（IL-4）诱导成M2巨噬细胞，分别予康复新溶液、异烟肼液、复方五凤草液处理以上细胞模型36 h，收集细胞上清液并离心，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、转化生长因子-β（TGF-β）、iNOS和Arg-1的蛋白量的表达，流式细胞术（FCM）检测药物对CD86、CD206表达的影响。结果 ①临床实验。与对照Ⅰ组［87.5%（42/48），χ²=3.962，P<0.05］和对照Ⅱ组［83.3%（40/48），χ²=6.162，P<0.05］比较，复方五凤草液组的总有效率［98.0%（48/49）］明显较高；治疗28 d后，与对照Ⅰ组、对照Ⅱ组比较，复方五凤草液组的中医证候积分明显降低（P<0.05），复方五凤草液组创面组织病理学形态改善更为明显；免疫组化结果显示，治疗28 d后，与对照Ⅰ组、对照Ⅱ组比较，复方五凤草液组局部病灶组织样本中的iNOS表达量明显降低（P<0.05），Arg-1表达量显著升高（P<0.05，P<0.01）。②细胞实验。Western blot实验结果显示，与M0组比较，LPS组中iNOS、TNF-α表达升高（P<0.01）。与LPS组比较，LPS+异烟肼组、LPS+康复新液组、LPS+复方五凤草液组中iNOS、TNF-α表达下降（P<0.05）；与LPS+异烟肼组比较，LPS+康复新液组、LPS+复方五凤草液组中iNOS表达下降（P<0.05，P<0.01），LPS+复方五凤草液组TNF-α水平显著下降（P<0.01）；与LPS+康复新液组比较，LPS+复方五凤草液组中TNF-α表达下降（P<0.05）。与M0组比较，IL-4组中Arg-1、TGF-β表达升高（P<0.01）。与IL-4组比较，IL-4+异烟肼组、IL-4+康复新液组、IL-4+复方五凤草液组中Arg-1、TGF-β表达升高（P<0.05，P<0.01）。与IL-4+异烟肼组比较，IL-4+康复新液组、IL-4+复方五凤草液组中Arg-1、TGF-β表达升高（P<0.05，P<0.01）；与IL-4+康复新液组比较，IL-4+复方五凤草液组中Arg-1、TGF-β表达升高（P<0.05，P<0.01）。流式细胞术结果显示，与M0组比较，LPS组CD86表达升高，IL-4组中CD206表达升高（P<0.01）。与LPS组比较，LPS+异烟肼组、LPS+康复新液组、LPS+复方五凤草液组中CD86表达下降（P<0.01）；与LPS+异烟肼组比较，LPS+康复新液组、LPS+复方五凤草液组中CD86表达下降（P<0.01）；与LPS+康复新液组比较，LPS+复方五凤草液组中CD86表达下降（P<0.01）。与IL-4组比较，IL-4+异烟肼组、IL-4+康复新液组、IL-4+复方五凤草液组中CD206表达升高（P<0.01）；与IL-4+异烟肼组比较，IL-4+康复新液组、IL-4+复方五凤草液组中CD206表达升高（P<0.01）；与IL-4+康复新液组比较，IL-4+复方五凤草液组中CD206表达升高（P<0.05）。结论 复方五凤草液能有效促进结核性溃疡愈合，其作用机制可能是通过抑制iNOS、TNF-α、CD86的表达并促进Arg-1、TGF-β、CD206的表达，从而调控M1/M2巨噬细胞极化平衡来完成。

Therapeutic Effect of Compound Wufengcao Liquid on Tuberculous Ulcer from Perspective of Macrophages