大肠杆菌和枯草芽孢杆菌来源γ-谷氨酰转肽酶的克隆表达和性质比较 |
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引用本文: | 房 鑫,田思思,姚 忠,王浩绮,周 治,熊 强,孙 芸,韦 萍.大肠杆菌和枯草芽孢杆菌来源γ-谷氨酰转肽酶的克隆表达和性质比较[J].高校化学工程学报,2014(2):282-289. |
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作者姓名: | 房 鑫 田思思 姚 忠 王浩绮 周 治 熊 强 孙 芸 韦 萍 |
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作者单位: | 南京工业大学食品与轻工学院; |
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基金项目: | 江苏省高校自然科学研究重大基金资助项目(10KJA530014);江苏省科技支撑计划(农业)基金资助项目(SBE 2012399);江苏省自然科学基金资助项目(BK2012825);国家自然科学基金(21206072) |
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摘 要: | γ-谷氨酰转肽酶(GGT)是生物体内谷氨酰循环的关键酶,在生物有机合成领域具有重要的应用价值。今建立了大肠杆菌和枯草芽孢杆菌GGT的克隆、重组及诱导表达方法。在此基础上,分别考察了重组大肠杆菌GGT(rE_GGT)和重组枯草芽孢杆菌GGT(rB_GGT)的催化特性和稳定性。结果表明,rE_GGT对供体对硝基苯胺(GpNA)的亲和力(Km)优于rB_GGT,但rB_GGT的催化常数(kcat)高达3.48×105 s?1,是rE_GGT的20倍。稳定性研究表明,rE_GGT在pH 6~9和T45℃条件下的稳定性明显优于rB_GGT;但当温度超过45℃时,rB_GGT的稳定性更佳。通过对rE_GGT和rB_GGT的氨基酸组成及其大、小亚基界面相互作用力的分析表明,rE_GGT大小亚基间疏水键的数目明显多于rB_GGT,有助于稳定其四级结构,使其在中低温下具有良好的稳定性;而rB_GGT氨基酸组成中荷电残基和芳香族残基的比例较高,可有效维持其二级结构的稳定性。
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关 键 词: | γ-谷氨酰转肽酶 重组 热失活 反应动力学 稳定性 |
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