CRISPR/Cas9介导的低产尿素黄酒酵母工程菌的构建 Metabolic engineering of Chinese rice wine Saccharomyces cerevisiae with reduced urea production by CRISPR/Cas9 system期刊界 All Journals 搜尽天下杂志传播学术成果专业期刊搜索期刊信息化学术搜索

CRISPR/Cas9介导的低产尿素黄酒酵母工程菌的构建

作者单位：	;1.工业生物技术教育部重点实验室(江南大学);2.粮食发酵工艺与技术国家工程实验室(江南大学);3.江南大学生物工程学院;4.浙江树人大学生物与环境工程学院

摘要：	通过代谢工程改造构建低产尿素的酿酒酵母工程菌,从根源上减少黄酒发酵液中尿素的含量及氨基甲酸乙酯(ethyl carbamate,EC)的形成。该研究利用融合PCR构建DUR3过表达组件"HOL-PGK1p-DUR3-PGK1tHOR",通过CRISPR/Cas9介导的基因组编辑技术转化酿酒酵母S. cerevisiae NaDUR1,2-Δcar1,在敲除CAR1和过表达DUR1,2基因的基础上过表达DUR3基因,获得工程菌S. cerevisiae NaDUR1,2/DUR3-Δcar1。实验室黄酒发酵实验结果表明,与亲本菌株S. cerevisiae Na相比,工程菌S. cerevisiae NaDUR1,2/DUR3-Δcar1所酿黄酒发酵液中尿素含量降低了92. 1%,EC含量降低了58. 6%;与出发菌株S. cerevisiae NaDUR1,2-Δcar1相比,工程菌S. cerevisiae NaDUR1,2/DUR3-Δcar1所酿黄酒发酵液中尿素含量降低了43. 4%,EC含量降低了16. 2%。过表达DUR3的工程菌S. cerevisiae NaDUR1,2/DUR3-Δcar1具有"尿素吸收"的能力,减少EC的形成。借助CRISPR/Cas9系统,构建的酵母工程菌无外源抗性基因的引入,具有工业化应用的潜在可能性。
关键词：	黄酒酿酒酵母尿素氨基甲酸乙酯 CRISPR/Cas9
Metabolic engineering of Chinese rice wine Saccharomyces cerevisiae with reduced urea production by CRISPR/Cas9 system

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