| 摘 要： | 目的制备抗GⅡ.17型诺如病毒(noroviruses,No V)单克隆抗体,并鉴定其生物学特性。方法将小鼠的骨髓瘤细胞SP2/0与经GⅡ.17 No V VLPs抗原免疫的BALB/c小鼠的脾细胞进行融合,通过替代性的中和试验筛选出阳性杂交瘤细胞,制备单克隆抗体并进行纯化,ELISA法检测单克隆抗体效价,SDS-PAGE法检测单克隆抗体纯度,BCA法检测单克隆抗体浓度,Biacore法检测单克隆抗体亲和力,亚型试剂鉴定单克隆抗体亚型,并进行各单克隆抗体与不同型NOV VLPs-唾液人类组织血型抗原(histo-blood group antigen,HBGA)的交叉中和试验,单抗与不同型NOV VLPs结合能力的Western blot鉴定。结果筛选出3株具有中和活性的细胞株,分别命名为E12、B7、H7,纯化后的3株单克隆抗体效价均在106以上,浓度分别为6.932、2.662和2.371 mg/ml,亲和力常数KD均为10-9 mol/L,单克隆抗体E12的纯度在93%以上,属于Ig G2a亚型,单克隆抗体B7和H7的纯度分别在98%以上,属于Ig G1亚型。3株单克隆抗体仅对GⅡ.17型No V具有中和活性,对其他型的No V无中和活性,且与8种抗原均发生结合反应,但E12对8种抗原的结合能力较B7、H7差。结论已成功制备出抗GⅡ.17 No V的单克隆抗体,为进一步研究该病毒的生物学特性及疫苗的开发奠定了基础。
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