用电镜放射自显影术研究TMV-RNA在烟叶细胞中的复制

在放线菌素D(AMD)抑制细胞RNA合成时，用3H-尿嘧啶核苷标记TMV侵染的和健康的烟草叶片，经固定，包埋，切片，RNA酶处理及放射自显影后，在电镜下观察。结果表明，3H-尿嘧啶核苷向病毒基因组或其复制中间体的掺入主要发生在细胞核内，叶绿体内有少量掺入，线粒体内未发现有掺入。因此认为TMV—RNA的合成主要是在缅胞核内进行的。切片如先经蛋白酶和RNA酶处理，再进行放射自显影，则自显影上的银粒几乎全部消失。从超薄切片后的剩余样品取小样，用酚一SDS法和Serva纤维素柱层析，从TMV侵染的烟叶中分离到了抗RNA酶的’H—ds—RNA。从而推测复制中间体在体内很可能主要是单链的，其复制过程很可能不经过双链复制型(RF)。提取到的’H一‘is—RNA：,可能是提取过程中的人为产物。