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实时PCR在大肠杆菌O157:H7快速检测中的应用
引用本文:张建华,陆群英,程苏云,卢亦愚,叶菊莲,罗芸.实时PCR在大肠杆菌O157:H7快速检测中的应用[J].中国人兽共患病杂志,2007,23(8):839-841,M0004.
作者姓名:张建华  陆群英  程苏云  卢亦愚  叶菊莲  罗芸
作者单位:[1]绍兴文理学院医学院,绍兴312000 [2]浙江省疾病预防控制中心,杭州310009
基金项目:浙江省卫生厅医药卫生科学研究基金
摘    要:目的建立一种快速、敏感、特异的大肠杆菌O157:H7的定量检测方法。方法根据GenBank公布的O157:H7大肠杆菌rfbE基因序列,应用分子生物学软件进行序列比对,在该基因的保守区设计引物和TaqMan探针,对荧光定量PCR反应条件进行优化,建立实时荧光定量PCR检测大肠杆菌O157:H7的反应体系,并对该法的特异性、敏感性和重复性进行了评价。结果所有大肠杆菌O157:H7菌株的检测结果均为阳性。而所有其它菌株检测结果均为阴性;该方法检测的灵敏度可达1cfu/μL。重复性检测的变异系数均小于5%。在模拟污染牛奶中,可检出l×10^2 cfu/μL的细菌。从细菌核酸提取至完成检测约需3h。结论本研究建立的基于Taqman探针技术的实时PCR检测体系具有快速、灵敏度高、特异性强等优点,可用于大肠杆菌O157:H7食物中毒的快速诊断和食品微生物检测,为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段。

关 键 词:实时PCR  Taqman探针  大肠杆菌O157:H7  检测
文章编号:1002-2694(2007)08-0839-03
修稿时间:2006-12-202007-04-03

Rapid detection of Escherichia coli O157:H7 by using real-time fluorescence PCR assays
ZHANG Jian-hua,LU Qun-ying,CHENG Su-yun,LU Yi-yu,YE Ju-lian,LUO Yun.Rapid detection of Escherichia coli O157:H7 by using real-time fluorescence PCR assays[J].Chinese Journal of Zoonoses,2007,23(8):839-841,M0004.
Authors:ZHANG Jian-hua  LU Qun-ying  CHENG Su-yun  LU Yi-yu  YE Ju-lian  LUO Yun
Affiliation:1. Medical school of shaoxing university, Shaoxing, Zhejiang, 312000, China The Center for Disease Prevention and Control of Zhejiang Province, Hangzhou, Zhejiang 310009 ,China
Abstract:
Keywords:
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