| 来源于Bacillus subtilis的中性植酸酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 |
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| 引用本文： | 姚斌,袁铁铮,王元火,操时树,王亚茹,史秀云,范云六.来源于Bacillus subtilis的中性植酸酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达[J].生物工程学报,2001,17(1):11-15. |
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| 作者姓名： | 姚斌 袁铁铮 王元火 操时树 王亚茹 史秀云 范云六 |
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| 作者单位： | 1. 中国农业科学院饲料研究所,
2. 中国农业科学院生物技术中心, |
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| 基金项目： | 国家高技术发展与计划资助项目(101-03-05-01). |
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| 摘 要： | 通过ＰＣＲ的方法从Bacillus subtilis基因组中克隆了中性植酸酶基因nphy，ＤＮＡ全序列分析表明其结构基因全长１１５２个核苷酸（编码３８３个氨基酸），５′端有一编码２６个氨基酸的信号肽序列。去除信号肽编码序列的nphy克隆到大肠杆菌ＩＰＴＧ诱导表达载体pTYB40上，在大肠杆菌中得到了高效表达，表达量达到大肠杆菌可溶性蛋白的４０％以上，表达产物具有生物学活性，证实了克隆到的中性植酸酶的基因有正常的生物学功能。
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| 关 键 词： | 中性植酸酶 基因克隆 高效表达 大肠杆菌 |
| 文章编号： | 1000-3061(2001)01-0011-05 |
| 修稿时间： | 2000年5月15日 |
Cloning of Neutral Phytase Gene nphy from Bacillus subtilis and its Expression in Escherichia coli |
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| B Yao,T Z Yuan,Y H Wang,S S Cao,Y R Wang,X Y Shi,Y L Fan.Cloning of Neutral Phytase Gene nphy from Bacillus subtilis and its Expression in Escherichia coli[J].Chinese Journal of Biotechnology,2001,17(1):11-15. |
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| Authors: | B Yao T Z Yuan Y H Wang S S Cao Y R Wang X Y Shi Y L Fan |
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| Affiliation: | Feed Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081, China. yaobin@public3.bta.net.cn |
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| Abstract: | The gene encoding the neutral phytase nphy was cloned from Bacillus subtilis by polymerase chain reaction (PCR). Nucleotide sequence analysis of nphy revealed the presence of an open reading frame of 1152 bp coding for 383 aa. The start codon was followed by a sequence coding for a putative signal peptide of 26 aa in length. The nphy without original signal peptide encoding sequence was cloned into E. coli expression plasmid pTYB40. The result of SDS-PAGE of the phytase expressed in E. coli showed that the nphy had been overexpressed. The expressed phytase was over 40% of the total soluble protein of E. coli, and has normal bioactivity. |
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| Keywords: | neutral phytase gene cloning overexpression |
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