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人工合成的黑曲霉NRRL3135菌株植酸酶基因在毕酵母系统中的高效表达
引用本文:贝锦龙,陈庄,等.人工合成的黑曲霉NRRL3135菌株植酸酶基因在毕酵母系统中的高效表达[J].生物工程学报,2001,17(3):254-258.
作者姓名:贝锦龙  陈庄
作者单位:[1]中山大学生物防治国家重点实验室,生物医药中心,广州510275 [2]广东省农业科学院畜牧研究所,广州510650
基金项目:广东省自然科学基金(990508);广东省重点科技项目(2KM02505G)基金资助.
摘    要:本文以黑曲霉(Aspergillus niger)NRRL3135菌株植酸酶基因为对象,通过基因人工合成的方法去除了该基因的内含子与信号肽编码序列,换用在毕赤酵母(Pichia pastoris)中使用频率较高的密码子以优化其表达。该人工合成植酸酶基因(PhyA-as)以N端融合的方式正确插入到毕赤酵母表达载体pPICZαA。通过电击将重组表达载体整合人酵母染色体DNA中得到重组转化子。SDS-PAGE结果与表达产物酶这性质研究表明植酸酶得到分泌表达,且与天然产物性质基本一致。筛选得若干株高产基因工程菌,其中SPAN-Ⅲ菌株达到了在摇庆培养条件下,每毫升发酵液产生165000u植酸酶的水平,基本满足工业化生产的要求。

关 键 词:基因人工合成  植酸酶基因  phyA-as  毕赤酵母表达系统
文章编号:1000-3061(2001)03-0254-05
修稿时间:2000年11月13

Overexpression of Artificial Synthetic Gene of Aspergillus niger NRRL3135 Phytase in Pichia pastoris
J L Bei,Z Chen,L Yang,L Liao,X Z Wang,Z Y Jiang.Overexpression of Artificial Synthetic Gene of Aspergillus niger NRRL3135 Phytase in Pichia pastoris[J].Chinese Journal of Biotechnology,2001,17(3):254-258.
Authors:J L Bei  Z Chen  L Yang  L Liao  X Z Wang  Z Y Jiang
Affiliation:Biopharmaceutical Center, Zhongshan University, GuangZhou 510275, China. ls46@zsu.edu.cn
Abstract:The phytase gene of Aspergillus niger NRRL3135 was modified with a deletion of intron and signal coding sequence. Then, according to the codon preference of Pichia pastoris, modified phyA gene was artificially synthesized and cloned into expression vector of pPICZ alpha A. The recombinant plasmid was transformed into chromosome of Pichia pastoris X-33 strain by electroporation. The results of SDS-PAGE and enzymatic kinetic analysis proved that the recombinant phytase was secreted into culture medium with nearly same character of natural phytase. After screening for high level productive yeast strains, a strain named SPAN-III produced recombinant phytase with 165,000 u/mL under the condition of shake cultivation. It will satisfy the demand for industrialized production in some degree.
Keywords:artificial synthesis of gene  phytase gene of \%phyA\|as\%  gene cloning  \%Pichia pastoris\%
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