抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路对兔原代巨噬细胞自体吞噬的影响及机制

目的 探讨抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路对兔原代巨噬细胞自体吞噬中的影响。方法 分离培养纯种新西兰兔腹腔原代巨噬细胞并分为4组，加入磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）抑制剂LY294002（10 μmol/L）组、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）抑制剂雷帕霉素（10 nmol/L）组、蛋白激酶B（Akt）抑制剂曲西立滨组（20 μmol/L）以及空白对照组。共培养4 h、12 h后分别收集细胞，运用透射电镜观察巨噬细胞自噬体的变化，细胞免疫荧光法检测微管相关蛋白轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）分子的表达，Western blot检测 Akt、mTOR、磷酸化Akt（p-Akt）、磷酸化mTOR（p-mTOR）及自噬相关蛋白Beclin-1和自噬蛋白Atg5-Atg12连接体的表达，单丹酰尸胺（MDC）染色法观察自噬溶酶体的变化。结果 与空白对照组相比，透射电镜下LY294002组自噬体、自噬空泡、髓磷脂图像等自噬标记物明显减少，雷帕霉素组、曲西立滨组明显增多；激光共聚焦显微镜下LY294002组LC3Ⅱ表达显著减少，雷帕霉素组、曲西立滨组表达显著增多；Western blot结果显示LY294002组Beclin-1及Atg5-Atg12蛋白表达水平显著下降，p-mTOR、p-Akt蛋白表达显著减少；雷帕霉素组、曲西立滨组Beclin-1及Atg5-Atg12蛋白表达水平明显上调，共培养4 h后p-Akt表达增多，雷帕霉素组p-mTOR表达增多，曲西立滨组减少；共培养12 h后雷帕霉素组、曲西立滨组p-mTOR表达显著减少，雷帕霉素组p-Akt表达显著增多，曲西立滨组显著减少；MDC染色显示LY294002组自噬溶酶体明显减少，雷帕霉素组、曲西立滨组明显增多。结论 抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路能促进兔原代巨噬细胞自体吞噬，抑制PI3K能减少兔原代巨噬细胞自体吞噬，可能是不同类型的PI3K分子通过其他通路起作用。

Roles of Selective Inhibition of PI3K/Akt/mTOR Signaling Pathway on Rabbit Primary Macrophage Autophagy and Possible Pechnism