| 携EGFP的人Synoviolin基因慢病毒表达载体的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 陈钢,张绍祥,岳娟娟,杨星,张正治.携EGFP的人Synoviolin基因慢病毒表达载体的构建与鉴定[J].免疫学杂志,2010(5). |
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| 作者姓名： | 陈钢 张绍祥 岳娟娟 杨星 张正治 |
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| 作者单位： | 第三军医大学基础医学部中心实验室;第三军医大学检验系药理学教研室;解放军第324医院肝胆外科; |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(30672122) |
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| 摘 要： | 目的构建携EGFP的人Synoviolin基因慢病毒表达载体。方法应用基因重组手段,SalⅠ/NotⅠ双酶切质粒pIRES2-EGFP-syno,得到含EGFP和人Synoviolin的基因片段,将其亚克隆至入门载体pENTR1A的多克隆位点内得到入门质粒pENTR1A-syno-egfp。采用LR重组酶将pENTR1A-syno-egfp和目的载体pLenti4/TO/V5-DEST进行重组反应,形成慢病毒表达载体pLenti4/TO/V5-DEST-syno-egfp。将pLenti4/TO/V5-DEST-syno-egfp与包装质粒混合,利用脂质体共转染293FT细胞,包装产生慢病毒,以293FT细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度。结果PCR,酶切及测序结果表明慢病毒表达载体pLenti4/TO/V5-DEST-syno-egfp构建成功,转染后的293FT细胞在荧光显微镜下观察可见强绿色荧光。包装的慢病毒原液滴度为1×10~8TU/ml。结论成功构建了EGFP和Synoviolin基因共表达的慢病毒表达载体,为Synoviolin基因的功能研究提供了高效稳定的转基因技术平台。
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| 关 键 词： | Synoviolin 绿色荧光蛋白 慢病毒表达载体 |
Construction and identification of lentiviral expression vector containing human Synoviolin gene and enhanced green fluorescent protein gene |
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| CHEN Gang,ZHANG Shaoxiang,YUE Juanjuan,YANG Xin,ZHANG Zhengzhi Central Laboratory.Construction and identification of lentiviral expression vector containing human Synoviolin gene and enhanced green fluorescent protein gene[J].Immunological Journal,2010(5). |
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| Authors: | CHEN Gang ZHANG Shaoxiang YUE Juanjuan YANG Xin ZHANG Zhengzhi Central Laboratory |
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| Affiliation: | CHEN Gang,ZHANG Shaoxiang,YUE Juanjuan,YANG Xin,ZHANG Zhengzhi Central Laboratory,Department of Basic Medicine,Third Military Medical University,Chongqing 400038,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Synoviolin EGFP Lentiviral expression vector |
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