培养基对小鼠单核巨噬细胞RAW264.7诱导分化破骨细胞的影响

目的 探讨培养基对小鼠单核巨噬细胞RAW264.7向破骨细胞分化的影响。方法 实验分为3组：高糖DMEM培养基组（DMEM组）；高糖DMEM/α-MEM培养基组（DMEM/α-MEM组）；α-MEM培养基组（α-MEM组）。按常规方法采用上述3种培养基进行破骨细胞培养，培养5 d后，采用抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acid phosphatase, TRAP）染色观察各组破骨细胞的形成情况，并采用实时荧光定量PCR方法观察破骨细胞分化相关标志物NFATc-1、c-Fos和TRAF-6 mRNA的表达；培养11 d后采用甲苯胺蓝染色进行骨陷窝面积分析，观察破骨细胞骨吸收功能情况。结果 3组均可以观察到典型的TRAP+破骨细胞。与DMEM组相比，DMEM/α-MEM组、α-MEM组TRAP+破骨细胞数量明显增加（P<0.01），但各组形态略有不同。在骨吸收功能上，与DMEM组和DMEM/α-MEM组相比，α-MEM组骨陷窝面积明显增加（P<0.01）。在破骨细胞分化相关调控因子表达上，与DMEM组相比，α-MEM组NFATc-1、c-Fos 和TRAF-6 mRNA表达显著增加（P<0.01，P<0.05）；DMEM/α-MEM组NFATc-1 mRNA表达显著增加（P<0.01），c-Fos 和TRAF-6 mRNA表达有增加的趋势，但差异无统计学意义；α-MEM组与DMEM/α-MEM组比较差异无统计学意义。结论 高糖DMEM培养基、高糖DMEM/α-MEM培养基、α-MEM培养基均可用于小鼠单核巨噬细胞RAW264.7诱导分化破骨细胞的实验；从破骨细胞数量、状态及功能来看，α-MEM培养基更适合做为破骨细胞分化培养基。

Effects of different media on osteoclast differentiation induced by RAW264.7 cells