| 暗黑鳃金龟气味结合蛋白HparOBP15a基因的克隆及功能分析 |
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| 引用本文： | 房迟琴,张鑫鑫,刘丹丹,李克斌,张帅,曹雅忠,樊东,尹姣.暗黑鳃金龟气味结合蛋白HparOBP15a基因的克隆及功能分析[J].昆虫学报,2016(3):260-268. |
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| 作者姓名： | 房迟琴 张鑫鑫 刘丹丹 李克斌 张帅 曹雅忠 樊东 尹姣 |
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| 作者单位： | 1. 东北农业大学农学院,哈尔滨150030;中国农业科学院植物保护研究所,植物病虫害生物学国家重点实验室,北京100193;2. 中国农业科学院植物保护研究所,植物病虫害生物学国家重点实验室,北京100193;3. 东北农业大学农学院,哈尔滨,150030 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31572007 |
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| 摘 要： | 【目的】暗黑鳃金龟Holotrichia parallela通过气味结合蛋白(odorant binding protein,OBP)识别性信息素和植物挥发物准确而迅速地定位配偶、寄主植物。本研究通过克隆暗黑鳃金龟气味结合蛋白15a(Hpar OBP15a)基因,解析该基因的编码蛋白特征、组织表达模式及与寄主植物气味等化合物的结合特性方面的研究,为阐明暗黑鳃金龟基于嗅觉识别的寄主植物选择机理奠定理论基础。【方法】根据暗黑鳃金龟成虫触角转录组测序的结果,利用RT-PCR克隆了Hpar OBP15a基因;Real-time PCR方法分析了该基因在成虫不同部位的表达量差异;荧光竞争结合测定了Hpar OBP15a蛋白和58种候选化合物的结合特征。【结果】暗黑鳃金龟Hpar OBP15a基因全长534 bp,编码147个氨基酸,Gen Bank登录号为AK1834747。Hpar OBP15a在触角中特异表达,且在雌虫触角中表达量显著高于雄虫。在被测的58种化合物中,Hpar OBP15a与46种气味化合物具有较好的亲和性,其中与十二烷、十二醇结合能力最强,其解离常数分别为8.5和11.3μmol/L;同时,对性信息素(L-异亮氨酸甲酯和R-芳樟醇)也有一定的结合能力(解离常数分别为21.0和18.5μmol/L)。【结论】Hpar OBP15a具有广泛的气味结合谱,其中对榆树挥发物十二烷的结合能力最强,因此该蛋白可能在暗黑鳃金龟对榆树的定位过程中具有重要作用。
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| 关 键 词： | 暗黑鳃金龟 气味结合蛋白 组织表达 蛋白纯化 荧光竞争结合实验 |
Cloning and functional analysis of an odorant-binding protein HparOBP15a gene from Holotrichia parallela (Coleoptera: Melolonthidae) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Holotrichia parallela odorant binding protein tissue expression protein purification fluorescent competitive binding assay |
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