| 垂序商陆PaAACT基因克隆和表达分析 |
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| 引用本文： | 刘雅琳,朱畇昊,盛芷葳,陈晶玉,冯卫生,郑晓珂,赵乐.垂序商陆PaAACT基因克隆和表达分析[J].中国实验方剂学杂志,2019,25(21):124-131. |
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| 作者姓名： | 刘雅琳 朱畇昊 盛芷葳 陈晶玉 冯卫生 郑晓珂 赵乐 |
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| 作者单位： | 河南中医药大学 药学院, 郑州 450046,河南中医药大学 药学院, 郑州 450046;河南中医药大学 呼吸疾病诊疗与新药研发河南省协同创新中心, 郑州 450046,河南中医药大学 药学院, 郑州 450046,河南中医药大学 药学院, 郑州 450046,河南中医药大学 药学院, 郑州 450046;河南中医药大学 呼吸疾病诊疗与新药研发河南省协同创新中心, 郑州 450046,河南中医药大学 药学院, 郑州 450046;河南中医药大学 呼吸疾病诊疗与新药研发河南省协同创新中心, 郑州 450046,河南中医药大学 药学院, 郑州 450046;河南中医药大学 呼吸疾病诊疗与新药研发河南省协同创新中心, 郑州 450046 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划项目（2017YFC1702800）；国家自然科学基金项目（81603232）；河南省重大科技专项（171100310500）；中央引导地方科技发展专项 |
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| 摘 要： | 目的:从垂序商陆根中克隆了商陆皂苷甲生物合成过程中关键酶乙酰乙酰辅酶A转移酶(acetoacetyl-CoA transferase,AACT)基因,进行生物信息学分析和原核表达。方法:提取垂序商陆根的总RNA,然后逆转录合成c DNA,在分析垂序商陆转录组数据的基础上,设计Pa AACT基因的特异性引物,聚合酶链式反应(PCR)扩增Pa AACT基因的c DNA序列,通过构建原核表达载体p ET-32a-PaAACT,诱导表达并且纯化目的蛋白。结果:Pa AACT基因开放阅读框为1 254 bp,编码417个氨基酸。生物信息学分析显示Pa AACT蛋白的分子式为C1 914H3 120N538O576S17,推测其相对分子质量为43. 43 k Da,理论等电点8. 90,不稳定系数32. 27,属于稳定蛋白质。根据生物信息学分析结果,Pa AACT蛋白属于硫解酶家族成员,在C末端含有硫解酶家族的1个保守位点和1个活性位点。Pa AACT蛋白可能位于细胞质中、不含信号肽、没有跨膜区。系统进化分析显示Pa AACT蛋白与甜菜等廖科植物AACT蛋白亲缘关系较近。经IPTG诱导,在大肠埃希菌BL21 (DE3)菌株中表达了Pa AACT重组蛋白,利用Ni2+亲和色谱获得了纯化的目的蛋白。结论:该研究从垂序商陆中克隆Pa AACT基因,为下一步测定Pa AACT酶催化活性、制备抗体奠定基础,也为研究其在商陆皂苷甲生物合成途径中的作用提供理论依据。
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| 关 键 词： | 垂序商陆 乙酰乙酰辅酶A转移酶 基因克隆 生物信息学分析 原核表达 |
| 收稿时间： | 2019/5/2 0:00:00 |
Cloning and Expression Analysis of PaAACT Gene from Phytolacca americana |
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| LIU Ya-lin,ZHU Yun-hao,SHENG Zhi-wei,CHENG Jing-yu,FENG Wei-sheng,ZHENG Xiao-ke and ZHAO Le.Cloning and Expression Analysis of PaAACT Gene from Phytolacca americana[J].China Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2019,25(21):124-131. |
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| Authors: | LIU Ya-lin ZHU Yun-hao SHENG Zhi-wei CHENG Jing-yu FENG Wei-sheng ZHENG Xiao-ke and ZHAO Le |
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| Affiliation: | College of Pharmacy, Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, China,College of Pharmacy, Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, China;Collaborative Innovation Center for Respiratory Disease Diagnosis and Treatment & Chinese Medicine Development of Henan Province, Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, China,College of Pharmacy, Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, China,College of Pharmacy, Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, China,College of Pharmacy, Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, China;Collaborative Innovation Center for Respiratory Disease Diagnosis and Treatment & Chinese Medicine Development of Henan Province, Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, China,College of Pharmacy, Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, China;Collaborative Innovation Center for Respiratory Disease Diagnosis and Treatment & Chinese Medicine Development of Henan Province, Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, China and College of Pharmacy, Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, China;Collaborative Innovation Center for Respiratory Disease Diagnosis and Treatment & Chinese Medicine Development of Henan Province, Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Phytolacca americana acetoacetyl-CoA transferase gene cloning bioinformatic analysis prokaryotic expression |
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