当归芍药散含药血清调控UPP途径对Aβ1-40损伤PC12细胞的保护作用及机制

目的 探讨当归芍药散（DSS）含药血清对β淀粉样蛋白（Aβ）_1-40损伤大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤（PC12）细胞的保护作用及对泛素-蛋白酶体途径（UPP）的调控作用机制。方法 采用Aβ_1-40干预PC12细胞制备损伤模型。实验分为空白组、模型组、DSS含药血清高、中、低剂量组（10%、5%、2.5%）。细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测细胞存活率，流式细胞术检测细胞凋亡，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测细胞Aβ和磷酸化（p）-Tau蛋白含量，免疫荧光细胞化学（ICC）标记UPP重要靶点泛素（Ub）、泛素连接酶E3（E3）、26S蛋白酶体、泛素羧基端水解酶1（UCHL1）和UCHL3蛋白的表达，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测Ub、E3、26S、UCHL1、UCHL3 mRNA和蛋白的表达。结果 根据CCK-8实验结果，筛选5 μmol·L^-1、48 h为PC12细胞损伤最佳造模条件。与空白组比较，模型组细胞存活率降低（P<0.05）、凋亡率升高（P<0.05），Aβ及p-Tau表达升高（P<0.05），Ub蛋白及mRNA表达升高，26S、E3、UCHL1+3蛋白及mRNA表达降低（P<0.05）。与模型组比较，DSS中剂量组细胞存活率升高（P<0.05）；DSS各剂量组细胞凋亡率下降（P<0.05）；DSS各剂量组Aβ含量降低（P<0.05），DSS高、中剂量组p-Tau 含量降低（P<0.05）；DSS各剂量组Ub mRNA表达降低（P<0.05），DSS各剂量组26S mRNA表达升高（P<0.05），DSS中剂量组UCHL1 mRNA表达升高（P<0.05），DSS高、中剂量组E3和UCHL 3mRNA表达升高（P<0.05）；DSS各剂量组Ub蛋白表达降低，DSS高、中剂量组26S、E3、UCHL1+3蛋白表达升高，以DSS中剂量效果最佳。结论 DSS含药血清可提高细胞存活率、降低细胞凋亡率、清除Aβ和p-Tau蛋白沉积，对Aβ_1-40损伤PC12细胞有保护作用，其作用可能是通过调控UPP降低Ub表达及升高26S、E3、UCHL1及UCHL3表达来发挥。