基于Staphylococcus carnosus来源的D-果糖-1,6-二磷酸醛缩酶在大肠杆菌合成稀有酮糖的研究

将Staphylococcus carnosus来源的Fru AS.car醛缩酶基因fda和大肠杆菌来源的Yqa B磷酸酶基因yqa B分别插入到表达质粒CDFDuet-1得到重组质粒CDF-fda-yqa B,并转化该重组质粒到大肠杆菌BL21Star(DE3)。以同时过量表达Fru AS.car醛缩酶和Yqa B磷酸酶的大肠杆菌BL21Star(DE3)/CDFDuet-1-fda-yqa B作为发酵菌株,以葡萄糖为碳源通过糖酵解途径在胞内生成供体磷酸二羟基丙酮,分别在培养基中添加丙醛、丁醛为受体,进行相应稀有酮糖的合成,从而成功地将羟醛缩合反应在大肠杆菌中实现,酮糖产物用HPLC检测并进行纯化和1H NMR鉴定。最后,以13C同位素全标记的葡萄糖为碳源,添加丙醛为受体进行了同位素标记实验,证实了产物从DHAP而来的3个碳原子最终来自葡萄糖。

Production of rare ketoses in Escherichia coil with D-fructose-1,6-bisphosphate aldolase from Staphylococcus carnosus