| GI/GII型诺如病毒两联装甲RNA标准样品的研制 |
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| 引用本文： | 王鸣秋,杨俊,常雨桐,张涛,刘丽娟.GI/GII型诺如病毒两联装甲RNA标准样品的研制[J].现代食品科技,2021,37(3):286-293. |
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| 作者姓名： | 王鸣秋 杨俊 常雨桐 张涛 刘丽娟 |
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| 作者单位： | 湖北省食品质量安全监督检验研究院,湖北武汉 430075;中国检验检疫科学研究院,北京 100176;中国检验检疫科学研究院,北京 100176;湖北省食品质量安全监督检验研究院,湖北武汉 430075 |
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| 基金项目： | 湖北省重点研发计划项目（2020BCA091)；中国检验检疫科学研究院基本科研业务费项目（2019JK017） |
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| 摘 要： | 针对目前缺乏适配多项检测标准、稳定、安全的诺如病毒RNA标准样品的问题，研制基于MS2噬菌体内含常见GI/GII型诺如病毒检测靶标两联装甲RNA标准参考样品。人工合成MS2噬菌体成熟酶基因、衣壳蛋白基因、包装位点及GI/GII型诺如病毒靶标基因，克隆于表达载体pET-28a(+)中，构建重组质粒pET-MS2-NoV。经大肠杆菌BL21诱导表达，先后利用PEG6000、酶处理和丙烯葡聚糖凝胶层析柱纯化表达产物。SDS-PAGE和透射电镜鉴定产物大小及结构，荧光定量PCR检测有无残留核酸。之后对纯化的病毒样颗粒（Virus-like particles，VLPs）开展定值、均匀性和短期稳定性研究。SDS-PAGE结果表明重组质粒在BL21中表达出了目的蛋白，大小在10~15 ku之间，与预期一致；纯化后的VLPs无杂蛋白和残留核酸；透射电镜下呈结构完整、大小均一的球状，直径约25 nm。纯化后AR-NoV中GI型和GII型靶标定值结果分别为(4.04±0.62)×107 copies/μL和(6.16±0.30)×107 copies/μL。单因素方差检验证实样品均一性良好，F
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| 关 键 词： | 诺如病毒 两联装甲RNA MS2噬菌体 标准样品 实时荧光定量RT-PCR |
| 收稿时间： | 2020/9/4 0:00:00 |
Preparation of Coupled Armored RNA Reference Material for Norovirus GI/GII |
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| WANG Ming-qiu,YANG Jun,CHANG Yu-tong,ZHANG Tao,LIU Li-juan.Preparation of Coupled Armored RNA Reference Material for Norovirus GI/GII[J].Modern Food Science & Technology,2021,37(3):286-293. |
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| Authors: | WANG Ming-qiu YANG Jun CHANG Yu-tong ZHANG Tao LIU Li-juan |
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| Affiliation: | (1.Hubei Provincial Institute for Food Supervision and Test, Wuhan 430075, China)
(2.Chinese Academy of Inspection and Quarantine, Beijing 100176, China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Norovirus coupled armored RNA MS2 bacteriophage reference material real-time RT-PCR |
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