Krüppel样因子4基因干扰对RAW264.7细胞凋亡和吞噬的影响

目的 应用RNA干扰技术沉默小鼠RAW264.7巨噬细胞Krüppel样因子4(KLF4)基因,建立稳定干扰细胞株,观察其对细胞增殖、凋亡和吞噬活性的影响.方法 针对小鼠KLF4基因设计合成重组KLF4 shRNA质粒,脂质体法将重组质粒转染至RAW264.7细胞,经G418筛选后获得稳定表达细胞株.Western blot法检测细胞中KLF4蛋白的表达；CCK-8法检测细胞增殖活性；AnnexinV-FITC/PI双染色法检测细胞的凋亡情况；荧光素标记的大肠杆菌结合流式细胞仪检测细胞的吞噬活性.结果 KLF4 shRNA能明显抑制RAW264.7细胞的KLF4蛋白的表达,抑制率76％以上；从第3天开始,shKLF4组细胞的生长速度明显低于NC组(转染阴性质粒pGPU6/GFP/Neo-NC)(P ＜0.05)；WT组(野生型RAW264.7)、NC组和shKLF4组的细胞凋亡率分别为:1.73％、6.85％和12.76％,shKLF4组明显高于NC组(P＜0.05)；各组细胞的平均荧光强度分别为:WT组(122.0±2.80)、NC组(48.97±5.69)和shKLF4组(80.10 +4.61),与NC组相比,shKLF4组的细胞吞噬活性明显增高(P＜0.05).结论 成功构建了稳定干扰KLF4基因表达的RAW264.7巨噬细胞株,KLF4下调能够明显抑制RAW264.7细胞增殖,促进细胞凋亡,增强细胞的吞噬活性.