体外扩增对食管癌患者NK细胞表面受体表达及其抑瘤活性的影响

目的： 探讨食管癌患者NK细胞扩增前后的受体表达及其对肿瘤细胞的杀伤。 方法： 收集福建省肿瘤医院食管癌患者外周血20例，健康供者（对照组）外周血10例。NK细胞培养采用细胞因子（IL-2+IL-12+IL-15+IL-18）组合，流式细胞术检测NK细胞免疫表型及其受体（CD56+、CD69+、NKG2D、NKp30、NKp44、NKp46、CD158b、CD159a）的表达，LDH法检测不同效靶比时NK细胞对多种肿瘤细胞株（K562、Raji、Eca-109、TE-1）的杀伤作用。 结果： 与对照组相比，食管癌患者外周血CD3+、CD4+细胞比例以及CD4+/CD8+T细胞比值明显降低（P<0.05），NK细胞（CD3-CD56+）及调节性T细胞（Treg）比例明显升高（P<0.05）。经细胞因子IL-2+IL-12+IL-15+IL-18组合定向扩增20 d后，食管癌患者NK细胞比例高达90%以上，NK细胞数扩增达1 000倍以上（P<0.01）；而CD3+T细胞、CD4+、CD8+T细胞、CD19+B细胞、Treg细胞及单核巨噬细胞（CD14+）比例均显著降低（P<0.01），且食管癌患者与对照组之间无统计学差异（P>0.05）。经细胞因子体外培养20 d后，NK细胞表面CD69及活化性受体（NKG2D、NKp30、NKp44、NKp46）均明显上调，而抑制性受体（CD158b、CD159a）均明显下调（P<0.05）。培养20 d后，食管癌患者NK细胞对肿瘤细胞K562、Raji、Eca-109、TE-1的杀伤能力均显著高于培养前\（69.2±5.1）% vs （42.3±3.0）%，（44.6±3.2）% vs （21.1±2.0）%，（69.7±3.9）% vs （50.3±35）%，（67.1±4.5）% vs （41.2±3.3）%；均P<0.01\]。 结论: 细胞因子IL-2+IL-12+IL-15+IL-18组合能有效扩增外周血NK细胞并上调其活并性受体的表达、下调抑制性受体的表达，其数量及功能均能满足临床治疗需要。