金属螯合亲和层析介质用于六聚组氨酸融合蛋白的纯化研究 |
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引用本文: | 李淑娟,孙永亮,胡道道,陈超,崔亚丽.金属螯合亲和层析介质用于六聚组氨酸融合蛋白的纯化研究[J].生物工程学报,2007,23(5):941-946. |
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作者姓名: | 李淑娟 孙永亮 胡道道 陈超 崔亚丽 |
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作者单位: | 1. 西北大学生物芯片研发中心(暨国家微检测系统工程技术研究中心),西安,710069 2. 陕西师范大学化学与材料科学学院,西安,710062 |
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基金项目: | 国家高技术研究发展计划(863计划) |
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摘 要: | 以Sepharose CL-6B为载体,环氧氯丙烷为活化剂,羧甲基天冬氨酸(CM-Asp)为螯合配基制备载有Co2 的金属螯合亲和层析介质Co-CM-Asp-Sepharose,并将其用于六聚组氨酸融合蛋白的纯化研究。对纯化200μL细胞裂解液中靶蛋白所需Co-CM-Asp-Sepharose介质用量,Co-CM-Asp-Sepharose与细胞裂解液的孵育时间,介质清洗条件及靶蛋白洗脱时所需咪唑浓度等进行了优化。比较了Co-CM-Asp-Sepharose与Ni-NTA-Agarose(Qiagen公司)两种螯合介质对融合蛋白的纯化效果,开展了从5mL细胞裂解液中放大规模纯化融合蛋白的研究,并通过Bradford法测定了Co-CM-Asp-Sepharose对CD155D1蛋白的纯化量。结果表明:对200μL细胞裂解液纯化体系,Co-CM-Asp-Sepharose(50%悬浮液)的优选体积为60μL,最佳孵育时间为30min,洗脱液最佳咪唑浓度为200mmol/L,纯化得到融合蛋白的量约为200μg。介质用量放大为1.5mL(50%悬浮液)对CD155D1蛋白的纯化量可达4.6mg。与商品化Ni-NTA-Agarose相比,本介质具有选择性好,清洗条件简单,得到的靶蛋白纯度高等优点。
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关 键 词: | 羧甲基天冬氨酸 金属螯合亲和层析 纯化 多聚组氨酸融合蛋白 |
文章编号: | 1000-3061(2007)05-0941-06 |
修稿时间: | 2006-12-25 |
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