| 猪TRIM56敲除细胞系的构建及在增殖PRRSV疫苗毒株中的应用 |
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| 引用本文： | 张秀婷,吴香菊,齐静,丛晓燕,李均同,陈大全,姜宁朋,杜以军.猪TRIM56敲除细胞系的构建及在增殖PRRSV疫苗毒株中的应用[J].畜牧与兽医,2023(11):117-123. |
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| 作者姓名： | 张秀婷 吴香菊 齐静 丛晓燕 李均同 陈大全 姜宁朋 杜以军 |
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| 作者单位： | 1. 烟台大学药学院;2. 山东省农业科学院畜牧兽医研究所/山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室;3. 山东省科技服务发展推进中心 |
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| 基金项目： | 山东省自然科学基金项目(ZR2020QC196,ZR2020KC005,ZR2021MC139,ZR2021ZD08)；;国家自然科学基金项目(32102710)；;国家重点研发计划(2021YFD1800300)； |
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| 摘 要： | 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建1株猪TRIM56基因敲除的PAM-KNU细胞系，并探究其在增殖猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)疫苗毒株中的应用。根据猪TRIM56基因组外显子区域设计合成2对特定的向导RNA引物，将引物磷酸化、退火并连接至Px459M和EZ-Guide-XH载体构建敲除质粒Px459M-sTRIM56-KO;将敲除质粒转染PAM-KNU细胞，经嘌呤霉素筛选、有限稀释法筛选获得单克隆细胞并扩大培养；通过RT-PCR、测序及Western blot筛选鉴定，最终获得了敲除细胞系sTRIM56-KO-PAM-KNU;将PRRSV R98疫苗株感染野生型细胞及敲除细胞系，利用real-time RT-PCR、半数组织培养感染量(TCID50)以及Western blot检测PRRSV增殖情况。结果显示，TRIM56敲除细胞系构建成功，该敲除细胞系中sTRIM56基因编码区第929～2 120位1 192个碱基缺失，未检测到sTRIM56...
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| 关 键 词： | 猪TRIM56基因 基因敲除 PAM-KNU细胞 猪繁殖与呼吸综合征病毒 |
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