3种食源性致病菌共增菌及三重PCR检测

目的 建立沙门菌、金黄色葡萄球菌和副溶血性弧菌三重PCR检测方法。方法 3株菌在本实验室自行研制的共增菌培养基(SSV培养基)混合培养16 h,分别对沙门菌invA基因、金黄色葡萄球菌nuc基因、副溶血性弧菌collagenase基因设计特异性引物，建立三重PCR体系，通过对引物浓度、退火温度及循环次数进行优化，从而建立最优体系，并从特异性、重复性、灵敏性3个方面对体系进行评价。结果 三重PCR体系中，invA、nuc、collagenase引物浓度分别为10、12.5和12.5 nmol/L;最佳退火温度为55.6℃;目标菌的引物特异性好，且体系的检测灵敏度高，3株菌在三重PCR体系中的灵敏度都在10² CFU/mL以上。结论 建立的三重PCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好。