| 实时荧光定量PCR技术快速检测志贺氏菌 |
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| 引用本文： | 戴陈伟,童 琳,武昌俊,许 勇,李 舜,朱倩云,蔡 标.实时荧光定量PCR技术快速检测志贺氏菌[J].食品安全质量检测技术,2019,10(23):8037-8041. |
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| 作者姓名： | 戴陈伟 童 琳 武昌俊 许 勇 李 舜 朱倩云 蔡 标 |
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| 作者单位： | 安徽省医学科学研究院,安徽省医学科学研究院,安徽省医学科学研究院,安徽省医学科学研究院,安徽省医学科学研究院,安徽省医学科学研究院,安徽省医学科学研究院 |
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| 基金项目： | 安徽省十三五医疗卫生重点专科建设项目(皖卫科教[2017]30号)、2018年度安徽省卫计委科研计划项目(2018YK008) |
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| 摘 要： | 目的 建立实时荧光定量PCR法快速检测志贺氏菌。方法 提取志贺氏菌基因组为模板扩增virA基因片段, 将目的片段连接至pMD19-T载体得到重组质粒, 转化大肠杆菌DH5α感受态细胞, 验证所得到的重组质粒, 以紫外分光光度计测量重组质粒吸光度值A260, 并换算为质粒拷贝数后作梯度稀释得到不同浓度的质粒标准品; 进行荧光定量PCR分析并通过特异性、灵敏性实验以验证该方法的可行性。结果 重组质粒标准品浓度在103~108 copies/μL范围内线性关系良好(r2>0.99), 实时荧光定量PCR检测志贺氏菌时出现良好的扩增曲线, 鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均未出现扩增曲线。志贺氏菌的检出限为100 CFU/mL。 结论 本方法便捷、高效、可靠, 可用于志贺氏菌的快速定性定量检测。
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| 关 键 词： | 志贺氏菌 实时荧光定量PCR 标准曲线 特异性 灵敏性 |
| 收稿时间： | 2019/9/3 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2019/11/27 0:00:00 |
Rapid detection of Shigella by real-time fluorescence quantitative PCR |
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| DAI Chen-Wei,TONG Lin,WU Chang-Jun,XU Yong,Li Shun,ZHU Qian-Yun and CAI Biao.Rapid detection of Shigella by real-time fluorescence quantitative PCR[J].Food Safety and Quality Detection Technology,2019,10(23):8037-8041. |
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| Authors: | DAI Chen-Wei TONG Lin WU Chang-Jun XU Yong Li Shun ZHU Qian-Yun and CAI Biao |
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| Affiliation: | Anhui Academy of Medical Sciences,Anhui Academy of Medical Sciences,Anhui Academy of Medical Sciences,Anhui Academy of Medical Sciences,Anhui Academy of Medical Sciences,Anhui Academy of Medical Sciences and Anhui Academy of Medical Sciences |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Shigella real-time fluorescent quantitative PCR standard curve specificity sensitivity |
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