| 丙型肝炎病毒1b型NS3基因扩增方案的改进 |
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| 引用本文： | 柯晓煜,丁红晖,郭燕,陈明发,林永,夏幼辰,孙潺,杨东亮,吴珺.丙型肝炎病毒1b型NS3基因扩增方案的改进[J].肝脏,2012,17(11):775-778. |
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| 作者姓名： | 柯晓煜 丁红晖 郭燕 陈明发 林永 夏幼辰 孙潺 杨东亮 吴珺 |
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| 作者单位： | 柯晓煜 (430030 武汉 华中科技大学同济医学院附属协和医院感染科;同济医学院附属同济医院急诊科)； 丁红晖 (同济医学院附属同济医院临床免疫研究室)； 郭燕 (同济医学院附属同济医院临床免疫研究室)；陈明发 (430030,武汉 华中科技大学同济医学院附属协和医院感染科)；林永 (430030,武汉 华中科技大学同济医学院附属协和医院感染科)；夏幼辰 (430030,武汉 华中科技大学同济医学院附属协和医院感染科)；孙潺 (430030,武汉 华中科技大学同济医学院附属协和医院感染科)； 杨东亮 (430030,武汉 华中科技大学同济医学院附属协和医院感染科)；吴珺 (430030,武汉 华中科技大学同济医学院附属协和医院感染科)； |
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| 基金项目： | 国际科技合作与交流专项(2011DFA31030);国家自然科学基金资助项目(81001313);中国博士后科学基金资助项目(20090460949) |
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| 摘 要： | 目的优化扩增武汉地区HCV1b型患者HCV非结构蛋白3(NS3)的cDNA,并进行测序。方法从患者血清中提取HCVRNA,采用型特异性引物扩增分型法检测HCV患者基因分型。设计3对外侧引物和3对内侧引物,采用套式PCR技术(方案一)分别扩增HCV1b型患者的HCVNS33个区段,然后用3对内侧引物进行测序。为了优化NS3扩增和测序效果和减少操作繁琐,对引物进行改进,设计1对外侧引物和1对内侧引物,采用改进的套式PCR技术(方案二)直接扩增HCV1b型患者的HCVNS3区,然后用3个正向引物和1个逆向引物进行测序。结果改进的套式PCR技术(方案二)与套式PCR技术(方案一)相比,操作较为简单,而且扩增效率增高,扩增效果较好。结论采用改进的套式PCR技术(方案二)扩增和测序HCVNS3区更迅速、有效、实用。
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| 关 键 词： | HCV NS3 套式PCR 内侧引物 外侧引物 |
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